上皮细胞转化序列2通过调控p33生长抑制因子1表达影响食管鳞状细胞癌细胞的体外转移活性

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)与p33生长抑制因子1(p33ING1)的表达水平对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞转移活性的影响。方法采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测食管鳞癌组织和癌旁组织中ECT2和p33ING1的表达情况。将人食管鳞癌细胞系KYSE140细胞分为4组:空白组、阴性对照组(pcDNA 3.1 NC)组、过表达组(pcDNA 3.1 ECT2)和抑制表达组(si ECT2)。采用MTT法和细胞集落形成实验研究细胞的增殖和生长能力,Transwell实验和划痕实验研究细胞的侵袭和迁移能力,并用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测ECT2对p33ING1蛋白的影响。结果在食管鳞癌组织中ECT2表达增加,p33ING1表达降低。过表达ECT2能够显著增加KYSE140细胞的生长、集落形成、迁移以及侵袭能力,并能降低KYSE140细胞的凋亡率和p33ING1的表达;此外,抑制ECT2表达后能够逆转上述变化。结论ECT2高表达能够促进食管鳞癌KYSE140细胞的生长、转移,并抑制其凋亡,其机制可能与ECT2能够抑制p33ING1表达相关。

上皮细胞转化序列2在甲状腺乳头状癌中的表达研究

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)在甲状腺乳头状癌中的表达情况及意义。方法选取2020年5至12月于台州市中心医院手术切除的甲状腺乳头状癌组织标本35例及结节性甲状腺肿组织标本32例为研究材料。采用RT-PCR法检测两种组织中ECT2 mRNA表达水平,采用免疫组化法定性检测ECT2蛋白表达情况,采用Western blot法定量检测ECT2蛋白表达水平。结果相对于结节性甲状腺肿组织,ECT2 mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平上调(2.4327±0.0127,P<0.05)。ECT2蛋白在甲状腺乳头状癌组织表达阳性率明显高于结节性甲状腺肿组织(57.1%比6.3%,P<0.05)。甲状腺乳头状癌组织与结节性甲状腺肿组织ECT2蛋白表达水平分别为1.6542±0.0159、0.4826±0.0513(P<0.05),甲状腺乳头状癌组织ECT2蛋白表达上调。结论ECT2在甲状腺乳头状癌组织中表达上调,可能为甲状腺乳头状癌早期诊断提供分子生物学依据。

miR-223-3p靶向上皮细胞转化序列2基因调控胃癌细胞周期和凋亡的相关性研究

目的探讨miRNA-223-3p和上皮细胞转化序列2基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT2)在胃癌(gastric cancer,GC)细胞周期和凋亡中的作用和机制,并探讨其与GC临床病理因素的相关性及临床意义.方法首先采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测正常胃黏膜(GSE-1)和GC细胞(SGC-7901,BGC-823)中ECT2和miR-223-3p的表达水平;其次,采用免疫组织化学RT-PCR法检测80例GC患者的癌组织及相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)中ECT2和miR-223-3p的表达情况;miR-223-3p抑制物和模拟物转染SGC-7901细胞,RT-PCR和Western blot检测转染后miR-223-3p和ECT2的表达.最后用流式细胞仪检测转染后细胞周期和凋亡的变化.结果与正常胃黏膜细胞相比,GC细胞中ECT2和miR-223-3p的表达水平均明显升高(P<0.05);免疫组织化学和RT-PCR结果显示,GC组织中ECT2阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);两者表达均与GC的分化程度、Lauren分型相关(P<0.05),与TNM分期密切相关(P<0.01),与患者的性别、年龄、肿瘤直径、Bormann分型无明显相关(P>0.05);两者之间表达呈显著正相关(P<0.05);将miR-223-3p类似物转染SGC-7901细胞后ECT2表达上调,转染抑制剂后ECT2表达下调.miR-223-3p抑制物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用.结论 miR-223-3p是一种与GC细胞周期和凋亡密切相关的miRNA分子,他可以通过影响ECT2的表达来调节GC细胞的细胞周期和凋亡;两者可以作为反映GC生物学行为的有效指标.

