MicroRNA-7-5p通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道

目的:探讨microRNA-7-5p通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/血清糖皮质激素诱导激酶-1(SGK-1)信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)的机制。方法:对人类非小细胞肺癌肺泡上皮细胞系A549细胞转染microRNA-7-5p模拟剂,设为microRNA-7-5p组,阴性对照组A549细胞转染与目的基因序列无同源性的不表达microRNA-7-5p的阴性对照剂。雷帕霉素组在A549细胞培养基中加入雷帕霉素。PP242组在A549细胞培养基中加入PP242。空白对照组仅加入lipo fectamineTM 2000试剂。采用RT-qPCR检测各组SGK-1 mRNA;免疫印迹法检测SGK-1蛋白、ENaC蛋白的表达量。比较各组的microRNA-7-5p表达水平、SGK-1 mRNA及蛋白表达量、ENaC蛋白表达量。结果:microRNA-7-5p组的microRNA-7-5p表达水平高于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组和PP242组,A549细胞转染成功上调microRNA-7-5p表达水平(P<0.05)。microRNA-7-5p组中,SGK-1 mRNA水平、SGK-1及ENaC-α、ENaC-β、ENaC-γ蛋白表达量均低于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组(P<0.05)。结论:microRNA-7-5p可能通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控ENaC。

腺苷A2a受体对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的上调作用

目的研究腺苷A2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4、8、24、48h)的腺苷A2a受体激动剂CGS-21680干预A549细胞,分别用RT-PCR和Western blot检测α-ENaC mRNA和蛋白表达情况。结果①不同剂量CGS-21680作用A549细胞8h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平从0.1μmol/L开始增加,并与CGS-21680剂量呈正相关(mRNA表达:r=0.959,P<0.01;蛋白表达:r=0.988,P<0.01),与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②100μmol/LCGS-21680作用A549细胞1h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平开始增加,4h后与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论激动腺苷A2a受体能上调α-ENaC的表达,有益于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后。

上皮细胞钠离子通道ENaC及其基因研究现状

人类上皮细胞钠离子通道（hENaC）由α、β、γ3个亚单位组成，分别由CNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因所编码。ENaC负责钠离子的限速重吸收，对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用。功能获得性ENaC基因突变可引起一种罕见的遗传性高血压——Liddle综合征；而功能丧失性ENaC基因突变可引起一种遗传性低血压——假性低醛固酮血症；原发性高血压是受遗传因素和环境因素共同影响的复杂性疾病，由于ENaC的维持钠的自身平衡和血压的重要作用，因此ENaC基因作为原发性高血压的候选基因而备受关注。

黄芪注射液对人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549钠离子通道表达的影响及其机制

目的:探讨黄芪注射液(AI)对肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)表达的影响及其作用机制。方法:选择典藏A549细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测AI对其增殖的影响,采用Western Blot筛查AI促进ENaC蛋白各亚基(α、β、γ)高水平表达的最佳浓度和最佳作用时间。继而将培养A549细胞分为自身空白对照组、AI组、抑制剂组和AI+抑制剂组,在对应培养细胞中加入不同抑制剂孵育2h,再加入AI孵育12h后,采用Western Blot检测抑制剂AG490、PDTC、SB203580和Wortmannin对AI处理的A549细胞中α、β、γENaC蛋白表达的影响,统计比较它们之间的差异。结果:AI对A549细胞的增殖无明显影响,但能上调α-ENaC、β-ENaC和γ-ENaC的表达,最佳浓度为8mg/ml,最佳作用时间为12h。PDTC可抑制AI上调的β-ENaC(t=3.01,P<0.05)和γ-ENaC(t=4.53,P<0.05)表达。其它抑制剂不能抑制AI上调的各亚基ENaC表达。结论:AI可通过NF-κB信号通路增加A549细胞的ENaC表达;对研究AI调节肺内水钠平衡,防治肺水肿等有积极作用。

