精氨白桦脂酸的制备及其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:制备精氨白桦脂酸,并考察其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。方法:以精氨酸为增溶载体,采用共研磨法将等摩尔比的白桦脂酸与精氨酸制成精氨白桦脂酸。采用粉末X射线衍射法、红外光谱法、差示扫描量热法对精氨白桦脂酸进行表征;比较白桦脂酸和精氨白桦脂酸的溶解度;采用MTT法检测15、30、60、120μg/mL的白桦脂酸、精氨白桦脂酸和5氟尿嘧啶(5-FU)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果:所制精氨白桦脂酸为不同于精氨酸与白桦脂酸物理叠加的新的物相,其中白桦脂酸的羧基与精氨酸中氨基进行了成盐反应,其未见明显的熔点峰。白桦脂酸几乎不溶于水,精氨白桦脂酸水溶液中白桦脂酸的溶解度为50.72μg/mL。与白桦脂酸比较,精氨白桦脂酸对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率明显升高(P<0.05),且与5-FU比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功制得溶解度较好的精氨白桦脂酸,其对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用。

蒌慈散结方对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231及BT549的生长抑制作用及其机制研究

目的观察蒌慈散结方对三阴性乳腺癌细胞的干预效应,并探讨其发挥作用的可能靶点和机制。方法将不同类型三阴性乳腺癌细胞分别分为蒌慈散结方组及空白对照组,给予蒌慈散结方或PBS处理,观察药物干预后细胞形态变化,检测细胞活力、细胞凋亡情况,分析干预后细胞转录组及相关蛋白的表达变化。结果蒌慈散结方组乳腺癌细胞密度降低,细胞聚集,体积缩小,细胞碎片增多,细胞的正常边界消失,细胞质萎缩;与空白对照组相比,蒌慈散结方组三阴性乳腺癌细胞增殖减少,细胞凋亡增加(P<0.05)。转录组分析显示,蒌慈散结方干预后,差异基因富集于细胞因子相互作用、JAK/Stat等信号通路;Western Blot检测发现,蒌慈散结方干预后Stat3蛋白表达明显降低(P<0.05),Bim、Cleaved caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论蒌慈散结方可能通过下调Stat3蛋白,促进促凋亡蛋白Bim和cleaved caspase-3表达增加而诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡。

藤黄酸下调蛋白C受体表达杀伤三阴性乳腺癌干细胞的作用机制

背景:藤黄酸对乳腺癌具有很强的细胞毒性,可有效杀伤三阴性乳腺癌干细胞,但潜在的机制尚不清楚。目的:探讨藤黄酸对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:使用PharmMapper数据库预测藤黄酸的靶点蛋白,使用String网站构建各药物靶点蛋白互作网络关系,使用Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络,通过R语言软件对潜在靶点进行KEGG信号通路富集分析。采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力的影响,筛选适宜的作用浓度。采用细胞球培养法富集MDA-MB-231细胞干细胞,经过不同浓度(0,0.5,1.0,2.0μmol/L)藤黄酸作用24 h,TUNEL荧光染色与流式细胞仪检测干细胞凋亡,qPCR与Western blot检测蛋白C受体表达,Western blot检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达;将干细胞分4组培养:空白对照组(干细胞不做任何处理)、siRNA-NC组、siRNA-蛋白C受体组和siRNA-蛋白C受体+PI3K激动剂组,培养36 h后,采用Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与结论:(1)网络药理学发现,三阴性乳腺癌干细胞标志物蛋白C受体是藤黄酸的作用靶点之一;KEGG富集分析涉及细胞凋亡、上皮生长因子受体、RAS和PI3K-AKT信号通路等;(2)CCK-8检测结果显示,藤黄酸可抑制MDA-MB-231细胞活力,半数抑制浓度IC50值为(1.18±0.34)μmol/L,因此后续实验选择浓度0.5,1.0,2.0μmol/L;(3)TUNEL荧光染色和流式细胞术检测证实,藤黄酸以剂量依赖的方式诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡(P <0.05);qPCR和Western blot检测证实,藤黄酸可下调蛋白C受体mRNA和蛋白表达,下调Caspase-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,上调Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05);siRNA-蛋白C受体转染实验也进一步证实,敲低三阴性乳腺癌干细胞蛋白C受体表达可提升Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05)、下调PI3K/AKT信号通路磷酸化水平(P <0.05),而应用PI3K激动剂740 Y-P能够降低Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05)、提升p-PI3K和p-AKT的磷酸化水平(P <0.05),一定程度上改善细胞凋亡情况;(4)结果表明,藤黄酸可能通过下调蛋白C受体来发挥三阴性乳腺癌及干细胞杀伤及诱导凋亡作用,进一步的分子机制可能和PI3K/AKT信号通路抑制有关。