肝癌组织上皮细胞转化序列2基因的表达及其临床意义

目的探讨肝癌组织上皮细胞转化序列2(ECT2)基因的表达及其临床意义。方法从GEO数据库下载相关芯片数据,选取GPL3921平台包含的220例正常肝组织和215例肝癌组织及其附带临床信息进行分析。根据ECT2基因(219787_s_at)表达值的中位数(5. 54)将肝癌患者分为ECT2基因低表达组107例和ECT2基因高表达组108例,比较两组患者的临床特征以及预后。采用Cox模型分析肝癌患者预后的影响因素。结果肝癌组织中ECT2基因表达水平高于正常肝组织(P <0. 05);相比于ECT2基因低表达组,ECT2基因高表达组的甲胎蛋白(AFP)水平、原发肿瘤-区域淋巴结-远处转移(TNM)分期和肿瘤转移风险更高,肿瘤直径更大,预后更差(P <0. 05)。多因素Cox分析结果显示,AFP>300 ng/ml、TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、高转移风险、ECT2基因高表达均是患者预后的独立危险因素(均P <0. 05)。结论 ECT2基因在肝癌组织中高表达,是肝癌患者预后的独立危险因素,ECT2基因高表达患者预后较差。

上皮细胞转化序列2在浸润性乳腺癌中的表达及其预后意义

目的:探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)在浸润性乳腺癌中的表达及其预后意义。方法:回顾性分析2018年1月至2021年6月联勤保障部队第九〇九医院收治的165例浸润性乳腺癌患者手术治疗的临床资料,并收集患者的肿瘤组织和对应癌旁正常组织。对乳腺癌肿瘤组织和癌旁正常组织进行ECT2免疫组织化学染色。分析不同组织中ECT2蛋白表达情况与病理和临床资料关系。使用多因素Logistic回归分析影响ECT2蛋白高表达的因素。利用Kmplot在线生存分析公共数据库,使用Kaplan-Meier法比较ECT2高表达与ECT2低表达乳腺癌患者的生存时间差异。结果:乳腺癌组织中的ECT2表达比例高于癌旁正常组织[57.58%(95/165)比12.73%(21/165)],差异有统计学意义( χ^(2)= 76.19, P<0.01)。ECT2高表达组患者的病理组织学分级更差[G 1级30.53%(29/95)比57.14%(40/70),G 2级40.00%(38/95)比28.57%(20/70),G 3级29.47%(28/95)比14.20%(10/40)]、存在淋巴结转移更高[71.58%(68/95)比7.14%(5/70)]、TNM分期更差[Ⅰ期15.79%(15/95)比34.29%(24/70),Ⅱ期27.37%(26/95)比27.14%(19/70),Ⅲ期41.05%(39/95)比28.57%(20/70),Ⅳ期15.79%(15/95)比10.00%(7/70)]、绝经比例更高[60.00%(57/95)比44.29%(31/70)]和Ki-67增殖指数更高[74.74%(71/95)比58.57%(41/70)]( P均<0.05)。淋巴结转移( OR = 2.764, P = 0.038)、病理组织学分级为G 3级( OR = 1.942, P = 0.010)、TNM分期为Ⅳ期( OR = 2.586, P<0.001)、Ki-67增殖指数≥14%( OR = 1.376, P = 0.006)是乳腺癌患者肿瘤组织ECT2蛋白高表达的影响因素。ECT2高表达乳腺癌患者生存期更差,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:浸润性乳腺癌肿瘤组织中ECT2蛋白表达增加。ECT2高表达的乳腺癌患者预后更差,ECT2可能是乳腺癌治疗的潜在分子靶点,值得进一步研究。