上皮细胞钠离子通道各亚基表达与子痫前期发病时间的相关性

目的探讨上皮细胞钠离子通道(epithelial Na+channel,ENaC)各个亚基表达在维吾尔族子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法定期产检并分娩或终止妊娠的维吾尔族子痫前期孕妇122例,根据发病时间分为早发型(孕周<34周)子痫前期50例(早发型组)和晚发型(孕周≥34周)子痫前期72例(晚发型组);定期产检并足月分娩的正常孕妇125例为对照组,取各组孕妇的胎盘组织,采用实时荧光定量PCR法检测胎盘组织ENaCα、β、γ3个亚基mRNA相对表达量,采用Western blot法检测胎盘组织ENaCα、β、γ3个亚基蛋白相对表达量。结果3组胎盘组织SCNN1A、SCNN1G mRNA和其编码的ENaCα、γ蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。早发型组孕妇胎盘组织SCNN1B mRNA(0.880±1.090)和其编码的ENaCβ蛋白(0.728±0.345)相对表达量均低于对照组(3.490±1.020、1.201±0.621)和晚发型组(3.99±2.12、1.424±0.134)(P<0.05),晚发型组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ENaCβ亚基表达在维吾尔族早发型子痫前期呈低表达,ENaCβ亚基可能成为预测早发型子痫前期的指标。

上皮细胞离子通道对雌性生殖道内液体微环境的调节作用：对生殖与不孕的影响(英文)

雌性生殖道内适宜的液体微环境对一系列生殖事件起至关重要的作用。位于生殖道上皮细胞顶膜或基底膜的一系列离子通道和转运体,通过对水、电解质的跨膜转运,从而调节雌性生殖道内液体的分泌与吸收。本综述着重探讨了上皮细胞钠离子通道和囊性纤维化跨膜电导调节体对雌性生殖道内液体容量和成分的调节以及它们在不同生殖事件,比如精子获能及着床中的重要作用。同时对因离子通道失活或失调引起的雌性生殖道内液体微环境稳态失衡导致的一系列病理改变,如卵巢过度刺激综合征、输卵管积水以及不孕提出了新的见解。

FOXO1对急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道的调控作用及其机制

目的:探讨叉头框蛋白O1(FOXO1)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)的调控作用,并阐明其可能的作用机制。方法:20只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和LPS组,每组10只。经相应处理后分别留取标本,HE染色观察2组小鼠肺组织病理形态表现,RT-PCR和Western blotting法检测2组小鼠肺组织中α亚基ΕΝαC(αENaC)mRNA表达水平及磷酸化FOXO1(pFOXO1)表达水平。培养肺泡上皮A549细胞,分别进行基因干预,使A549细胞过表达或沉默FOXO1基因,RT-PCR法检测αENaC mRNA表达水平。A549细胞分为对照组、胰岛素组、胰岛素+PI3K抑制剂组和胰岛素+AKT抑制剂组,分别干预后收集细胞,Western blotting法检测各组A549细胞中pFOXO1(Ser256)蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组A549细胞中αENaC mRNA表达水平,免疫荧光法检测FOXO1在细胞中的定位情况。结果:与对照组比较,LPS组小鼠肺组织病理评分明显升高(P<0.05),肺组织中pFOXO1(Ser256)和αENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),二者呈正相关关系(r=0.703,P<0.05);与对照组比较,过表达FOXO1组A549细胞中αENaC mRNA表达水平降低(P<0.05),沉默FOXO1组αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,胰岛素组A549细胞中pFOXO1(Ser256)蛋白和αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05),pFOXO1主要分布于细胞质中,而胰岛素+PI3K抑制剂和胰岛素+AKT抑制剂组A549细胞中αENaC mRNA和pFOXO1蛋白表达水平低于胰岛素组P<0.05)。结论:FOXO1磷酸化失活后由细胞核穿梭至细胞浆,对αENaC的抑制作用减弱,从而上调αENaC表达。

三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织液体转运相关蛋白表达的影响

目的通过观察三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织病理组织学、AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达的影响探讨其治疗心衰肺水肿的机制。方法选择雄性SD大鼠,通过结扎腹主动脉、腹腔注射氯化铵造成心衰急性肺水肿模型,随机分为模型组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组、中药低剂量+西药组、中药高剂量+西药组。给药1周后观察各组大鼠肺组织含水率、病理组织学及AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达水平。结果与模型组比较,各给药组肺含水量均减少(P<0.05);组织细胞间的炎性浸润和肺泡间的充血症状均改善。AQP1、AQP5蛋白表达均不同程度地升高,中药低剂量组AQP1差异有统计学意义(P<0.05),AQP5差异无统计学意义(P>0.05),其余给药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC蛋白表达均不同程度地升高,空白对照组、中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。AQP1、AQP5mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。中药低、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论三子利水颗粒可通过升高AQP1、AQP5、ENaC蛋白表达及mRNA表达含量来改善上皮细胞病理组织形态,达到清上焦肺水,缓解心衰肺水肿体征的目的。

