没食子水提取物对人牙龈上皮角质形成细胞的体外影响

目的探讨没食子水提取物对脂多糖诱导的人牙龈上皮角质形成细胞(HGEK)的抗炎作用,以及对细胞组织伤口愈合作用的影响。方法选取中国人民解放军空军军医大学第九八六医院口腔科2020年6月至12月收治的10例牙冠延长术患者的健康牙龈,体外培养HGEK细胞,使用第3~5代细胞。分为阴性对照组(A组,PBS),脂多糖组(B组,质量浓度为1μg/mL),低、中、高没食子水提取物组(分别为C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组,没食子酸质量浓度分别为1,5,10 mg/mL),氯己定组(D组,蒸馏水调整20%葡萄糖酸氯己定质量分数至0.2%)。采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞活力;采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因和蛋白表达的水平;采用划痕愈合实验观察没食子水提取物对细胞迁移的影响;采用蛋白免疫印迹法测定核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)基因和蛋白表达水平。两组间定量资料采用Bonferroni检验,多组间定量资料比较采用方差分析(ANOVA)。结果与A组比较,C_(2)组、C_(3)组细胞活力显著增强(P<0.05)。与B组比较,C_(2)组、C_(3)组IL-1β,IL-6,TNF-α基因和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),C_(3)组细胞迁移率显著增加(P<0.05);与A组比较,C_(3)组Nrf2和HO-1基因和蛋白的表达水平显著增强(P<0.05)。结论没食子水提取物可下调炎性细胞因子水平,减轻脂多糖诱导的HGEK的炎性反应,具有作为口服口腔抗炎药的可能性。

人的原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力的比较

目的:筛选适合充当组织工程皮肤的种子细胞,比较原代培养的人原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增值能力。方法:将两种细胞(小儿包皮环切术后的组织培养表皮角质形成细胞,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT),分别接种于96孔板,通过MTT检测细胞1,3,5,7,9,11天的生长情况;当两种细胞融合至60%时分别取1×106个细胞,通过流式细胞检测细胞的周期。结果:永生化的上皮角质形成细胞HaCaT每隔一天即可传代一次,原代上皮角质形成细胞每3天传代一次;细胞周期:永生化上皮角质形成细胞HaCaT的G1期和S期的比例高于原代上皮角质形成细胞。生长曲线:MTT检测两种细胞1,3,5,7,9,11的生长情况,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的生长速度明显高于原代上皮角质形成细胞。结论:永生化上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力要高于原代培养的上皮角质形成细胞。

迟钝爱德华氏菌黏附及侵袭特性的研究

将引发养殖大菱鲆Scophthalmus maximus出血性败血症的病原菌迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda(L-49231)接种于体外培养细胞——人上皮角质层形成细胞(HaCaT-cell),观察其对细胞的黏附性和侵袭性,研究了不同作用时间下以及用不同因素处理菌体后,细菌对HaCaT细胞黏附性及侵袭性的影响。结果表明:L-49231菌株能黏附HaCaT细胞,2 h后即可侵入细胞;随着作用时间的延长,细菌黏附细胞与侵入细胞的数量增加。分别用甲醛、戊二醛、盐酸、胰蛋白酶处理L-49231菌体,细菌的黏附力及侵袭力均有所下降;用蔗糖、甘露糖处理L-49231菌体时,细菌的黏附力变化不大;用葡萄糖处理时,能够促进细菌对细胞的黏附作用。用甘露糖和葡萄糖处理菌体时,能促进细菌对细胞的侵袭;用蔗糖处理菌体时,能部分抑制细菌对细胞的侵袭作用。用抗体处理L-49231菌体后,细菌的黏附力及侵袭力均明显下降。说明L-49231菌株对HaCaT细胞具明显的侵袭性,其主要黏附因子为胞外蛋白质成分,无确切的糖受体。