上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的构建上皮膜蛋白1(EMP1)基因真核表达载体p EGFP-N1-EMP1,探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应(PCR)扩增EMP1基因,双酶切法连接至真核表达载体p EGFP-N1双酶切产物大片段,构建p EGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导法将p EGFP-N1-EMP1重组质粒和p EGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞,荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功克隆EMP1全长基因,经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体p EGFP-N1,转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示,p EGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组,Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于p EGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示,EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论成功构建了EMP1真核表达载体,并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。

过表达上皮膜蛋白1对结直肠癌SW-480细胞生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protejn-1,EMP1)在人结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)组织中的表达水平及其过表达对CRC SW-480细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:免疫组织化学、Western blotting方法检测63例CRC组织及31例癌旁组织中EMP1的表达水平,分析EMP1表达与CRC临床病理参数的关系。慢病毒介导将pLenti6-EMP1质粒转染SW-480细胞,建立EMP1过表达细胞,转染plenti6/V5-DEST空白质粒为对照。Real-time PCR及Western blotting检测转染后SW-480细胞株中EMP1的表达,MTT、流式细胞术及Transwell实验分别检测EMP1过表达对SW-480细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果:EMP1蛋白在人CRC组织的表达显著低于癌旁组织(0.257±0.022 vs 0.863±0.086,P<0.05),并且其表达水平在不同T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及组织分级组间表达有显著差异(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤部位无关(P>0.05)。成功构建EMP1过表达的LeEMP1细胞。与LeEmpty细胞相比,LeEMP1细胞的增殖能力显著下降[(60.94±4.04)%vs(100.00±0.00)%,P<0.05],凋亡率显著升高[(12.10±1.30)%vs(3.10±0.60)%,P<0.05]、侵袭转移能力显著降低[穿膜细胞数:(87.00±12.00)vs(178.00±21.00)个,P<0.05]。LeEMP1细胞Caspase-9表达显著高于LeEmpty细胞(0.764±0.073 vs 0.231±0.029,P<0.05),VEGFC表达显著降低(0.185±0.022 vs 0.663±0.065,P<0.05)。结论:人CRC组织中EMP1蛋白表达明显减低,过表达EMP1能够抑制CRC SW-480细胞的恶性生物学行为,其可能通过调控Caspase-9和VEGFC的表达来发挥作用。

C-myc及上皮膜蛋白1在脑胶质瘤中的表达

目的探讨C-myc及上皮膜蛋白1(EMP1)在脑胶质瘤中的表达并分析两者表达的相关性。方法选取脑胶质细胞瘤65例为观察组,术前未做其他治疗,并以尸检标本正常脑组织15例为对照组。应用免疫组织化学方法检测C-myc和EMP1蛋白在两组中的表达,分析两者与不同组织学级别脑胶质瘤的相关性及两者之间的关联性。结果 C-myc和EMP1在胶质瘤中的阳性表达率明显高于正常脑组织(P<0.05);C-myc和EMP1蛋白表达与肿瘤病理组织学分级相关,且随胶质瘤恶性程度的上升而增高(P<0.05);Pearson相关分析结果显示胶质瘤组织中C-myc与EMP1蛋白表达呈显著正相关(r=0.957,P=0.043)。结论 C-myc与EMP1在人脑胶质瘤中显著高表达,两者表达呈明显正相关,并且与胶质瘤的恶性程度密切相关。

上皮膜蛋白-1在人椎间盘髓核细胞中的表达

目的观察上皮膜蛋白-1(epithelia membrane protein-1,EMP-1)在人椎间盘髓核细胞中存在的表达。方法利用我们已建成的人胚椎间盘髓核细胞和退变椎间盘细胞培养体系,采用半定量反转录PCR和免疫组化方法检测EMP-1在这两种细胞中的表达情况。结果人胚及退变椎间盘髓核细胞中EMP-1均有表达,分布在不同部位,且具有一定的丰度。结论 EMP-1在正常和退变椎间盘细胞中的存在和生物学特性改变,提示EMP-1可能在椎间盘退变中担当重要角色。

EB病毒潜伏膜蛋白1基因对上皮细胞增殖的影响

为了研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）基因对上皮细胞增殖的影响，探索ＬＭＰ１在上皮细胞肿瘤发生中所起的作用。用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞，检测了转染细胞中ＬＭＰ１的表达，观察细胞在软琼脂中的集落形成能力、ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果显示，被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛，能在软琼脂中形成多个集落，ＭＴＴ吸收能力增强，ＰＣＮＡ的表达水平增高。因此认为ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，促进细胞的生长、增殖和转化。

