三氧化二砷诱导肺癌上皮细胞株凋亡

采用碘化丙啶和FITC TUNEL标记法 ,经流式细胞仪和透射电镜观察As2 O3 对肺癌A5 49细胞株的凋亡诱导作用和形态学变化。结果发现 1及 2 5 μmol/LAs2 O3 对肺癌A5 49细胞株 2 4h的凋亡诱导率为 2 2 80 %及 30 15 % ,48h的凋亡诱导率为 41 75 %及 6 0 0 4% ,72h的凋亡诱导率为 5 6 38%及 73 30 % ,均分别高于相应时间点的 5 FU的作用 ;透射电镜下见细胞体积缩小 ,核膜完整 ,核染色质聚集于核膜边缘的典型凋亡细胞。结果表明 ,As2 O3 能够诱导肺癌A5

紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE-1生长抑制和凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE1生长抑制和诱导凋亡作用。方法应用噻唑蓝(MTT)法、集落形成能力测定、细胞形态学观察及电镜等方法,对不同浓度紫杉醇作用不同时间后HNE1细胞进行检测和比较。结果紫杉醇浓度为1×10-8mol/L时,对HNE1细胞生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和一定范围内的剂量依赖关系。光镜和电镜下观察,可见细胞逐渐变圆、皱缩。细胞表面微绒毛消失,核染色质致密、浓缩呈块,胞质中可见空泡形成,细胞表面脱落形成膜包裹的凋亡小体。结论鼻咽癌上皮细胞株HNE1对紫杉醇有高度的敏感,一定浓度的紫杉醇能使HNE1细胞生长受到明显抑制,并诱导其凋亡,这种诱导凋亡的能力是紫杉醇疗效的基础,本研究为紫杉醇治疗鼻咽癌提供可靠的实验依据。

人工基膜对鼻咽癌上皮细胞株(CNE-2)生长的影响

人工基膜（ＡＢＭ）主要以Ⅰ型胶原的水合性胶原丝网为网架，辅上纤维连结蛋白，Ⅳ型胶原和层粘连蛋白等主要基膜糖蛋白制备而成，具海绵状的形态结构。ＡＢＭ可减少胎牛血清用量１０％，提高细胞生活力和延长细胞传代周期。在２－５％血清浓度的情况下，ＡＢＭ可提高ＣＮＥ－２细胞的生长效率，克隆形成率和克隆生长率而抑制细胞的＾３Ｈ－ＴｄＲＡ掺入。提示在体外研究细胞外基质对细胞的影响时应使用低血清培养液。

四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响

目的研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响。方法以IEC-6细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察四君子汤总多糖及各单味药多糖对该细胞增殖的影响。结果各多糖的作用存在差异,茯苓多糖具有明显的促进细胞生长的作用,甘草多糖与党参多糖作用不显著,而白术多糖则具有明显的抑制细胞生长的作用。当采用每两味多糖组合时,结果表明所有两组多糖作用强度远不如四君子汤总多糖。结论四君子汤总多糖的作用可能是各种单味药多糖综合作用的结果,也提示中药复方用药具有一定的合理性。

人鼻咽上皮细胞株HNE-1染色体高分辨显带的研究

作者首次采用高分辨染色体G显带技术,对本室建立的人鼻咽癌上皮细胞株“湖南一号”(HNE-1)进行了细胞遗传学研究。HNE-1细胞株在第15代时,染色体数目变异在68—78之间,众数为74。所检细胞均含有结构异常的染色体。出现频率比较高的标记染色体15条,其中某些标记染色体只有在高分辨染色体上才清楚地显示出结构重排。此外还发现少数细胞内存在双微体和核内复制。与其它鼻咽癌上皮细胞株比较,发现7号染色体部分缺失del(7)(q32)在CNE、HNE-1及鼻咽癌活检组织中同时存在,这一标记染色体可能与鼻咽癌的发生有重要联系。