上皮细胞转化序列2诱导肝癌细胞上皮-间充质转化促进侵袭转移

目的 观察上皮细胞转化序列2（ECT2）对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力及其对肝癌细胞上皮-间充质转化（EMT）的影响.方法 应用Western blot检测5例肝细胞癌标本及其配对癌旁组织ECT2的表达;通过慢病毒介导的方法构建过表达ECT2肝癌细胞,采用克隆形成实验和Transwell小室等方法观察其与对照组比较增殖、迁移及侵袭能力的变化,分析ECT2诱导肝癌细胞上皮-间充质转化进而促进转移复发的相关机制.结果 ECT2在肝癌组织中的表达较其在癌旁组织中明显升高;体外实验结果显示慢病毒转染的高表达ECT2的HEP3B细胞增殖较其对照组明显增高[（84.2±12.3）个比（26.7±5.7）个,P＜0.05],对照组及过表达组发生迁移的细胞数分别为[（38.6±15.6）个比（103.9±21.2）个,P＜0.05].通过上调肝癌细胞ECT2蛋白的表达能够诱导肝癌细胞发生EMT,其上皮化表型E-钙黏蛋白（E-cadherin）、紧密连接蛋白-1（ZO-1）的表达下调,间质化表型N-钙黏蛋白（N-cadherin）和纤维连接蛋白（Fibronectin）上调.结论 ECT2可能通过诱导肝癌细胞发生EMT进而参与调控其侵袭转移的进程。

ECT2通过调控PI3K/AKT信号通路对胰腺癌细胞恶性行为、糖酵解及TH细胞分化的影响

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)通过调控PI3K/AKT信号通路对胰腺癌细胞恶性行为、糖酵解及TH细胞分化的影响。方法RT⁃qRCR检测人脐静脉内皮细胞系HUVEC及胰腺癌细胞中ECT2 mRNA表达,将胰腺癌Panc⁃1细胞株分为胰腺癌组(Panc⁃1细胞株正常培养)、NC组(Panc⁃1细胞株转染ECT2阴性对照)、ECT2 siRNA组(Panc⁃1细胞株转染ECT2 siRNA)、抑制剂组(Panc⁃1细胞株转染加入PI3K/AKT抑制剂LY294002),ECT2 siRNA+抑制剂组(Panc⁃1细胞株转染ECT2 siRNA加入PI3K/AKT抑制剂LY294002),采用RT⁃qRCR各组细胞中ECT2 mRNA表达;Transwell法检测各组Panc⁃1细胞侵袭能力;划痕实验检测迁移;流式细胞仪检测各组细胞IFN⁃γ及IL⁃4表达;免疫印迹分别检测糖酵解代表蛋白及PI3K/AKT表达。结果胰腺癌组、NC组、ECT2 siRNA组、抑制剂组及ECT2 siRNA+抑制剂组的ECT2 mRNA比较分别为1.00±0.00、0.95±0.03、0.41±0.08、0.65±0.05及0.20±0.04,组间比较,差异有统计学意义(F=310.700,P<0.05);胰腺癌组、NC组、ECT2 siRNA组、抑制剂组及ECT2 siRNA+抑制剂组Panc⁃1细胞侵袭数目分别为(256.30±28.36)个、(241.18±24.05)个、(155.48±17.56)个、(178.90±18.44)个及(95.15±12.10)个,组间比较,差异有统计学意义(F=59.310,P<0.01);胰腺癌组、NC组、ECT2 siRNA组、抑制剂组及ECT2 siRNA+抑制剂组Panc⁃1细胞迁移距离分别为(14.02±1.36)mm、(13.42±1.29)mm、(9.25±0.85)mm、(8.50±0.45)mm及(4.25±0.53)mm,组间比较差异有统计学意义(F=101.200,P<0.05);ECT2 siRNA组细胞IFN⁃γ升高及IL⁃4占比降低,与NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与抑制剂组相比,ECT2 siRNA+抑制剂组细胞IFN⁃γ升高及IL⁃4占比降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);ECT2 siRNA组细胞HIF⁃1α、GLUT1、HK⁃Ⅱ和PFK蛋白均降低,与抑制剂组无意义(P>0.05),与抑制剂组相比,ECT2 siRNA+抑制剂组细胞HIF⁃1α、GLUT1、HK⁃Ⅱ和PFK蛋白降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);ECT2 siRNA组细胞HIF⁃1α、GLUT1、HK⁃Ⅱ和PFK蛋白均降低,与NC组差异有统计学意义(P<0.05),与抑制剂组相比,ECT2 siRNA+抑制剂组细胞HIF⁃1α、GLUT1、HK⁃Ⅱ和PFK蛋白降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制ECT2可通过降低胰腺癌细胞糖酵解,提高Th细胞中IFN⁃γ表达而抑制恶性侵袭及迁移,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路活性相关。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中Ect2表达的影响

