华支睾吸虫CsSCCRO基因的克隆表达和蛋白纯化

目的原核表达华支睾吸虫鳞状上皮癌相关肿瘤基因(SCCRO)全长编码区序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做好准备。方法用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA文库中识别出与人鳞状上皮癌相关基因的同源序列及其全长编码区,将其编码区序列克隆到原核表达载体PET-30a(+),测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,重组产物用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果华支睾吸虫鳞状上皮癌相关基因长度为1 218bp,其全长编码序列长度为780bp,编码259个氨基酸,1-22位为分泌信号肽,在羧基端有一个高度保守的区域。该基因在大肠杆菌中得到了高效的可溶性表达,重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度可达98%。结论鳞状上皮癌相关基因的PET-30a(+)原核重组质粒在大肠杆菌BL-21/DE3中可以稳定高效地表达可溶性蛋白。

非小细胞肺癌患者外周血中多参数检测对诊断微转移的作用

目的 探讨细胞角蛋白19（CK19）、肺组织特异性X蛋白（LunX）、上皮癌相关基因（KS1/4）在非小细胞肺癌（NSCLC）外周血中的表达差异与NSCLC微转移的关系.方法 选择经过9个月随访的52例患者,分为转移组和无转移组,并以胸部良性病变手术患者20例作为对照组.提取外周血标本的总RNA,反转录为cDNA,采用荧光定量实时聚合酶链反应（PCR）检测其中CK19mRNA、LunXmRNA、KS1/4mRNA的表达水平.结果 总RNA通过紫外分光光度仪检测RNA纯度,OD268/280值在1.612 ～2.1之间,RNA浓度在100～ 1410μg/ml之间.经过随访,52例患者中发生转移或复发共18例,转移复发率34.6％ （18/52）.其中转移组外周血中CK19mRNA、LunXmRNA明显高于无转移组及对照组（P＜0.05）,但KS1/4 mRNA在三组患者外周血的表达差异无统计学意义（P＞0.05）;转移组的外周血中LunXmRNA的表达量最高,KS1/4 mRNA其次,CK19mRNA表达量最低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 CK19、LunX可以作为预测NSCLC转移或复发的指标,辅助诊断NSCLC微转移,其中LunX的敏感性略显优势.

检测非小细胞肺癌患者淋巴结中CK19、LunX、KS1／4的表达对诊断微转移的意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）淋巴结中细胞角蛋白19（CK19）、肺组织特异性X蛋白（LunX）、上皮癌相关基因（KS1／4）的表达与NSCLC微转移的关系。方法选择经过9个月随访的52例NSCLC患者，分为转移组和无转移组。提取淋巴结标本的总RNA，反转录为cDNA，采用荧光定量实时PCR检测其中CK19、LunX、KS1／4的mRNA表达水平。结果总RNA通过紫外线分光光度仪检测RNA纯度，OD260／280值为1．650～2．1，RNA浓度为560～1420mg／L。经过随访，52例研究病例中发生转移或复发共18例，转移复发率为34．6％。其中转移组淋巴结中CK19、LunX、KS1／4的mRNA表达均高于无转移组（P值均〈0．05）。结论CK19、LunX、KS1／4可以作为预测NSCLC转移或复发的指标，辅助诊断NSCLC微转移。

LncRNA-UCA1通过靶向调控miR-182-5p对滋养细胞侵袭与转移的影响

目的探讨长链非编码RNA尿道上皮癌相关基因1(LncRNA-UCA1)对滋养细胞侵袭与转移的影响及其可能机制。方法收集30例行剖宫产分娩的子痫前期(PE)患者胎盘组织和30例正常妊娠孕妇胎盘组织,qRT-PCR检测各胎盘组织中UCA1和miR-182-5p表达水平。以滋养细胞HTR-8/Svneo为研究对象,将UCA1过表达质粒(pcDNA3.1-UCA1)及其空载质粒(Vector)转染至细胞中,qRT-PCR检测细胞中UCA1和miR-182-5p表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-182-5p之间的靶向调控关系。将pcDNA3.1-UCA1质粒与miR-182-5p mimic分别或同时转染至HTR-8/Svneo细胞中,CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell实验检测细胞侵袭与转移;Western blotting检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化。结果(1)临床标本测定结果:与正常妊娠孕妇胎盘组织比较,PE患者胎盘组织中UCA1表达降低(1.10±0.51 vs 5.74±1.63),差异有统计学意义(t=14.947,P<0.001),而miR-182-5p表达显著增加(7.23±1.44 vs 1.07±0.72),差异有统计学意义(t=20.961,P<0.001)。(2)细胞实验结果:UCA1能特异性靶向调控miR-182-5p表达。与Vector组比较,UCA1过表达可降低HTR-8/SVneo细胞中miR-182-5p表达(0.12±0.05 vs 0.97±0.06,t=19.028,P<0.001),促进细胞增殖、侵袭和迁移(t=10.160、17.228、13.768,P均<0.001),并上调MMP-2和MMP-9蛋白表达(t=20.833、24.793,P均<0.001);而miR-182-5p过表达能显著减弱UCA1过表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、侵袭和迁移的促进作用。结论UCA1通过靶向下调miR-182-5p表达促进滋养细胞侵袭与转移。