EB病毒潜伏膜蛋白1对人支气管上皮细胞转化作用机理的研究

背景与目的:目前许多研究显示潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1,LMP1)在一些上皮源性肿瘤的发生中可能起重要作用,但有关LMP1对正常上皮细胞作用的研究并不是很多。因而,本研究拟观察EBV-LMP1对人支气管上皮细胞(humanbronchialepithelial,HBE)的转化作用,并初步探讨其作用机制。方法:将LMP1单独或与hTERT逆病毒表达载体共同转染HBE细胞,经抗性药物筛选获得阳性细胞克隆;通过绘制细胞生长曲线,进行软琼脂集落形成试验、端粒酶活性检测和cyclinA、p21、CDK4蛋白表达的检测,研究LMP1对HBE细胞生物学特性的影响。结果:共同转染LMP1和hTERT的HBE细胞生长旺盛。各组细胞HBE/LMP1+hTERT、HBE/LMP1和HBE/pLNSX+pBabe的软琼脂集落形成率分别为22.98%、16.94%和8.85%;端粒酶活性分别为2.825、2.441、1.876。我们进行Westernblot检测发现前两组细胞cyclinA表达上调、p21表达下调,且两组之间无明显差异;而CDK4蛋白在各组之间表达一致。结论:在转化HBE细胞的过程中,LMP1和hTERT可能具有协同作用,通过调节cyclinA和p21蛋白的表达水平,引起细胞异常增殖,使细胞向恶性化转变。

上皮膜蛋白1在鼻咽癌组织中的表达特征

目的探讨上皮膜蛋白1(EMP1)在鼻咽癌组织与正常鼻黏膜组织中的表达差异及其与疾病发展的关系.方法收集40例鼻咽癌患者的癌组织(实验组)与正常鼻黏膜组织(对照组)各40份标本,RT-qPCR、免疫荧光染色和免疫印记技术检测EMP1在两种组织中的表达情况;40例鼻咽癌标本免疫印迹测定EMP1灰度值与其对应的肿瘤分化程度、临床分期进行二元线性回归分析.结果与正常鼻黏膜上皮对比,鼻咽癌上皮细胞的EMP1表达明显降低(P<0.05),肿瘤细胞EMP1的表达与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05),与临床分期不存在线性关系(P>0.05).结论EMP1在鼻咽癌细胞和正常鼻黏膜细胞表达有差异,其值可能预示肿瘤分化程度.

上皮膜蛋白1调控人鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)对人鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 通过脂质体介导,对人鼻咽癌细胞CNE-1(简称CNE-1)分别进行pcDNA3.1(+)空载体质粒和pcDNA3.1(+)-EMP1过表达重组质粒转染。采用实时荧光定量PCR、免疫印记技术检测转染CNE-1与人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(简称HNEpC)中EMP1的表达水平。后续实验分3组,分别为CNE-1组(对照组)、pcDNA3.1(+)空载体质粒转染CNE-1(空载体组)和pcDNA3.1(+)-EMP1过表达重组质粒转染CNE-1(过表达组),进行CCK8、集落形成实验、Transwell迁移与侵袭实验,比较3组中EMP1的表达对肿瘤细胞活力、细胞增殖、细胞迁移与侵袭的影响。结果EMP1 mRNA和EMP1在对照组中的相对表达量均显著低于过表达组和HNEpC组,差异均有统计学意义(P均<0.05),与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞活力、集落形成率、细胞迁移及侵袭数,对照组均显著高于过表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05),与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EMP1在CNE-1和HNEpC中表达有差异,体外实验证实了上调EMP1表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的生物学行为。

四次跨膜蛋白1在乳腺癌中的表达及其促进乳腺癌进展的作用机制

目的·探究四次跨膜蛋白1 (tetraspanin 1,TSPAN1)在乳腺癌中的表达,及其对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法·使用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测106例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中TSPAN1的表达,并分析其与患者临床特征的相关性。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TSPAN1 mRNA在乳腺癌及癌旁组织中的表达,及其与患者临床特征的相关性。在乳腺癌细胞MDA-MB-231、SUM159PT中下调TSPAN1后,通过细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TSPAN1对上述细胞迁移、侵袭的影响,并采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白)的表达。结果·IHC的结果显示,TSPAN1在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.000),且其表达水平与肿瘤的总TNM分期、M分期、N分期和病理学分级显著相关(均P<0.05)。对来自TCGA数据库的转录组测序数据分析的结果显示,TSPAN1 mRNA在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.000),其在TNMⅢ~Ⅳ期的乳腺癌组织中的表达高于TNMⅠ~Ⅱ期(P=0.007)。与转染Control siRNA相比,转染TSPAN1 siRNA的MDA-MB-231和SUM159PT细胞的迁移、侵袭能力均有所下降,E-钙黏蛋白的表达增加、N-钙黏蛋白及波形蛋白的表达减少(均P<0.05)。结论·TSPAN1在乳腺癌组织中表达较高,可促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中EMP1、COX-2及Stathmin蛋白表达与上皮化生程度的关系