目的研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transfor-ming sequence 2 oncogene,Ect2)表达的影响,探讨annexin 5影响睾丸间质细胞增殖的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,不同剂量的annexin 5处理后,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR检测Ect2的mRNA表达改变,western blot分析睾丸间质细胞中Ect2蛋白质表达变化。结果 MTT法检测结果显示,annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖有明显的促进作用,且在2～3 d呈显著的剂量-时间依赖关系(P<0.01),在第5天细胞增殖作用已明显减弱。流式细胞分析发现,1 nmol/L annexin 5作用48 h时G2/M期细胞减少为24.49%,72 h时减少为16.43%,与对照组比较差异显著(P<0.05)。RT-PCR结果表明,0.1 nmol/L组和1 nmol/L组Ect2 mRNA表达[(0.77±0.06)和(0.85±0.04)]与对照组(0.67±0.06)比较,分别增加了14.9%(P<0.05)和26.9%(P<0.01),而10 nmol/L组Ect2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。western blot结果表明,1 nmol/L annexin 5作用组的Ect2蛋白质表达比对照组增加了20.9%[(1.50±0.15)vs(1.24±0.07),P<0.05],而0.1 nmol/L组和10 nmol/L组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖的促进作用是通过促进细胞周期由G2期向M期的转变来实现的。Ect2在基因和蛋白质水平均受annexin 5的影响,提示annexin 5调控睾丸间质细胞增殖可能通过增加Ect2的表达而实现。

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2(ECT2)蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果:miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系(r=-0.666,P<0.05);与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低(P<0.05),ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高(P<0.05);沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论:miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。

ECT2基因在人胰腺导管腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨上皮细胞转化序列2(epithelial cell transforming 2,ECT2)基因在人胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采集2018年7月至2019年3月在海军军医大学附属长海医院病理科PDAC及相应癌旁样本各35例。通过GEO数据库中人胰腺癌基因表达谱筛选差异表达基因,采用TCGA数据分析该基因在PDAC中的表达及与患者生存的相关性。以qPCR及免疫组化在人PDAC样本中验证了ECT2 mRNA及蛋白的表达。以siRNA干扰人胰腺癌细胞系PANC-1中ECT2基因的表达,CCK-8增殖实验检测肿瘤细胞增殖,流式细胞术检测对胰腺癌细胞凋亡的影响,最后WB检测凋亡相关蛋白的变化。结果:生物信息学分析筛选出胰腺癌中差异表达基因ECT2,TCGA数据库分析发现其在癌组织中高表达(t=4.005,P<0.05)并与生存显著相关(P<0.01)。mRNA(1.01±0.06 vs 4.25±0.12,t=24.09,P<0.01)及蛋白水平验证其在人PDAC样本中高表达。干扰ECT2基因后,其细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)、他莫昔芬诱导的细胞凋亡显著增加(P<0.01),同时影响凋亡相关蛋白BAX及BCL-2的表达。结论:ECT2基因在人PDAC中高表达并与患者生存相关,其增加了胰腺癌细胞的增殖及抗凋亡能力。本结果为探讨ECT2作为胰腺癌预后判断及治疗新靶点提供了实验依据。

