肿瘤内皮细胞通过上皮调节蛋白在食管癌中的迁移和癌症干细胞样表型研究

目的 探讨肿瘤内皮细胞(HENECs)通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型研究。方法 从2018年1月至2020年12月临床随访的食管癌患者中随机获得98个石蜡包埋的食管癌组织和成对的相邻正常食管癌组织,同时收集同时段50例石蜡包埋的食管癌和成对的淋巴结转移样本。肿瘤循环内皮细胞(HECECs)和HENECs分别从食管癌和相邻的正常组织中分离得到,经过细胞培养、体外血管生成试验、入侵检测、免疫组织化学、Western blot实验、免疫荧光染色,研究肿瘤内皮细胞通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型。结果 HECECs的增殖速度比HENECs快;与HENECs相比,HECECs可以连续传代至少25次,这些差异表达基因与细胞外基质因子高度相关;HECECs显著加速了EC9706和Kyse30细胞的侵袭和迁移;EREG过表达可使EC9706细胞侵袭率显著增加3.9倍;EC9706-EREG细胞和Kyse30-EREG细胞中球形数量分别比载体细胞和亲代癌细胞增加;正常组织中未见EREG免疫阳性,但98个原发病灶中有69个呈阳性染色,EREG高水平与浸润深度、淋巴结转移相关,差异有显著性意义(P<0.05)。结论 HECEC在增强入侵性方面发挥着关键作用,上皮调节蛋白对食管癌细胞的迁移、癌症干细胞表型和转移有潜在的影响。

乳腺浸润性导管癌中上皮剪接调节蛋白与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A表达的临床意义

目的探究乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中上皮剪接调节蛋白(ESRP1)与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)的表达及临床意义。方法选取2018年4月至2021年4月于包头市肿瘤医院经手术治疗及病理学检查确诊为乳腺浸润性导管癌患者的组织标本(n=162)及癌旁组织标本(n=38)。采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5AmRNA的表达水平,采用免疫组化(IHC)法检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5A蛋白的表达水平。比较乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1、KDM5AmRNA相对表达量及ESRP1、KDM5A蛋白阳性表达率,分析ESRP1与KDM5A蛋白表达的相关性及乳腺浸润性导管癌患者ESRP1、KDM5A蛋白表达与临床病理特征的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1mRNA相对表达量高于癌旁组织,KDM5AmRNA相对表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1蛋白阳性表达率均高于癌旁组织,KDM5A蛋白阳性表达率均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌中ESRP1蛋白表达与KDM5A蛋白表达呈负相关(r=-0.34,P<0.05)。ESRP1、KDM5A蛋白表达与淋巴结转移情况、分子亚型、临床分期、组织学分级有关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径、脉管侵犯、神经侵犯无关。结论ESRP1在乳腺浸润性导管癌中呈高表达,KDM5A呈低表达,二者与乳腺浸润性导管癌的关系密切,可参与乳腺癌的发生发展,联合检测有利于及早诊疗乳腺浸润性导管癌,为个体化治疗提供新思路,有望成为乳腺浸润性导管癌分子治疗的新靶点。

上皮剪接调节蛋白与肿瘤细胞上皮-间质转化

上皮-间质转化(EMT)是具有极性的上皮细胞向间质细胞转化的过程,在机体正常发育和肿瘤细胞的侵袭及转移过程中具有重要作用。近年来,大量的实验数据表明上皮剪接调节蛋白(epithelial splicing regulatory proteins,ESRPs)具有抑制肿瘤EMT的作用,是肿瘤恶性转化的一种负向调控因子,受TGF-β-Smad信号通路的调节。ESRPs通过选择性剪接作用在转录后水平直接或者间接地调控FGFR2、Rac1b、E-钙黏蛋白及ZEBs等EMT相关因子的表达,抑制上皮细胞向间质细胞转换。本文综述了ESRPs的分子结构特征及其抑制肿瘤细胞EMT机制的研究进展,并对其在临床上作为恶性肿瘤诊断标志物的可能性进行了讨论。

ESRP1在直肠癌细胞上皮间质转化中的作用

目的分析上皮剪接调节蛋白1(ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及ESRP1对直肠癌细胞上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制。方法采用Western blot检测ESRP1在42例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用Western blot检测ESRP1在直肠癌细胞及人正常结肠上皮细胞中的表达;将ESRP1mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、E-cadherin、N-cadherin、Snail和Twist蛋白表达的影响。结果与癌旁正常组织相比,ESRP1在直肠癌组织中的相对表达水平明显下调(P<0.01),ESRP1的表达与直肠癌的淋巴结转移相关;与NCM460细胞相比较,ESRP1在直肠癌细胞株中的表达量均显著下调(P<0.01);ESRP1mimic转染SW480细胞后可抑制SW480细胞侵袭,同时上调E-cadherin的表达,并下调N-cadherin、Snail和Twist蛋白在SW480细胞内的表达。结论 ESRP1在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著下调,ESRP1与直肠癌细胞EMT明显相关。

