抑制上游转录因子2的表达对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上游转录因子2(USF2)对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法 使用Lipofectamine^(TM)3000转染试剂将USF2 siRNA转染至BGC-823细胞(siRNA-USF2组)中,同时设空白对照组和阴性对照组(siRNA-NC组)。实时荧光定量PCR法检测转染后的BGC-823细胞中USF2mRNA的表达。Westernblot实验检测转染后BGC-823细胞中USF2蛋白的表达。CCK-8和平板克隆实验检测每组BGC-823细胞的增殖能力和克隆形成能力。流式细胞术检测各组胃癌细胞的凋亡情况。Western blot实验检测各组BGC-823细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果 与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-USF2组细胞USF2 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。转染后72 h,siRNA-USF2组的吸光度值低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中的克隆数明显较少(P<0.05)。空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-USF2组胃癌BGC-823细胞的凋亡率差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组和si RNA-NC组比较,si RNA-USF2组BGC-823细胞中PCNA和Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加(P<0.05)。结论 抑制USF2表达能够抑制人胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。USF2抑制剂可能在胃癌治疗中具有重要价值。

脓毒症合并急性肾损伤患者外周血USF2、USP10表达水平及临床意义

目的 探讨脓毒症合并急性肾损伤(AKI)患者外周血上游转录因子2(USF2)、泛素特异性蛋白酶10(USP10)的表达水平及临床意义。方法 选择2018年1月至2022年12月该院收治的259例脓毒症患者,根据是否合并AKI将患者分为AKI组(107例)和非AKI(NAKI)组(152例)。收集临床一般资料,检测外周血中USF2、USP10的表达水平。Pearson分析USF2、USP10与肾功能的相关性。二元Logistic回归分析影响脓毒症患者合并AKI的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析USF2、USP10诊断脓毒症患者合并AKI的价值。结果 AKI组血清USF2表达水平高于NAKI组,差异有统计学意义(P<0.05),USP10表达水平低于NAKI组,差异有统计学意义(P<0.05)。AKI组USF2表达与尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、胱抑素C(CysC)呈正相关(P<0.05),USP10表达与BUN、Scr、CysC呈负相关(P<0.05)。高序贯器官衰竭(SOFA)评分、脓毒症休克、高表达USF2是脓毒症患者发生AKI的危险因素(P<0.05),高表达USP10是保护因素(P<0.05)。USF2、USP10诊断脓毒症患者发生AKI的曲线下面积(AUC)分别为0.742(95%CI:0.676~0.808)、0.781(95%CI:0.724~0.839),联合USF2和USP10诊断脓毒症患者发生AKI的AUC为0.907(95%CI:0.865~0.948),高于单独诊断(P<0.05)。结论 脓毒症患者外周血中USF2表达增加,USP10表达下降与合并AKI风险增加以及肾功能下降有关。

COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控

目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。

胃癌组织中miR-875-5p、USF2基因表达变化及其临床意义

目的探讨胃癌组织中微小RNA-875-5p(miR-875-5p)、上游转录因子2(USF2)mRNA表达变化及其临床意义。方法选择93例胃癌患者,术中取其胃癌组织及癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm),用定量RT-PCR检测组织中miR-875-5p、USF2 mRNA表达。随访患者至2022年1月,统计其术后5年累积生存率。用生物学网站http://www.targetscan.org/分析预测miR-875-5p和USF2间相互作用的位点;Pearson相关法分析胃癌组织中miR-875-5p与USF2 mRNA表达的相关性;Kaplan-Meier法绘制胃癌患者生存曲线,组间生存率比较采用Log-rank检验;多因素Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中miR-875-5p表达低于癌旁组织,USF2 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05)。USF2的3'-非翻译区595~601碱基处存在与miR-875-5p潜在的结合位点。Pearson相关分析显示,胃癌组织中miR-875-5p与USF2 mRNA表达呈负相关(r=-0.710,P<0.05)。miR-875-5p、USF2 mRNA表达与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。随访5年,miR-875-5p高表达患者累积生存率高于miR-875-5p低表达患者,USF2 mRNA高表达患者累积生存率低于USF2 mRNA低表达患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ、Ⅳ期(HR=2.971,95%CI:1.035~5.529,P=0.043)及淋巴结转移(HR=3.246,95%CI:1.167~9.027,P=0.024)、USF2 mRNA≥2.606(HR=4.705,95%CI:1.368~16.181,P=0.014)是胃癌患者死亡的独立风险因素,miR-875-5p≥0.903(HR=0.369,95%CI:0.164~0.830,P=0.016)是独立保护因素。结论胃癌组织中miR-875-5p低表达,USF2 mRNA高表达;二者可能协同参与胃癌的发生发展,影响患者预后。