电针对膜迷路积水豚鼠耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α表达的影响

目的探讨电针对血管加压素(arginine vasopressin,AVP)诱导的美尼尔综合征膜迷路积水豚鼠耳蜗血管加压素受体2(vasopressin type 2 receptor,V2R)、水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)、上皮细胞钠离子通道蛋白-α(epithelial sodium channel-α,ENaC-α)表达的影响,初步阐明电针干预美尼尔综合征膜迷路积水机制。方法白色红目豚鼠分为正常组、模型组、电针刺组,每组12只。采用AVP腹腔注射建立膜迷路积水模型。电针刺组给予“百会”、左侧“听宫”电针治疗,20min/次,每日1次,共治疗10日。治疗结束后每组6只豚鼠采用HE染色法观察耳蜗积水程度,每组6只豚鼠采用Western blot法检测左侧耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组耳蜗积水程度增加(P<0.01),与模型组比较,电针刺组耳蜗积水程度降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达增加(P<0.01),与模型组比较,电针刺组耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达减弱(P<0.01)。结论电针可改善膜迷路积水豚鼠耳蜗积水程度,其机制可能与下调耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达有关。

Liddle综合征研究进展

Liddle综合征是一种常染色体显性遗传的单基因高血压病，其临床特征是早发的高血压，低血钾，低肾素，低醛固酮血症，对上皮钠离子通道（ENaC）抑制剂敏感，而对醛固酮抑制剂不敏感。虽然在该综合征的诊断和治疗方面已取得很大进展，但仍有部分患者被误诊以致早年发生心肾功能不全等靶器官损害、脑卒中甚至猝死。近年来，由于分子生物学和分子遗传学的发展，对Liddle综合征发病机制的研究不断深入。该综合征的遗传基础为编码ENaC的基因发生突变引起上皮钠通道过度激活导致肾脏远曲小管对钠水重吸收增强所致，一旦诊断明确，单服阿米洛利即可取得良好的疗效。本文将对Liddle综合征的研究现状作一综述。

甲泼尼龙对机械通气相关性肺损伤大鼠肺泡内液体清除的影响

目的 评价甲泼尼龙对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠肺泡内液体清除的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为三组(n=20):对照组(C组)、机械通气组(V组)和甲泼尼龙组(Mp组).C组不行机械通气,自主呼吸空气4h;V组机械通气(RR40次/min,VT 40 mL/kg,I∶E1∶1,PEEP0,FiO2 21%)4h;Mp组机械通气前20 min静注甲泼尼龙10 mg/kg.机械通气4h时,取血标本和肺组织,测定肺湿/干质量(W/D)比值与肺通透指数(LPI),观察肺组织病理学结果,测定肺泡内液体清除率(AFC).Western blot法检测肺组织细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)、钠钾三磷酸腺苷酶(Na^+-K^+-ATPase)的表达水平.结果 与C组比较,V组大鼠肺组织LPI和W/D比值升高[(2.17±0.07) ×10^-3 vs.(6.46±0.31)×10^-3,4.32±0.18 vs.8.74±0.53],AFC降低(%:30.56±5.35 vs.13.85 ±2.39),p-ERK表达上调(0.51 ±0.03 vs.1.19±0.13),ENaC和Na+-K+-ATPase表达下调(1.86±0.23 vs.0.71 ±0.08,1.82±0.21 vs.0.65±0.05),P均<0.05,Mp组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与V组比较,Mp组大鼠肺组织LPI和W/D比值降低[(6.46±0.31) ×10^-3 vs.(2.67±0.11) ×10^-3,8.74±0.53 vs.4.77±0.21],AFC升高(%:13.85 ±2.39 vs.28.23 ±4.78),p-ERK表达下调(1.19±0.13 vs.0.86±0.08),ENaC和Na^+-K^+-ATPase表达上调(0.71 ±0.08 vs.1.71 ±0.18,0.65 ±0.05 vs.1.65±0.14),P均<0.05.结论 甲泼尼龙可通过促进肺泡内液体清除来减轻大鼠VILI,其机制与抑制ERK磷酸化,上调ENaC和Na^+-K^+-ATPase表达有关.

