目标血糖管理下脓毒症肺损伤大鼠转录激活因子3与内皮特异性分子-1的表达及意义

目的,探讨目标血糖管理下脓毒症大鼠转录激活因子3(Stat3)与内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)表达的相关性及对肺损伤的作用。方法,将40只SD大鼠按随机数表法随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、目标血糖控制A组(4.4-6.1mmol/L)、目标血糖控制B组(6.2-8.3mmol/L)、目标血糖控制C组(8.4-10.0mmol/L)共5组。盲肠穿孔术后12小时处死,用ELISA法检测血清中ESM-1水平,免疫组化染色法检测肺p-Stat3的表达,光镜观察肺组织病理切片并评分。结果,脓毒症组肺组织p-Stat3的表达、血清ESM-1的表达和肺组织病理损伤评分均明显高于假手术组和各血糖控制组(均P<0.05)。血糖控制A组较B组和C组的肺组织p-Stat3的表达、血清ESM-1的表达、肺组织病理损伤评分均明显降低(均P<0.05),但均高于假手术组(P<0.05)。各组大鼠的p-Stat3与血清ESM-1存在正相关性。结论,脓毒症急性肺损伤时炎症因子可通过Jak/Stat途径高表达Stat3进而促进ESM-1的表达、合成和分泌。

前列腺上皮特异性Ets转录因子(PDEF)表达与激素非依赖性前列腺癌临床分期分级的相关性研究

目的:探讨前列腺上皮特异性Ets转录因子(prostate epithelium-specific Ets transcription factor,PDEF)在激素非依赖性前列腺癌(PCa)中的表达及其与Gleason分级和临床分期的相关性。方法:收集30例雄激素依赖性前列腺癌(A组)和30例雄激素非依赖性前列腺癌(B组)标本,运用免疫组织化学S-P法、Western blotting、RT-PCR半定量方法检测PDEF基因和蛋白的表达,并对照其临床分期和Gleason分级进行表达水平分析。结果:免疫组织化学实验显示,A组的PDEF阳性表达(70.0%,21/30)低于B组(96.7%,29/30,P<0.05)。Gleason分级≤7分组PDEF阳性表达率显著低于>7分组(64.3%vs 93.7%,P<0.01);临床分期>T2组PDEF阳性表达率显著高于≤T2组(86.8%vs 54.5%,P<0.01)。RT-PCR实验显示,A组与B组中PDEF mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.01),Gleason分级≤7分组PDEF mRNA表达率显著低于>7分组(P<0.01);临床分期>T2组PDEF mRNA表达显著高于≤T2组(P<0.01)。Western blotting进一步证实,PDEF蛋白表达与其mRNA表达变化相一致。结论:PDEF在雄激素非依赖性PCa标本中阳性表达率高,而且随临床分期和Gleason分级的升高其表达升高。提示PDEF参与了PCa的发生、发展及演变,可作为激素非依赖性PCa研究及治疗的靶向基因。

ESE-3在溃疡性结肠炎相关结肠癌中的意义

目的:探讨上皮特异性Ets转录因子-3(ESE-3)在溃疡性结肠炎(UC)及其癌变组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测UC及其癌变结肠组织标本中ESE-3的表达。结果:在结肠组织中,ESE-3表达于细胞核中,表达量在UC组织中与正常对照组织的表达无统计学差异(P>0.05);而在UC相关结肠癌组织中ESE-3的表达低于癌旁组织。结论:ESE-3可能参与了与UC相关结肠癌的发生。

血浆RUNX3基因启动子甲基化检测对宫颈癌早期诊断的价值研究

目的探究血浆人类Runt相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化对早期宫颈癌的诊断价值。方法选取80例宫颈癌患者作为A组,选取同期80例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为B组,另选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。对三组研究对象的宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织及血浆RUNX3启动子甲基化应用甲基化特异性聚合酶链反应(MCP)进行检测。比较三组组织、血浆RUNX3启动子甲基化异常率,分析宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系。结果A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05)。血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。结论血浆RUNX3基因启动子甲基化异常可提示宫颈癌的发生发展,为早期诊断宫颈癌提供新方法。