小檗碱对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨小檗碱(BBR)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、迁移、凋亡的影响及其可能机制。方法 确定加入BBR 0、25、50μmol/L为不同分组实验浓度,观察加入不同浓度BBR对MDA-MB-231细胞生长形态的影响;克隆形成实验检测BBR对细胞增殖能力的影响;划痕实验、Transwell迁移实验检测BBR对细胞迁移能力的影响;Annexin V/PI染色检测BBR对细胞凋亡率的影响;Western blot实验检测BBR作用后P65、磷酸化P65、凋亡相关蛋白Caspase-3的蛋白表达水平改变。结果 加入BBR后,光学显微镜下观察MDA-MB-231细胞的生长形态明显发生改变;克隆形成实验发现BBR能够浓度依赖性的抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);Transwell实验结果与划痕实验都证明BBR能够抑制细胞迁移(P<0.05);Annexin V/PI染色结果显示BBR浓度增加后细胞凋亡率也随之增加(P<0.05);Western blot实验检测结果显示BBR作用后P65表达差异无统计学意义(P>0.05),但磷酸化P65蛋白表达水平被抑制(P<0.05),并且凋亡相关蛋白Caspase-3裂解活化增加(P<0.05)。结论 BBR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及诱导其凋亡的发生,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。

小檗碱通过SIRT2介导NF-κB乙酰化对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的探讨小檗碱(BBR)对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞凋亡的影响及机制。方法采用细胞增殖毒性实验(CCK-8)检测BBR对MDA-MB-231细胞增殖活性的影响、计算IC_(50),并将0、1/2 IC_(50)、IC_(50)作为后续实验浓度;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BBR作用后MDA-MB-231细胞中促凋亡蛋白BAX、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)的mRNA表达水平,Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2(SIRT2)蛋白、核转录因子NF-κB P65、乙酰化P65、BAX、BCL-2的表达水平;线粒体膜电位实验检测线粒体膜电位变化。结果CCK-8检测结果发现BBR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖活性(P<0.05),24 h的IC_(50)为(92.282±12.297)μmol/L,48 h的IC_(50)为(54.544±6.092)μmol/L;RT-PCR检测结果显示BBR作用后,MDA-MB-231细胞中BAX mRNA表达水平增加(P<0.05),BCL-2 mRNA水平下降(P<0.05);Western blot结果显示BBR降低SIRT2蛋白表达水平(P<0.05)、升高NF-κB(P65)蛋白表达(P<0.05),作为SIRT2底物的P65乙酰化修饰水平上升(P<0.05)、BAX增加(P<0.05)、BCL-2降低(P<0.05);线粒体膜电位随BBR浓度的增加而增加(P<0.05)。结论BBR能够抑制MDA-MB-231细胞的生长,其机制可能是BBR具有潜在的赖氨酸去乙酰转移酶(KDAC)抑制剂作用,抑制SIRT2的表达,改变P65乙酰化水平,诱导MDA-MB-231细胞线粒体途径相关的凋亡发生。