奥美拉唑对胃癌上皮细胞株、幽门螺杆菌及空泡毒素作用的体外试验

目的 :通过奥美拉唑对胃癌上皮细胞、幽门螺杆菌 (Hp)菌株生长及空泡毒素 (VacA)毒性的影响 ,探讨其临床应用价值。方法 :应用不同浓度奥美拉唑和细胞、细菌及VacA共孵育方法观察细胞、细菌的生长状况及空泡毒性的变化。结果 :(1)当奥美拉唑浓度 >10 0mg·L- 1时 ,细胞 10 0 %死亡 ;低于4 0mg·L- 1时 ,光镜下未见上皮细胞的形态学改变。(2 )当奥美拉唑≥ 10 0mg·L- 1时 ,细菌生长完全被抑制 ;低于 30mg·L- 1,细菌的生长不受影响。 (3)低浓度奥美拉唑 (10～ 4 0mg·L- 1)能部分抑制Va cA毒素对SGC 790 1的空泡作用 ,但不抑制毒素对HeLa细胞的空泡毒性作用。结论 :抑制Hp生长所需的奥美拉唑浓度对胃上皮细胞也有损伤作用 ,对空泡毒素无显著的抑制作用 ,临床上只能应用低剂量奥美拉唑 ,通过抑制胃酸分泌治疗酸相关疾病 。

去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株凋亡的影响

目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并与阴性对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。用含kistrin的终浓度为160μg.L-1的培养基孵育细胞,于24h、32h后进行吖啶橙染色,倒置相差荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化,并与对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。结果kistrin作用8h时,阴性对照组与80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1kistrin孵育细胞组细胞凋亡率分别为(1.29±0.43)%、(5.48±0.66)%、(11.23±1.16)%、(20.77±1.46)%,kistrin作用16h时不同组别细胞凋亡率分别为(3.04±0.12)%、(7.68±0.23)%、(19.76±2.22)%、(32.36±3.29)%,kistrin作用32h时不同组别细胞凋亡率分别为(4.75±0.08)%、(72.15±7.04)%、(54.09±3.77)%、(43.27±3.32)%;在每个时间点各浓度的细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。与对照组相比,浓度为160μg.L-1的kistrin作用24h后,细胞形态可见改变,kistrin作用32h后细胞出现明显的各种凋亡形态学改变。结论去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04有诱导凋亡的作用,为药物防治后发性白内障提供了新思路。

人鼻咽癌裸鼠移植瘤SUNT─1及其体外培养上皮细胞株SUNE─1细胞遗传学研究

对我所建成的鼻咽低分化癌的ＥＢ病毒核抗原阳性（ＥＢＮＡ）的裸鼠移植瘤ＳＵＮＴ－１及其体外培养上皮细胞株ＳＵＮＥ－１，分别于各代进行细胞遗传学分析，结果显示ＳＵＮＴ－１和ＳＵＮＥ－１癌细胞染色体的数目和结构均有相似的变化；染色体数呈非整倍体改变，并以亚四倍体为主，染色体畸变则以易位、重排、缺乏和等臂染色体为多见并形成较恒定的标记染色体Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ５和Ｍ６，涉及３号染色体改变较多。提示进一步研究克隆ＳＵＮＦ－１和ＳＵＮＴ－１亚株的细胞遗传学和ＥＢ病毒基因存在变化，将为深入探讨鼻咽癌病因提供更多启示。

香烟提取物和脂多糖对小鼠肺上皮细胞株MLE-12活性及水通道蛋白5 mRNA表达的影响

目的:探讨香烟提取物(CSE)和脂多糖(LPS)对小鼠肺上皮细胞株MLE-12水通道蛋白5(AQP5)表达的影响及其在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中的作用。方法:MTT法检测CSE和LPS对MLE-12的毒性,并选择合适的CSE和LPS浓度单独或共同刺激MLE-12细胞后,实时定量PCR检测其AQP5的表达。结果:与正常不含CSE的DMEM培养液相比较,MLE-12细胞在CSE小于10%时的DMEM/F12培养液中活性无明显降低(P>0.05),当CSE浓度达15%时各组细胞活性显著降低(P<0.01)。而不同浓度LPS对MLE-12活性无明显影响。CSE(10%)、LPS(20μg/ml)分别刺激MLE-12后,其AQP5的表达水平降低,CSE(10%)和LPS(20μg/ml)共刺激后,其水平进一步降低。CSE组和LPS组之间差异无显著性统计学意义。结论:CSE协同LPS可降低MLE-12细胞AQP5的表达,AQP5的下调可能参与了COPD的发生和发展。