乏氧和低糖条件下低表达ESE3促进胰腺癌细胞的侵袭

目的观察乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中上皮特异性ETS转录因子3(ESE3)表达的变化及其对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。方法收集在天津医科大学肿瘤医院2005年1月—2014年10月期间行根治性手术治疗的99例胰腺癌患者的胰腺癌组织和16例邻近正常胰腺组织标本。采用免疫组化法分析癌组织和邻近正常胰腺组织中ESE3的表达水平,探究其表达水平与胰腺癌患者生存预后间的关系;进一步在TCGA数据库中分析ESE3的mRNA表达水平与147例胰腺癌患者的临床病理学特征间的关系;构建胰腺癌细胞PANC-1过表达ESE3稳定转染细胞系并验证;Transwell法探究过表达ESE3的胰腺癌细胞侵袭能力的变化;利用蛋白质免疫印迹法检测乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中乏氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ESE3蛋白表达水平的变化。结果胰腺癌组织中ESE3的表达量明显低于正常胰腺组织,ESE3的低表达与患者总生存期(OS)和无复发生存期(DFS)缩短密切相关(均P<0.05)。TCGA数据库分析表明ESE3表达高低与肿瘤转移相关(P<0.05);在乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞侵袭能力增强,ESE3的表达降低,HIF-1α与GRP78的表达增加(P<0.05)。结论在乏氧和低糖条件下,胰腺癌细胞中ESE3的表达降低,促进胰腺癌细胞的侵袭。

炎症反应在光气致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的研究进展

光气目前广泛应用于工业生产,其毒性较大,在生产、储存、使用过程中因泄漏而引起的中毒问题不容忽视。急性光气暴露可引起呼吸抑制、难治性肺水肿等相关肺损伤,严重者可致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)甚至死亡。急性光气中毒病死率高、预后差,缺乏特异性治疗,炎症反应在其中起重要作用。本文对炎症反应在光气致急性肺损伤(P-ALI)/ARDS损伤机制及治疗中的作用进行综述,并总结了可能的信号通路,讨论了更多潜在的治疗靶点,以及当前针对P-ALI/ARDS抗炎治疗的研究现状,以期帮助临床医师及研究人员迅速了解目前全球P-ALI/ARDS领域在炎症方面的最新研究动态,为治疗P-ALI/ARDS及新药物的研发提供思路和帮助。

雷公藤内酯醇联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察雷公藤内酯醇(TPL)联合吉西他滨(GEM)对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法以TPL、GEM单独用药以及两药联合作用于体外培养的PANC-1细胞,采用细胞毒实验(MTT)法检测细胞增殖并计算两药之间的交互作用、Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测信号转导与转录活化因子3(STAT3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达。结果 TPL、GEM单药以及联合用药组的细胞均出现了典型的细胞凋亡形态学改变,且联合用药组的凋亡细胞数较TPL、GEM单药组明显增加。与对照组相比,TPL、GEM单药以及联合用药组的细胞凋亡率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);且联合用药组的细胞凋亡率显著高于单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。TPL联合GEM可协同抑制兔抗人磷酸化转录活化因子3(p-STAT3)蛋白表达,活化caspase-3TPL、GEM蛋白表达。结论 TPL联合GEM可协同抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制与抑制STAT3通路、促进caspase-3蛋白表达有关。