PD-L1单抗加强紫杉醇联合香菇多糖体外抗人乳腺癌MDA-MB-231作用

目的 探讨程序性细胞死亡-配体1(PD-L1)单抗、紫杉醇(PTX)联合香菇多糖(LNT)体外对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的作用。方法 将MDA-MB-231、人外周血单个核细胞(PBMC)和MDA-MB-231+PBMC共培养,随机分为对照组、PTX组、LNT组、MPDL3280A(PD-L1单抗)组、PTX+LNT组和PTX+LNT+MPDL3280A组。采用CCK8检测细胞的活性;流式细胞术检测MHC-I和PD-L1的表达;ELISA试剂盒检测IFN-γ和TNF-α的含量。结果 与对照组相比,PTX组、MPDL3280A组、PTX+LNT组及PTX+LNT+MPDL3280A组显著抑制MDA-MB-231的活性(P<0.01);LNT组和PTX+LNT+MPDL3280A组显著促进PBMC的免疫作用(P<0.05,P<0.01);PTX+LNT+MPDL3280A组显著抑制MDA-MB-231+PBMC共培养MDA-MB-231的活性(0.56±0.16 vs. 0.39±0.13,P<0.05);LNT显著促进MDA-MB-231上PD-L1的表达和PBMC分泌IFN-γ(P<0.05)。结论 PD-L1单抗通过阻断PD-L1与PD-1之间的作用,提高免疫,促进PTX联合LNT的体外抗三阴性乳腺癌作用。

塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响

背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)由于其高侵袭和高转移特性,是目前乳腺癌中预后最差的一种亚型。大量研究表明塞来昔布(celecoxib)具有很好的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤生长、减少肿瘤血管发生,防止肿瘤的早期转移。为了进一步明确塞来昔布与TNBC细胞侵袭活性之间的关系,本实验研究塞来昔布作用下人TNBC细胞MDA-MB-231黏附、迁移及体外侵袭能力的变化,并初步探讨其可能的机制。方法:以不同浓度的塞来昔布(0、40、80、120μmol/L)作用MDA-MB-231细胞24 h后,采用细胞基质黏附实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用细胞划痕实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞平面迁移能力的影响;采用Transwell侵袭小室实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR检测塞来昔布作用前后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况。结果:经80、120μmol/L塞来昔布作用24 h后,MDA-MB-231细胞与基质的黏附能力分别为(50.2±7.3)%和(31.5±2.2)%,与对照组(96.8±10.9)%相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭小室实验结果显示,经80、120μmol/L塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞趋化运动明显减少,穿过人工基底膜的细胞较对照组显著降低(P<0.05)。划痕实验结果显示,经塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞平面迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05)。RT-PCR结果显示,经塞来昔布作用MDA-MB-231细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:塞来昔布能显著地抑制MDA-MB-231细胞黏附、细胞体外的迁移和侵袭能力,该作用可能与抑制MMP-2和MMP-9 mRNA的表达有关。

用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

目的构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系以建立可用于活体成像的三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,体外感染MDA-MB-231细胞,经G418筛选得到稳定细胞系后,通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况,并通过MTT法、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变;此外将细胞接种至雌性BALB/c-nu//nu裸小鼠的右侧第2对乳房垫内,构建乳腺癌原位肿瘤模型。利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况,并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力。结果成功构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的MDA-MB-231细胞系,荧光素酶的活性达到每细胞9689 photons/s,慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型。结论(1)慢病毒以其高效稳定的感染率,应作为标记荧光素酶基因的首选载体;(2)带有荧光素酶的MDA-MB-231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,这将为人三阴性乳腺癌转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台;(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记。