目的检测鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中上皮细胞膜蛋白1(EMP1)、环氧化酶2(COX-2)及Stathmin蛋白的表达情况,分析其与上皮化生程度的相关性。方法选取2015年1月~2016年3月在本院就诊的鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤患者28例作为实验组,20例肥厚性鼻炎患者的下鼻甲黏膜组织作为对照组,采用免疫组化技术和q RT-PCR检测鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤、下鼻甲黏膜组织EMP1、COX-2以及Stathmin的表达情况,并比较三种因子在不同组织中的表达情况。结果实验组EMP1蛋白表达的阳性率显著低于对照组(P<0.05),COX-2及Stathmin蛋白表达的阳性率显著高于对照组(P<0.05)。实验组EMP1的m RNA水平显著低于对照组(P<0.05),COX-2及Stathmin m RNA水平显著高于对照组(P<0.05)。EMP1蛋白表达水平与上皮化生的严重程度呈负相关,COX-2及Stathmin蛋白表达水平与上皮化生的严重程度呈正相关。结论鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中EMP1、COX-2及Stathmin蛋白的异常表达与上皮化生程度有关,联合检测EMP1、COX-2及Stathmin蛋白表达可评估鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤上皮异常重塑情况。

上皮膜蛋白1在实验性糖尿病大鼠模型中额叶皮质血—脑屏障上的表达

目的测定不同时间点实验性糖尿病大鼠额叶皮质血—脑屏障(BBB)上皮膜蛋白1(EMP1)的表达。方法选成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病组(STZ组)和对照组(CON组),每组分为2w、4w、8w 3个亚组,采用免疫组织化学法检测EMP1的表达。结果STZ大鼠与CON大鼠比较,4w组中STZ大鼠上EMP1的表达显著增多(P<0.01),2w组和8w组中差异无统计学意义;EMP1的表达在STZ大鼠各亚组之间及CON大鼠各亚组之间比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论 EMP1在实验性糖尿病大鼠额叶皮质BBB上的表达改变,在模型建立成功后4w时表达显著增加。

上皮膜蛋白1的研究进展

上皮膜蛋白1(EMP1)属跨膜蛋白家族亚组,分布于人体多种组织,在细胞的生长、增殖、分化、凋亡中具有重要的调节功能。并与肿瘤的发生、进展相关。EMP1可望成为新的生物学标记,为肿瘤的筛查、判断病情严重程度以及指导治疗提供一条可行的途径。

LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达

目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果:(1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论:LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。

鼻咽癌中EMP1蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨上皮膜蛋白1(EMP1)在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法和Western blot检测75例鼻咽癌组织及距癌组织边缘2 cm以上的镜下未见癌浸润的正常鼻咽组织中EMP1蛋白的表达情况,并分析其与临床病理指标的关系。结果:免疫组织化学结果表明,EMP1蛋白在鼻咽癌组织及正常鼻咽组织中的表达阳性率分别为33.3%和74.2%,前者显著低于后者(P<0.05)。Western blot结果表明,EMP1蛋白在鼻咽癌组织的相对表达量较正常鼻咽组织明显降低(<0.05)。EMP1蛋白表达与鼻咽癌T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及细胞分化程度有关(P<0.05)。结论:EMP1低表达可能促进了鼻咽癌的发病过程,在鼻咽癌的发生发展过程中具有重要作用。

EMP1蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测上皮膜蛋白基因1(EMP1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法对60例OSCC患者组织切片中的EMP1表达进行检测,分析不同临床参数中EMP1的表达差异,并计算EMP1表达评分用于诊断OSCC的灵敏度和特异度。结果:EMP1主要表达在细胞膜和(或)胞浆中,淋巴细胞及细胞间质中无明显表达。临床早期OSCC的EMP1表达评分高于晚期,无淋巴结转移OSCC的EMP1表达评分高于有淋巴结转移者,差异有统计学意义。用于诊断淋巴结转移的灵敏度和特异度分别为61.9%和77.8%,用于诊断OSCC临床分期的灵敏度和特异度均为70.0%。结论:EMP1的表达与淋巴结转移、临床分期存在一定相关性,可能对临床诊断和治疗OSCC具有指导价值。