胃癌晚期患者血脂、脂蛋白及PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1水平的临床意义

目的探讨胃癌晚期患者血脂(TG、TC)、脂蛋白(HDL、LDL)及血清重组穿透素-3(PTX-3)、甲状腺转录因子1(TTF-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)水平的意义,为胃癌的早、中、晚期诊治提供依据。方法选取2019年1月至2022年1月三二〇一医院收治的127例胃癌患者为研究对象,根据病情将其分成早期组(n=45)、中期组(n=43)和晚期组(n=39),分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测三组患者血脂(TG、TC)、PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1,化学沉淀法检测脂蛋白(HDL、LDL)代谢,分析三组胃癌患者及晚期组胃癌患者术前术后血脂、脂蛋白及PTX-3、TTF-1、NSE和CYFRA21-1差异。采用logistic回归分析血脂(TG、TC)、脂蛋白(HDL、LDL)及PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1与胃癌发病的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析上述指标单独及联合检测对胃癌的预测价值。结果晚期组TG、TC、LDL水平高于中期、早期组(均P<0.05),HDL水平低于中期、早期组(均P<0.05),血清PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1水平高于中期、早期组(均P<0.05)。晚期组术后TG、PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1、TC、LDL水平较术前显著降低(均P<0.05),HDL水平较术前显著升高(P<0.05)。TG、TC、HDL、LDL、PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1水平与胃癌晚期发病存在相关性(均P<0.05)。ROC曲线显示:PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1两两联合检测的ROC曲线下面积(AUC)显著高于PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1单独检测,其中PTX-3+TTF-1+NSE+CYFRA21-1联合检测AUC值最大,灵敏度、特异度最高。结论胃癌晚期患者的血脂(TG、TC)、脂蛋白(HDL、LDL)及血清PTX-3、TTF-1、NSE、CYFRA21-1水平均异常,需根据上述指标的情况制定行之有效的干预措施,提升生存率。

尿酸刺激对前列腺上皮细胞的影响及其作用机制

目的探讨尿酸在诱导前列腺上皮RWPE-1细胞发生炎性反应中的作用及其作用机制。方法浓度分别为0、8、12、16 mg/dl的尿酸处理前列腺上皮细胞RWPE-1细胞,倒置显微镜观察RWPE-1细胞的生长及形态学变化;Western blot方法检测RWPE-1细胞内Toll样受体4(TLR- 4)、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、κB抑制蛋白激酶α(IKKα)、κB抑制蛋白激酶β(IKKβ)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性蛋白的表达变化;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测IKKα、IKKβ、NLRP3、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)的mRNA表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化。结果倒置显微镜观察显示,RWPE-1细胞形态学变化与尿酸作用具有浓度依赖关系;RWPE-1细胞中TLR4、NF-κBp65、IKKα、IKKβ、NLRP3炎性蛋白的表达水平随尿酸浓度的增高而增高,呈正相关(P<0.05);随着尿酸的浓度升高,IKKα、IKKβ、NLRP3、Caspase-1基因的表达呈上调趋势,呈正相关(P<0.05);尿酸刺激RWPE-1细胞12 h后,各组(0、8、12、16 mg/dl)TNF-α含量分别为:(9.69±0.22)、(9.56±0.47)、(9.63±0.51)、(10.08±0.11) ng/L,IL-1β分别为:(7.75±0.52)、(7.85±0.87)、(9.27±1.11)、(9.62±0.44) ng/L,差异无统计学意义(P>0.05);24 h后各组TNF-α分别为:(24.86±0.61)、(25.14±0.83)、(30.34±0.61)、(30.77±1.84) ng/L,IL-1β分别为:(14.81±0.23)、(15.53±0.30)、(22.87±0.65)、(25.60±0.70) ng/L;48 h后各组TNF-α分别为:(26.72±0.37)、(26.80±1.14)、(31.60±0.76)、(42.98±1.49) ng/L,IL-1β分别为:(25.36±0.70)、(30.29±0.62)、(38.91±1.52)、(40.97±1.17) ng/L,尿酸处理24、48 h后,高浓度尿酸促进了RWPE-1细胞中IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.05)。结论尿酸可以诱导前列腺上皮RWPE-1细胞发生炎性反应,而激活TLR4/NF-κB和NLRP3/Caspase- 1信号通路是其机制之一。