瑞巴匹特抑制脂多糖诱导肺上皮细胞株A549表达TLR4和释放TNF-α

目的:研究瑞巴匹特对肺上皮细胞株A549细胞TLR4表达及分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:用脂多糖(LPS)建立体外A549细胞体外炎症损伤模型,实验分为对照组(无干预无刺激)、模型组(LPS刺激)、干预组1(LPS和10mg/L瑞巴匹特)、干预组2(LPS和30mg/L瑞巴匹特)、用ELISA观察A549细胞分泌TNF-α和RT-PCR及蛋白免疫印迹观察A549细胞TLR4的表达。结果:LPS诱导A549细胞分泌TNF-α(与对照组比较,P<0.01),在第6h达高峰;LPS诱导A549细胞表达TLR4(与对照组比较,P<0.01);瑞巴匹特可抑制LPS诱导A549细胞分泌TNF-α和表达TLR4(与模型组比较,P<0.05),但2组干预组间无统计学差异(P>0.05)。结论:瑞巴匹特的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,从而减少炎性细胞因子的释放;瑞巴匹特有可能作为一种有价值的抗感染治疗的辅助药物。

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_1细胞自发分泌CSF样生物活性因子

用~3H-TdR参入法及半固体琼脂培养法,检测出本室自建小鼠胸腺基质细胞林中的M TEC_1能自发分泌集落刺激因子(CSF)样生物活性因子。用抗IL-6单抗不能封闭MTEC_1-SN的支持骨髓细胞增殖的作用。根据细胞形态学分析,MTEC_1-SN主要促进CFU-GMM和CFU-GM形成。表明MTEC_1细胞除能自发分泌IL-1及IL-6外,尚能自发分泌CSF样活性因子,其主要成份可能为GM-CSF。

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_B与胸腺细胞结合的形态学观察

用本室建立的小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_B,分别在1.无钙镁Hank液中(4℃);2.无钙镁Hank液中(37℃);3.含钙镁Hank液中(4℃)下;4.含钙镁Hank液中(37℃)与胸腺细胞共育(基质细胞:胸腺细胞=1:10),光镜和扫描电镜下观察:它们之间的结合特点。发现在各种实验条件下,90％的MTEC_B能与胸腺细胞结合,这种结合从形态上分为两种形式,其一为胸腺细胞均匀结合于MTEC_B周围,呈花环样,其二为胸腺细胞集中结合于MTEC_B的一侧,呈簇状。统计结果表明,这些结合不依赖钙镁离子,也不依赖温度,4℃和37℃的结合率无明显差异。同种异型的胸腺细胞与MTEC_B的结合率也没有明显差异,说明这种结合的介导分子不是MHC分子,介导这种结合的粘附分子可能为CD2/FA-3。

低氧条件刺激胃上皮细胞株GES-1后MICA表达研究

目的研究低氧对体外培养胃上皮细胞株GES-1中MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)基因表达的影响。方法建立GES-1细胞体外低氧培养模型,免疫细胞化学技术分别检测MICA在缺氧处理0、24、72 h后的蛋白表达。结果免疫细胞化学证实MICA蛋白的表达随着缺氧时间的增加呈时间效应关系,且表达量随缺氧时间而升高(P<0.05)。结论低氧可以显著增加胃上皮细胞株GES-1中MICA的表达。

3D培养体系中不同肠上皮细胞株形成肠类器官潜能的比较及应用

目的比较不同肠上皮细胞株在3D培养条件下形成肠类器官的潜能及特点,为利用肠上皮细胞株培养肠类器官提供实验研究基础。方法使用IEC-6、CT26.WT、Caco-2三种肠上皮细胞株进行3D培养,分析不同细胞株形成肠类器官的潜能。流式分选获取Caco-2单细胞后使用Matrigel进行培养并测定其生长速度。比较2D和3D培养条件下Caco-2细胞中肠道干细胞标志物Lgr5、Olfm4及增殖标志物Ki67的mRNA表达差异。免疫荧光染色分析2D和3D培养时Caco-2细胞内Ki67阳性细胞及lamp1阳性溶酶体的分布特点。比较5 Gy和15 Gy照射后Caco-2来源肠类器官中TUNEL阳性细胞分布特点。结果 3D培养时,Caco-2细胞可形成肠类器官,而IEC-6和CT26.WT细胞不能形成肠类器官,且单个Caco-2细胞也可形成肠类器官。Caco-2来源肠类器官中肠道干细胞标志物Lgr5、Olfm4和细胞增殖标志物Ki67的mRNA表达水平较2D培养时显著降低(P<0.05),Ki67阳性增殖细胞较2D培养显著减少。Caco-2来源肠类器官中细胞内溶酶体呈极性分布,与小肠组织切片中溶酶体在肠上皮细胞内的分布一致。电离辐射可引起Caco-2来源肠类器官内细胞发生凋亡,且凋亡细胞比例与照射剂量密切相关。结论 Caco-2在3D培养时可形成与在体肠道结构和功能类似的肠类器官,为下一步进行胃肠道电离辐射研究和药物评价研究提供了更加稳定可靠的体外研究模型。