蓝萼甲素通过PI3K/Akt信号通路诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的研究蓝萼甲素(GLA)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法 MTT实验检测GLA对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435s,正常乳腺上皮细胞MCF-10a的增殖抑制活性;倒置显微镜观察GLA对MDA-MB-231细胞的形态的影响;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测GLA诱导MDA-MB-231细胞凋亡;qRT-PCR检测GLA干预后,细胞中Bax、Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平变化;Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达水平变化。结果 GLA呈剂量依赖性抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞生长,IC50分别为5.11、6.32μmol·L^-1;GLA作用MDA-MB-231细胞48 h后,贴壁细胞间隙增大,形态变圆;GLA可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,8μmol·L^-1 GLA作用48 h细胞凋亡率达到61.65%;qRT-PCR和Western blot结果显示,GLA下调MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bcl-xl mRNA和蛋白质水平,上调Bax mRNA和蛋白质水平,下调p-PI3K,p-Akt蛋白水平,PI3K,Akt蛋白水平基本不变。结论 GLA在一定浓度范围内可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导MDA-MB-231细胞凋亡。

追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制

目的基于糖基转移酶β3GnT8探讨追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制。方法通过MTT法观察追毒方对MDA-MB-231耐药细胞增殖的抑制作用,通过转染β3GnT8得到高表达β3GnT8的MDA-MB-231/TAX细胞株,采用Western blot观察糖基转移酶β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,通过凝集素流式细胞术观察转染β3GnT8MDA-MB-231/TAX细胞膜表面β3GnT8的荧光强度。结果追毒方有效成分能明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231耐药细胞的增殖,作用72h抑制率达到50.16%,能有效下调β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,并且β3GnT8的表达与BCRP、P-gp呈正相关。结论追毒方可通过下调糖基转移酶β3GnT8,从而降低耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性。

比卡鲁胺对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响

目的探讨比卡鲁胺对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其可能的机制。方法0、25、50、100μmol/L比卡鲁胺处理人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞的抑制率;流式细胞仪检测比卡鲁胺对MDA-MB-231细胞作用后凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果不同浓度(25、50、100μmol/L)比卡鲁胺处理后,MDA-MB-231细胞增殖能力明显下降,且存在时间、剂量依赖关系。比卡鲁胺可以明显地增加细胞凋亡,细胞周期表现为G0/G1期阻滞(P<0.05)。结论比卡鲁胺可能通过诱导细胞凋亡及抑制细胞周期的机制从而对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖产生抑制作用。

莪术石油醚提取物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转移相关基因影响的体外研究

目的观察莪术石油醚提取物(PECZ)对三阴性乳腺癌细胞增殖、细胞趋化因子及黏附因子的影响,观察其对三阴性乳腺癌细胞转移相关基因的甲基化作用。方法以三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231作为研究对象,采用CCK-8法检测药物对细胞株的增殖抑制作用,RT-PCR法检测药物对黏附因子E-cadherin、E-selectin和趋化因子SDF-1、CXCR4 m RNA表达量的影响,MSHRM法检测药物对黏附因子E-cadherin的启动子甲基化水平的影响。结果(1)与空白对照组零抑制率比较,不同浓度的表阿霉素组(抑制率为47.2%~68.8%)及PECZ组(抑制率为23.8%~80.2%)对细胞增殖均有一定的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)与空白对照组趋化因子和黏附因子的(1±0)表达量比较,300μg/m L浓度的PECZ干预细胞24h后,细胞趋化因子CXCR4 m RNA(0.63±0.07)的表达降低,趋化因子SDF-1 m RNA(1.13±0.21)和细胞黏附因子E-selectin m RNA(2.73±1.92)表达提高,并显著提高细胞黏附因子E-cadherin m RNA(13.35±3.43)的表达,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(3)与空白对照组、低剂量PECZ组100%甲基化率比较,高剂量PECZ组甲基化率为80%~90%,明显降低乳腺癌细胞黏附因子E-cadherin启动子的甲基化水平(P<0.05)。结论莪术石油醚提取物对乳腺癌细胞具有一定的抑制作用,其对细胞转移和侵袭的抑制作用可能是通过上调细胞黏附因子E-cadherin m RNA的表达实现。高浓度莪术石油醚提取物对乳腺癌细胞黏附因子E-cadherin抑癌基因的启动子具有一定的去甲基化作用。