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法:选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组(未转染)、miR-NC组(转染miR-302b-3p mimics阴性对照)、miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照)和anti-miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p inhibitor)。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2(ECT2)蛋白的表达水平。结果:与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而G 0/G 1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而G 0/G 1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低(P<0.05);与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高(P<0.05)。结论:miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。

CTC、ECT2、miR-411在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的 研究循环肿瘤细胞(CTC)、上皮细胞转化序列2(ECT2)、微小核糖核酸-411(miR-411)在非小细胞肺癌中的表达及相关性。方法 选择2020年2月至2021年2月在该院进行肺切除术的53例非小细胞肺癌患者的肺癌组织以及配对癌旁组织,以及同期在该院进行气管镜活检或者CT引导穿刺术的52例肺良性病变患者的肺组织。采用荧光定量PCR检测肺组织中miR-411表达水平,采用免疫印迹技术检测肺组织中ECT2表达水平。同时采集非小细胞肺癌患者和肺良性病变患者的外周血,检测CTC。结果 非小细胞肺癌组织ECT2和miR-411表达水平均高于其配对癌旁组织和肺良性病变肺组织(P<0.05);癌旁组织ECT2、miR-411水平低于肺良性病变肺组织(P<0.05)。非小细胞肺癌患者CTC数量明显高于肺良性病变患者(P<0.05)。临床分期高、分化程度低的非小细胞肺癌患者CTC数量及肺癌组织ECT2、miR-41表达水平均高于临床分期低、分化程度高的患者(P<0.05);有淋巴结转移的非小细胞肺癌患者CTC数量及肺癌组织ECT2和miR-411表达水平均高于无淋巴结转移的患者(P<0.05)。ROC曲线分析,CTC、ECT2、miR-411单项及联合检测诊断非小细胞肺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.542、0.531、0.589、0.748。结论 CTC及肺癌组织ECT2、miR-411在非小细胞肺癌患者中高表达,且三者具有相关性。

ECT2基因在结肠直肠癌组织中的表达及意义

目的:检测结肠直肠癌组织及相应癌旁组织中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT2)的m RNA表达以及蛋白质表达,并探讨其与结肠直肠癌临床病理因素的相关性及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应法检测结肠直肠癌病人的癌组织和相应癌旁组织ECT2 m RNA的表达;免疫组织化学法检测150例癌组织ECT2蛋白表达。结果:结肠直肠癌组织ECT2 m RNA表达水平明显升高(P<0.001);而ECT2蛋白表达水平与肿瘤直径(P=0.005)、CEA(P=0.006)以及TNM分期(P=0.001)密切相关。Kaplan-Meier生存曲线和Log-Rank检验提示,ECT2表达水平越高,结肠直肠癌病人预后越差(P<0.001)。多因素COX回归分析表明,ECT2在结肠直肠癌病人中可作为独立的预后分子标志物。结论:ECT2 m RNA及蛋白质在结肠直肠癌组织中均呈高表达,且ECT2表达水平越高,病人预后越差。由此可见,ECT2在结肠直肠癌的发生、发展中起重要作用,可作为反映结肠直肠癌生物学行为的有效指标。

ECT2基因在胃癌组织中的表达及意义

目的:检测胃癌组织及相应的癌旁组织中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT2)的蛋白及m RNA表达情况,并探讨其与胃癌临床病理因素的相关性及临床意义.方法:采用免疫组织化学S-P法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测50例胃癌患者的癌组织及相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)中ECT2蛋白及m RNA表达情况.结果:免疫组织化学结果显示,胃癌组织中ECT2蛋白阳性表达率(76.0%)显著高于癌旁组织(36.0%)(P<0.01);RT-PCR结果显示,癌组织中ECT2 mR NA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05).ECT2蛋白及m RNA表达均与胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤直径无明显相关(P>0.05);胃癌组织中ECT2蛋白表达与mR NA表达之间呈显著正相关(P<0.01).结论:ECT2蛋白及m RNA在胃癌组织中均呈高表达,且与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关;ECT2在胃癌的发生发展中起重要作用,可以作为反映胃癌生物学行为的有效指标.