SCNN1A多态性及其编码蛋白表达与子痫前期的相关性分析

目的 探讨SCNN1A多态性及其编码蛋白表达在维吾尔族子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义。方法 选择2017年1月至2019年12月在新疆维吾尔自治区人民医院(以下简称“我院”)分娩或终止妊娠的122例维吾尔族子痫前期孕妇为病例组;按发病时限分为早发型子痫前期组(发病孕龄<34周,50例)、晚发型子痫前期组(发病孕龄≥34周,72例)。同时按年龄、孕次与病例组进行匹配,收集同期在我院定期产检、并足月分娩的125名正常孕妇为对照组。收集两组的胎盘组织,提取DNA、RNA和蛋白,并一代测序检测SCNN1A 13号外显子多态性位点,采用real-time PCR检测α-ENaC m RNA转录水平,采用Western blot检测α-ENaC蛋白表达水平。分析α-ENaC蛋白表达水平与肾功能指标的相关性。结果 两组SCNN1A基因13号外显子6个突变位点中只存在一个多态性位点—T663A。两组T663A多态性位点基因类型比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。各组T663A多态性位点基因型及等位基因比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。不同T663A多态性位点基因型α-ENaC蛋白表达比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。各组α-ENaC mRNA、蛋白比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。α-ENaC蛋白相对表达量与尿蛋白呈负相关(r=-0.846,P <0.05)。结论 α-ENaC蛋白表达与孕妇的肾功能损害有关。

护骨胶囊含药血清对成骨细胞功能的影响

目的:研究护骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及成骨能力的影响,并初步探讨其调节成骨细胞功能的可能机制。方法:酶消化法体外培养并鉴定大鼠成骨细胞,血清药理学方法制备护骨胶囊含药血清和空白血清对成骨细胞进行干预,CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶试剂盒分别检测成骨细胞的增殖和分化情况,半定量RT-PCR法和Western blot法检测成骨功能指标基因和上皮细胞钠离子通道(ENa C)基因的m RNA和蛋白表达。结果:与空白血清组比较,5%、10%护骨胶囊含药血清可显著促进成骨细胞增殖(P<0.05),10%、20%浓度的护骨胶囊含药血清可显著促进成骨细胞分化(P<0.05),10%护骨胶囊含药血清可显著上调成骨功能指标基因和ENa C基因m RNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论:护骨胶囊含药血清能明显提高成骨细胞的增殖、分化和骨形成能力,且同时上调了成骨细胞上ENa C基因的m RNA和蛋白表达,提示护骨胶囊可能通过ENa C介导的调节途径改善成骨细胞功能,为明确其药效机制提供了新思路。

α-ENaC在呼吸系统疾病中的研究进展

上皮细胞钠离子通道(ENaC)是广泛分布于全身各上皮细胞膜表面的离子通道,在呼吸道主要分布于肺泡上皮细胞和气管上皮细胞中,具有调节细胞内Na+浓度、维持体液平衡的功能。人类的ENaC由α、β、γ和δ4个亚单位构成,其中α-ENaC作为ENaC发挥功能的必需元件,是Na+转运的限速步骤。本文就近年来有关α-ENaC的结构、功能异常与呼吸系统相关疾病间的关系及潜在调节机制进行系统综述,并对不同药物的治疗效果进行总结,以期为揭示呼吸系统相关疾病的发病机制、促进新型药物的研发提供理论依据。

Liddle综合征的临床表现及诊治

Liddle综合征是一种常染色体显性遗传病,以早发性高血压为特征,常伴有低钾血症和代谢性碱中毒。因其低醛固酮水平,又称“假性醛固酮增多症”。本遗传病的分子基础在于SCNN1A、SCNN1B和SCNN1G的基因突变,分别编码ENaC的α、β和γ亚基。Liddle综合征的临床表现不典型,故诊断较困难。目前采用基因测序能明确诊断,并与原发性醛固酮增多症、继发性醛固酮增多症等疾病进行鉴别诊断。治疗基于上皮细胞钠离子通道(ENaC)拮抗剂如氨苯喋啶、阿米洛利明确有效,对螺内酯治疗无效。本篇综述介绍了Liddle综合征的流行病学调查、分子学机制、临床表现、诊断及鉴别诊断和治疗,总结相关经验,为临床工作提供参考。