蛇六谷对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭的影响

蛇六谷,又名魔芋,是治疗肿瘤的特色药材之一。名老中医陆德铭教授在乳腺癌术后的治疗中善用蛇六谷配伍抗肿瘤药物,起到化痰软坚、散结解毒作用。为此,本实验采用蛇六谷含药血清,作用于三阴性乳腺癌MDAMB-231细胞,观察蛇六谷对MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭的影响,为临床中药治疗乳腺癌提供实验依据。

高三尖杉酯碱对人三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨高三尖杉酯碱(HHT)对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系MDA-MB-231迁移和侵袭的影响,并初步分析潜在机制。方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞活力。采用EdU结合实验以评估细胞增殖。分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭。采用流式细胞术分析乳腺癌干细胞(BCSC)含量。采用球体形成试验评估MDAMB-231细胞“肿瘤球”形成能力。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Hedgehog(HH)信号通路效应因子Gli1 mRNA和乳腺癌细胞干性指标Oct4、CD44、Sox2和Nanog mRNA的表达。采用蛋白免疫印迹分析上皮间质转化(EMT)标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白以及Gil1蛋白表达。结果 HHT以剂量依赖性的方式降低MDA-MB-231细胞活力(P<0.05)。HHT可抑制BC细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,HHT可下调BC细胞中CD44+/CD24-细胞比例、降低MDA-MB-231细胞形成“肿瘤球”的能力并抑制Oct4、CD44、Sox2和Nanog mRNA表达,提示HHT可抑制MDA-MB-231细胞干性。HHT可通过抑制“肿瘤球”中E-cadherin表达并增加N-cadherin和Vimentin蛋白来可抑制BCSC的EMT。此外,HHT可抑制TNBC中HH/Gli1信号通路活化。同时,HHT能够消除Gli1过表达对TNBC干性和EMT的影响。结论 HHT能够抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,这可能是通过调控HH/Gli1信号通路以抑制TNBC的干性和EMT来实现。

As_2O_3联合衣霉素体外干预对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及作用机制

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)联合衣霉素(TM)体外干预对三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法常规培养MDA-MB-231细胞并随机分为五组。空白对照组不作处理,对照组采用DMEM培养基培养,As_2O_3组、TM组分别用不同浓度(0.1、0.5、1、10、20、40、60、80μmol/L)As_2O_3、(0.1、0.5、1、10、20、40、60、80μmol/L)TM单独作用24 h,根据MTT法检测细胞增殖抑制率,选择0.5μmol/L的TM为固定浓度,并联合不同浓度As_2O_3作用细胞24 h(联合组)。用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,用内质网应激抑制剂4-PBA预处理细胞后用Western blotting技术检测GRP78、Caspase4蛋白表达。结果 As_2O_3组、TM组、联合组细胞增殖抑制率随As_2O_3浓度增加而升高;联合组细胞增殖抑制率与其他两组同浓度比较,P均<0.05。联合组细胞凋亡率与As_2O_3组比较,P<0.05。联合组线粒体膜电位与对照组比较,P<0.05。0.5μmol/L TM在4-PBA预处理后GRP78、Caspase4蛋白表达与预处理前比较,P<0.05。1μmol/L As_2O_3+0.5μmol/L TM在4-PBA预处理后GRP78、Caspase4蛋白表达与预处理前比较,P>0.05。结论 As_2O_3联合TM可协同诱导三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能为TM将低浓度As_2O_3的促细胞增殖效应逆转为抑细胞增殖效应。

