精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响

目的通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响。方法(1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性。结果(1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)%]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)%](P<0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)%](P<0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)%vs.(23.6±7.8)%](P<0.05),且均显著高于新鲜精液(P<0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P>0.05)。(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)%降为(6.4±2.5)%(P<0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)%vs.(23.6±7.8)%和(9.7±2.6)%vs.(25.9±7.2)%](P<0.05)。结论冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响。不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异。不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子。