甲泼尼龙和纳洛酮对大鼠肺缺血／再灌注损伤的保护作用研究

目的研究甲泼尼龙、纳洛酮在大鼠肺缺血／再灌注（I／R）损伤中的作用，并探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠70只，随机均分为假手术组（sham组）、I／R组、甲泼尼龙组（MP组）、纳洛酮组（Na组）、甲泼尼龙联合纳洛酮组（MP＋Na组）。术后3h和6h取标本，用钙结合蛋白Ⅴ-碘化丙啶（Annexin Ⅴ-PI）双染法、流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞并计算凋亡率；用免疫组化及图像分析法观察肺脏核转录因子-κB抑制因子-α（IκB-α）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达；计算肺湿／干重（W／D）比值；苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肺组织病理学变化，电镜下观察肺脏超微结构的改变。结果①6hMP组较I／R组肺脏IκB-α的表达有所增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；3h和6hNa组较I／R组肺组织caspase-3表达明显减少，差异有统计学意义（P均〈0．05）；MP组和Na组3h和6h的细胞凋亡率较I／R组均有所减少（P均〈0．01），肺组织的病理形态及超微结构损害均有所减轻。②MP＋Na组较MP组、Na组、I／R组肺组织凋亡率、caspase-3表达均有不同程度的减少（P〈0．05或P〈0．01），肺脏IκB-α的表达较6hNa组显著增多（P〈0．05），肺组织的病理形态及超微结构损害明显减轻，6h较3h减轻更明显。结论甲泼尼龙、纳洛酮分别通过抗炎、减少caspase-3的激活两个不同途径抑制凋亡的发生，早期联合应用有协同效应，更能有效抑制肺组织I／R损伤凋亡的发生，对肺组织有明显的保护作用。

大电导钙依赖性钾通道参与脓毒症炎症应答的机制研究

目的探讨大电导钙依赖性钾通道(BKCa)参与脓毒症发病的机制。方法收集脓毒症患者(28例)、普通感染者(25例)和健康体检者(25例)血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BKCa水平;并分析脓毒症患者血清BKCa水平与急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)的相关性。培养RAW 264.7细胞,用脂多糖(LPS)刺激,部分实验以尼日尼亚菌素(Nigericin)作为第二刺激信号构建脓毒症细胞模型;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定不同浓度LPS(0、50、100、1000μg/L)刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达。RAW 264.7细胞转染BKCa的小干扰RNA(siRNA-BKCa),用Western blotting测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1前体(pro-caspase-1)、白细胞介素-1β前体(pro-IL-1β),细胞培养液中caspase-1 p20、IL-1βp17,以及NOD样受体蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)水平。碘化丙啶(PI)染色后荧光显微镜下观察凋亡情况,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,Western blotting测定细胞凋亡蛋白Gasdermin D(GSDMD)表达以评估沉默BKCa对细胞焦亡的影响。结果脓毒症患者血清BKCa明显高于普通感染者和健康体检者(ng/L:165.2±25.9比102.5±25.9、98.8±20.0,均P<0.05),且脓毒症患者血清BKCa水平与APACHEⅡ评分呈显著正相关(r=0.453,P=0.013)。用LPS构建脓毒症细胞模型,显示LPS呈浓度依赖地促进BKCα的mRNA和蛋白表达,1000μg/L刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达水平均较空白组(0μg/L)明显增加〔BKCa mRNA(2^(-ΔΔCt)):3.00±0.36比1.00±0.16,BKCa/β-actin:1.30±0.16比0.37±0.09,均P<0.05〕。与对照组比较,模型组细胞caspase-1 p20/pro-caspase-1比值、IL-1βp17/pro-IL-1β比值均明显升高(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.83±0.12比0.27±0.05,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.77±0.12比0.23±0.12,均P<0.05);但转染siRNA-BKCa后二者均较模型组明显下降(caspase-1 p20/pro-caspase-1比值:0.23±0.12比0.83±0.12,IL-1βp17/pro-IL-1β比值:0.13±0.05比0.77±0.12,均P<0.05)。与对照组比较,镜下观察模型组凋亡细胞明显增多,LDH释放率、GSDMD表达明显增加〔LDH释放率:(30.60±8.40)%比(15.20±7.10)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:2.10±0.16比1.00±0.16,均P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后上述指标均较模型组明显下降〔LDH释放率:(15.60±7.30)%比(30.60±8.40)%,GSDMD-N/GSDMD-FL:1.13±0.17比2.10±0.16,均P<0.05〕。脓毒症细胞NLRP3的mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显增加〔NLRP3 mRNA(2^(-ΔΔCt)):2.06±0.17比1.00±0.24,NLRP3/GAPDH:0.46±0.05比0.15±0.04,均P<0.05〕;但转染siRNA-BKCa后NLRP3表达较模型组明显下降〔NLRP3 mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.57±0.09比2.06±0.17,NLRP3/GAPDH:0.19±0.02比0.46±0.05,均P<0.05〕。与对照组比较,脓毒症细胞NF-κB p65核转移明显增加(NF-κB p65/Histone:0.73±0.12比0.23±0.09,P<0.05);而转染siRNA-BKCa后细胞核中NF-κB p65表达明显下降(NF-κB p65/Histone:0.20±0.03比0.73±0.12,P<0.05)。结论BKCa参与脓毒症发病,其可能机制是激活NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路诱导炎症因子生成和细胞焦亡。