ECT2基因沉默调控人乳腺癌细胞增殖和凋亡及其机制探讨

目的:探讨上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene,ECT 2)沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,以及其潜在的作用机制。方法:首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7和BT474)中ECT2 mRNA及蛋白的表达水平。将特异性靶向沉默ECT 2基因的siRNA(ECT2 siRNA)转染至乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,并用细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)通路激活剂处理或者微RNA-101(microRNA-101,miR-101)抑制子转染后,采用CCK-8和FCM法分别检测细胞增殖和凋亡情况,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)、Ras相关的C3肉毒底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)和miR-101的表达水平。结果:与正常乳腺上皮细胞相比,乳腺癌细胞中ECT2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P值均<0.05)。ECT 2基因沉默后,乳腺癌细胞增殖被明显抑制(P<0.05),细胞凋亡被明显促进(P<0.05),并且细胞中p-ERK和Rac1表达被明显下调(P值均<0.05),而miR-101表达被明显上调(P<0.05)。ERK激活剂作用后,ECT2 siRNA转染对p-ERK、miR-101和Rac1表达的影响被明显反转(P值均<0.05);miR-101抑制子转染后,ECT2 siRNA转染对细胞增殖、凋亡以及Rac1表达的影响被反转(P值均<0.05),而对p-ERK表达没有明显影响(P>0.05)。结论:ECT 2基因沉默可能通过ERK/miR-101/Rac1信号转导通路,调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡。

ECT2在宫颈癌组织中的表达及对预后的影响

目的:了解上皮细胞转化序列2(ECT2)在宫颈癌组织与癌旁组织中的表达水平差异及其临床意义。方法:利用Oncomine数据库分析ECT2在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达水平,GEPIA软件分析ECT2表达水平与预后的关系。免疫组织化学染色分析ECT2在宫颈癌组织和癌旁组织中的蛋白表达水平及其与临床病理特征的关系。构建ECT2过表达的Hela细胞和ECT2敲降的Siha和C33a细胞。划痕实验检测细胞迁移能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织的ECT2的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.001);ECT2与宫颈癌患者病理分级相关(P<0.05),且ECT2高表达的宫颈癌患者预后更差;ECT2促进宫颈癌细胞迁移。结论:ECT2在宫颈癌组织中表达水平较癌旁组织更高,通过促进宫颈癌细胞迁移而影响宫颈癌患者的预后。

乳腺癌发生和转移相关差异基因GEO芯片分析

目的乳腺癌是威胁女性健康的重大疾病,其发病率日益升高。本研究旨在筛选并验证与乳腺癌发生和转移相关的共同差异基因,并对差异基因进行生物信息学分析,对进一步筛选得出的差异基因进行表达水平验证。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载组织芯片数据GSE109169和GSE100534,用R语言软件筛选差异基因。运用Cytoscape3.6.0进行富集,筛选关键基因,运用STRING数据库对筛选出的共同差异基因进行蛋白互作网络分析,运用Kaplan-Meier Plotter绘制关键基因的生存曲线,运用实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证关键基因的mRNA表达水平。结果筛选得到95个可能同时参与乳腺癌发生和转移过程的共同差异基因。共同差异基因主要富集于PI3K信号通路、p53通路、Jak-STAT信号通路、细胞-基质间黏附、细胞分化和胶原代谢过程等。关键蛋白互作网络由13个基因组成,将这13个基因与基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库分析得出的共同差异基因取交集,得到3个关键差异基因CDC6、ECT2和RRM2。生存分析表明,高表达这3个基因的患者预后差,总生存率低。qRT-PCR检测结果显示,与正常乳腺上皮细胞相比,这3个关键差异基因在乳腺癌细胞系中的表达升高,差异有统计学意义,P<0.05。结论 CDC6、ECT2和RRM2基因在乳腺癌中的表达高于其在正常乳腺上皮细胞中的表达,与乳腺癌者的预后密切相关。