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的：观察四君子汤总多糖（PPS）在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法：采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型，观察四君子汤PPS在造模后0h、8h及24h对细胞迁移面积的影响。结果：四君子汤在细胞迁移的8h及24h，对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100～400μg／ml范围内。结论：四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复，其机制与促进细胞迁移有关。

不同热处理方式的α-乳白蛋白对正常人肠道上皮细胞株增殖、周期及凋亡的影响

以经过巴氏杀菌方式(63℃加热30 min、72℃加热15 s、85℃加热15 s、95℃加热10 min)处理的α-乳白蛋白(α-lactalbumin,α-LA)为对象,研究其对正常人肠道上皮细胞株(human intestinal epithelial cells,HIEC)增殖、周期及凋亡的影响,并比较不同热处理对HIEC作用效果的差异性。在通过圆二色光谱测定α-LA二级结构、分析不同热处理方式对α-LA二级结构影响的基础上,模拟婴儿肠道条件对α-LA进行体外消化,采用CCK-8法和流式细胞术检测热处理消化后α-LA作用HIEC 48 h后,对细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果显示:经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA均对HIEC增殖具有促进作用,且在一定范围内促进效果随α-LA质量浓度升高而加强,在α-LA质量浓度为0.10 mg/mL、72℃加热15 s时促进效果最为显著(P<0.05);经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA在质量浓度为0.10 mg/mL、作用HIEC 48 h后,G0/G1期细胞比例显著降低(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。综上,热处理α-LA可以明显促进HIEC增殖,其作用机制可能与分裂细胞的比例增加从而抑制细胞凋亡有关。α-LA应用于婴儿配方产品中或可提高婴儿免疫能力,推荐添加量为0.10 mg/m L,推荐热处理方式为72℃加热15 s,但仍需进一步研究。

四君子汤总多糖及单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞迁移作用的比较研究

目的:研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞研究迁移的影响。方法:以IEC-6细胞为研究对象,采用体外细胞迁移模型,观察四君子汤总糖及各单味多糖对该细胞迁移的影响。结果:各多糖作用存在差异,茯苓多糖具有明显抑制细胞迁移的作用,白术多糖作用不显著,甘草多糖和党参多糖具有明显促进细胞迁移的作用。当各单味药多糖与总多糖相比时,总多糖的效用优于各单味药多糖。结论:四君子汤总多糖的作用可能是各单味药多糖综合作用的结果,也提示中药复方用药具有一定的合理性。

葡萄糖、胰岛素和尿酸对猪近端肾小管上皮细胞株血红素氧合酶-1的影响

目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmol/L,胰岛素浓度为0、10-9、10-8、10-7mol/L,尿酸浓度为0、0.1、0.2、0.4 mmol/L培养48 h条件下,LLC-PK1细胞HO-1活性的改变。结果0.1 mmol/L0、.2 mmol/L和0.4 mmol/L尿酸刺激48 h后,LLC-PK1的HO-1活性增加,并呈剂量依赖关系,而上述浓度的葡萄糖和胰岛素刺激48 h对LLC-PK1的HO-1活性无影响。结论一定浓度的尿酸可使LLC-PK1的HO-1活性升高,提示尿酸在细胞水平对肾小管上皮细胞的氧化应激过程产生影响。

人鼻咽癌上皮细胞株──CNE_3的建立和生物学特性

从１例鼻咽癌肝转移尸检者取出肝转移之癌组织，经裸鼠异种移植成功，然后又经离体培养建成细胞株，定名为ＣＮＥ３。对核细胞生物学特性进行观察，结果表明：细胞生长周期最大倍增时间为９６ｈ，最大增长倍数为２５倍；染色体为人类染色体核型，为三倍体和亚三倍体；有ＥＢ病毒基因组存在，以及ＥＢＮＡ－１及晚期末蛋白（Ｌｍｐ）表达；裸鼠体内回复试验仍具成瘤性，其组织结构与原标本相似，体外培养反复冻融细胞生物学特性不变；经检查，未发现支原体污染。