曲妥珠单抗联合伊立替康治疗老年晚期胃癌临床观察

目的临床上现已证明,老年晚期胃癌使用一线治疗药物针对表皮生长因子受体2和二线治疗药物针对血管内皮生长因子及其受体这两条通路能够延长患者生存时间。本研究从联合两条通路治疗的思路进行研究,分析靶向药物联合伊立替康治疗对老年晚期胃癌患者核转录因子(nuclear transcription factor,NF-κB)、正常上皮细胞特异性-1(normal epithelial cell specificity-1,NES1)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)表达及生活质量影响,为临床晚期胃癌二线治疗提供参考。方法选取2016-12-01-2019-02-28南阳市第二人民医院收治的100例老年晚期胃癌患者作为研究对象,根据组间性别和年龄等因素平衡的原则选择联合组和对照组,每组各50例。联合组接受曲妥珠单抗靶向联合伊立替康治疗,对照组单纯接受伊立替康治疗,分析两组临床疗效和NF-κB、NES1、CEA表达与生活质量情况。结果联合组总有效率为88.00%,对照组为66.00%,差异有统计学意义,χ~2=6.83,P<0.01。治疗后联合组NF-κB水平为(79.29±3.87)mmol/L,高于对照组的(63.58±2.31)mmol/L,t=5.26,P<0.05;NES1水平为(81.36±4.44)mmol/L,高于对照组的(73.10±3.42)mmol/L,t=6.02,P<0.05。治疗后联合组糖类抗原199水平为(76.59±8.20)mg/L,低于对照组的(85.26±9.29)mg/L,t=3.02,P<0.05;CEA水平为(50.85±6.15)mg/L,低于对照组的(62.35±6.88)mg/L,t=2.62,P<0.05;糖类抗原242水平为(51.22±6.06)mg/L,低于对照组的(64.05±6.82)mg/L,t=2.88,P<0.05。治疗后联合组情绪功能评分为(67.59±6.80)分,高于对照组的(60.26±6.09)分,t=2.86,P<0.05;躯体功能评分为(56.85±5.45)分,高于对照组的(50.35±5.08)分,t=2.66,P<0.05;社会功能评分为(61.22±6.02)分,高于对照组的(56.05±5.42)分,t=4.41,P<0.05;总体健康评分为(64.92±6.25)分,高于对照组的(60.00±6.01)分,t=3.62,P<0.05。联合组不良反应发生率为14.00%,与对照组的12.00%比较,差异无统计学意义,χ~2=0.09,P=0.77。结论靶向药物联合伊立替康治疗对老年晚期胃癌患者具有良好治疗效果,能够降低血清肿瘤标志物水平,控制胃癌患者病情,改善其生活质量。