上皮膜蛋白1在上皮性卵巢癌顺铂耐药中的作用及意义

目的探讨上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)顺铂耐药中的作用及临床意义。方法共收集56例EOC复发再次手术的石蜡标本,采用免疫组化检测EOC组织中EMP1蛋白的表达情况,采用积分光密度(IOD)描述其表达量。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)、蛋白印迹法(Western blot)检测EMP1 mRNA及蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP细胞系中的表达情况。采用Cox回归分析评估其对预后影响。结果免疫组化结果显示:顺铂敏感组中EMP1蛋白的IOD值为9.45±3.42,顺铂耐药组为17.70±8.10,差异有统计学意义(P<0.001)。qRT-PCR结果显示,EMP1 mRNA在SKOV3/DDP细胞中的表达显著高于SKOV3细胞(P<0.001)。Western blot结果显示,SKOV3/DDP细胞中EMP1蛋白的表达高于SKOV3细胞(P=0.002)。ROC曲线显示,EMP1表达高、低水平的截断值,IOD的截断值为11.37,ROC曲线下面积为8.821,灵敏度为80.65%,特异度为80.00%。所有患者均已随访到生命终点,EMP1高表达组患者总生存时间(OS)的中位数为14.0个月,而低表达组为23.0个月。Cox回归分析显示,EMP1表达水平与OS显著相关(HR=5.936,P<0.001)。结论EMP1可作为顺铂耐药的标志物,是EOC不良预后的独立危险因素。

鼻咽癌细胞系 SUNE 中 EBV-LMP1 基因对上皮细胞增殖的影响

目的研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ┐ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响，探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞，检测ＬＭＰ１的表达，观察细胞在软琼脂中的集落形成能力，ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛，能在软琼脂中形成多个集落，ＭＴＴ吸收能力增强，ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，促进细胞的生长、增殖和转化，使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。

EMP-1基因在喉癌中的表达差异分析

目的分析上皮膜蛋白-1(epithelialmembraneprotein-1,EMP-1)基因在喉癌中的表达差异,以进一步探讨喉癌的发病机制。方法用微阵列分析技术分析喉癌基因的差异表达情况,选取其中之一的EMP-1基因,用半定量逆转录酶-聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction,RT-PCR)技术分析EMP-1基因在不同类型喉癌中的表达情况,数据分析采用SPSS软件。结果EMP-1基因在不同类型配对喉癌中皆呈低表达,明显低于相应的正常喉粘膜组织(P<0.05),EMP-1基因表达量与喉癌的分化类型、分期无明显关系(P>0.05)。结论EMP-1基因与喉癌的发病明显相关,揭示这种关系将有助于探讨喉癌的发病机制。

SNAT1和EMP1在胃癌组织和细胞株中的表达及临床意义

目的探讨人钠耦合中性氨基酸转运蛋白1(SNAT1)和上皮膜蛋白1(EMP1)在胃癌组织及胃癌细胞株中的表达水平,分析两者在胃癌组织中表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测82例胃癌组织和67例对应癌旁组织样本中SNAT1和EMP1的蛋白表达情况,根据二级计分法分为低表达(<5分)和高表达(≥5分),分析两者不同表达水平与胃癌临床病理特征的关系。同时采用Western blotting检测20例胃癌组织及其癌旁组织、正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃癌不同分化细胞株(未分化BGC823、低分化AGS、中分化SGC7901和高分化MKN28)中SNAT1和EMP1的蛋白水平。结果胃癌组织的SNAT1高表达率高于癌旁组织(67.1%vs.34.3%,P<0.05),而EMP1高表达率则低于癌旁组织(40.2%vs.62.7%,P<0.05)。胃癌组织中SNAT1与EMP1表达呈负相关(r=-0.272,P=0.014),且两者表达与临床分期和分化程度均有关;另外,SNAT1与年龄、淋巴结转移有关,EMP1与浸润深度有关。胃癌细胞株中的SNAT1蛋白水平均高于癌旁组织和CES-1细胞,而EMP1蛋白水平则相反,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SNAT1表达在胃癌组织及细胞株中分别较癌旁组织和正常胃黏膜细胞株高,EMP1则相反,胃癌组织中两种蛋白均与临床分期和分化程度有关,提示两者可能在胃癌的发生发展中起重要作用,可用于辅助胃癌的诊断和病情评估。

EB病毒及其癌基因LMP1对上皮细胞的转化作用

EB病毒 (EBV)是一种人群感染率较高的致癌性疱疹病毒 ,与伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌的关系最为明确。近年来EBV在上皮源性肿瘤发生、发展中的作用受到众多学者的关注 ,而其癌基因LMP1在上皮源性肿瘤发病的病因学方面的作用更成为研究的热点。本综述就EBV进入上皮细胞、永生化上皮细胞的机制。