补肾活血汤及其拆方对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及其CXCR4表达的影响

目的探讨补肾活血汤及其拆方组(补肾组、活血组)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力及CXCR4蛋白表达的影响。方法分别以补肾活血汤(1.23 g/mL、1.845 g/mL、2.46 g/mL)、补肾中药(0.873 g/mL、1.31 g/mL、1.746 g/mL)、活血中药(0.36 g/mL、0.54 g/mL、0.72 g/mL)汤剂灌胃SD雄性大鼠,制备含药血清。以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,分为对照组,补肾活血汤高、中、低浓度组,补肾中药高、中、低浓度组,活血中药高、中、低浓度组,紫杉醇组。采用MTT法探究上述各组MDA-MB-231细胞增殖活力;细胞划痕试验、Transwell小室侵袭实验检测对照组、补肾活血汤高浓度组、补肾中药高浓度组、活血中药高浓度组、紫杉醇组MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测各组高浓度药物对MDA-MB-231细胞中CXCR4蛋白表达的影响。结果与对照组比较,补肾活血汤低、中、高浓度,补肾中药中、高浓度,活血中药中、高浓度以及紫杉醇可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖活性;补肾活血汤高浓度、活血中药高浓度、补肾中药高浓度和紫杉醇均显著抑制MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力(P<0.05或P<0.01)和CXCR4蛋白表达水平(P<0.05),其中,补肾活血汤高浓度组和紫杉醇组效果更佳(P<0.05)。结论补肾活血汤可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭、迁移能力,可能与下调MDA-MB-231细胞表面CXCR4蛋白表达水平相关。

SAHA和TRAIL联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长状态的影响

目的实时观测辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长状态的影响。方法应用实时无标记细胞分析系统(RTCA)动态监测SAHA和TRAIL联合使用对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长状况的影响,并通过Biostation IM活细胞工作站收集各种处理因素对MDA-MB-231细胞增殖干扰作用的形态学证据。结果 x CELLigence RTCA显示SAHA和TRAIL具有协同抑制MDA-MB-231细胞生长的作用,其中50 ng/m L TRAIL与5μmol/L SAHA联合作用效果最佳。活细胞工作站显示SAHA和TRAIL联合处理对MDA-MB-231细胞生长的抑制效果较SAHA或TRAIL单独处理更显著。结论 SAHA和TRAIL联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长具有协同抑制作用。

miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇(PTX)药物敏感性中的作用。方法构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照(miR-NC)组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况(未转染组设置亚组:空白组和对照组),实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测色素框同源物2(CBX2)mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇(0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10μmol/L)作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组(P<0.05);Western blot结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2蛋白表达水平低于未转染组和miRNC组(P<0.05);Transwell检测及划痕实验检测结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞侵袭迁移能力低于未转染组和miR-NC组(P均<0.05)。结论miR-574-3p可能通过下调CBX2增强三阴性乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性,抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭迁移能力。

养正透邪祛毒法联合NAC方案化疗对三阴性乳腺癌患者疗效、T细胞亚群及癌因性疲乏的影响

目的:探讨养正透邪祛毒法联合NAC方案(多西他赛+表柔比星+环磷酰胺)化疗对三阴性乳腺癌患者疗效、T细胞亚群及癌因性疲乏的影响。方法:选取2022年6月至2023年6月该院诊治的三阴性乳腺癌患者100例,根据随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。对照组患者给予NAC方案治疗,观察组患者给予口服自拟养正透邪祛毒方与NAC方案联合治疗。观察两组患者的疗效、T淋巴亚群、炎症因子、癌因性疲乏水平及不良反应发生情况。结果:观察组患者的总有效率为82.00%(41/50),明显高于对照组的58.00%(29/50),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、白细胞介素(IL)12和IL-2水平均较治疗前升高,且观察组患者较对照组更高;两组患者CD8^(+)、肿瘤坏死因子α和可溶性白细胞介素-2受体水平,躯体、认知和情感疲乏评分均较治疗前降低,且观察组患者较对照组更低,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组、对照组患者的不良反应发生率分别为24.00%(12/50)、28.00%(14/50),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:养正透邪祛毒法与NAC方案化疗联合治疗三阴性乳腺癌患者,可明显提高疗效,改善T细胞亚群水平,降低炎症反应,改善癌因性疲乏状况,安全性佳。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。