目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein，ECFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞的转染和表达情况，为rAAV携带目的基因防治...目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein，ECFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞的转染和表达情况，为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法组织块培养法体外培养兔晶状体上皮细胞。rAAV2-EGFP，按感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6转染传2代细胞，转染后第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天在倒置荧光显微镜下观察晶状体上皮细胞中EGFP表达的阳性情况，记录200个细胞中EGFP阳性表达所占的百分比。当EGFP表达稳定后用激光共聚焦显微镜照相。用倒置显微镜观察rAAV转染对细胞生长和形态的影响。结果当MOI=10^3、10^4时，转染后第72小时晶状体上皮细胞中EGFP开始表达，当MOI=10^5、4×10^5、10^6时，转染后第24小时便可见EGFP阳性表达。随着MOI值的增大及时间的延长，EGFP表达效率逐渐增高，转染后第8-第9天达到高峰并维持，此时，MOI=10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6的转导效率分别为16％、41％、55％、86％、94％。对照组和转染组细胞的生长和形态特征无明显改变。结论腺相关病毒载体可以携带报告基因稳定转染晶状体上皮细胞，并且转染效率高，因而腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。展开更多
文摘目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein，ECFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞的转染和表达情况，为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法组织块培养法体外培养兔晶状体上皮细胞。rAAV2-EGFP，按感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6转染传2代细胞，转染后第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天在倒置荧光显微镜下观察晶状体上皮细胞中EGFP表达的阳性情况，记录200个细胞中EGFP阳性表达所占的百分比。当EGFP表达稳定后用激光共聚焦显微镜照相。用倒置显微镜观察rAAV转染对细胞生长和形态的影响。结果当MOI=10^3、10^4时，转染后第72小时晶状体上皮细胞中EGFP开始表达，当MOI=10^5、4×10^5、10^6时，转染后第24小时便可见EGFP阳性表达。随着MOI值的增大及时间的延长，EGFP表达效率逐渐增高，转染后第8-第9天达到高峰并维持，此时，MOI=10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6的转导效率分别为16％、41％、55％、86％、94％。对照组和转染组细胞的生长和形态特征无明显改变。结论腺相关病毒载体可以携带报告基因稳定转染晶状体上皮细胞，并且转染效率高，因而腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。