来氟米特通过调节ESRP1的水平促进肺组织纤维化的机制研究

目的探究来氟米特(LEF)通过调节上皮细胞剪接调节蛋白(ESRP1)的水平促进肺组织纤维化的机制。方法将人肺上皮细胞BEAS-2B随机分为对照组、LEF组、ESRP1+LEF组和ESRP1组。使用细胞转染技术上调ESRP1的水平,在5 mg/L的LEF条件下培养48 h。使用免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。分别使用Western blot和RT-qPCR检测蛋白和mRNA的水平。结果 LEF组ESRP1的mRNA和蛋白的水平显著低于对照组,且ESRP1+LEF组的ESRP1的表达水平显著低于LEF组(P<0.05)。各组细胞的活力比较差异物统计学意义(P>0.05)。对照组α-SMA表达水平很低,并且可看出细胞轮廓为椭圆形。LEF组的α-SMA的荧光强度高于对照组,ESRP1组的α-SMA的荧光强度低于对照组,ESRP1+LEF组的α-SMA相对荧光强度高于ESRP1组(P<0.05)。与对照组比较,LEF组α-SMA水平升高,E-cadherin水平降低(P<0.05)。ESRP1组的α-SMA低于对照组,E-cadherin高于对照组(P<0.05)。与ESRP1组比较,ESRP1+LEF组α-SMA水平升高,E-cadherin水平降低(P<0.05)。结论 LEF可能通过抑制ESRP1的水平,促进α-SMA的表达而抑制E-cadherin的水平,促进肺上皮细胞向间质细胞转化,引起肺纤维化。

ESRPs在上皮间质转化中的作用及其调控机制研究进展

上皮-间质转化(EMT)是将极化上皮细胞转化为具有间充质细胞的过程,它由EMT相关转录因子调节,同时还在转录后水平受可变剪接调控。本文对上皮剪接调节蛋白(ESRPs)在EMT进程中的作用及其调控机制研究进行综述。

上皮剪接调节蛋白1的研究进展

上皮剪接调节蛋白1(Epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)是近年来发现的一种上皮细胞特异性剪接因子,主要通过选择性剪接在转录后水平调节基因的表达,继而影响细胞的功能。研究表明,ESRP1通过调控上皮间质转化、细胞周期进展、氧化还原反应以及脂肪酸代谢等过程,多方面参与肿瘤的发生、发展和对治疗药物的反应。小鼠实验研究表明,ESRP1基因敲除可以导致多种器官发育异常,包括颅面部畸形、皮肤屏障功能受损、肾脏以及耳蜗发育不良等。此外,ESRP1还可以通过调控转录因子的活性以及非编码RNA的生成,提高小鼠成纤维细胞重编程为多能干细胞的效率并维持人胚胎干细胞的多能性。鉴于ESRP1在多个研究领域的重要性,本文对ESRP1常见的下游靶分子、信号通路、以及在生理病理环境下所发挥的功能进行阐述,以期进一步指导基础研究和临床应用。

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P<0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P<0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P<0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。

ESRP1联合多模态MRI对前列腺癌的诊断价值及ESRP1对病理发展的影响机制

目的探究上皮剪接调节蛋白1(ESRP1)联合多模态MRI对前列腺癌的诊断价值及ESRP1对病理发展的影响机制。方法通过多模态MRI对60例前列腺外周带病变患者(46例前列腺外周带慢性炎症患者,14例早期前列腺癌患者)的前列腺外周带病灶进行检查,通过RT-qPCR检测前列腺外周带病变组织ESRP1的mRNA水平。将PC-3细胞分为对照组、shRNA-NC组、shRNA-ESRP1组、LV-NC组和LV-ESRP1组。使用Lipofectamine 2000对细胞转染shRNA-NC、shRNAESRP1、LV-NC和LV-ESRP1。通过MTT法检测细胞增殖;通过流式细胞术检测细胞凋亡;通过Transwell检测细胞迁移和侵袭;通过RT-qPCR检测细胞中ESRP1、Bax、Bcl-2、MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的mRNA表达水平;通过Western blot检测细胞中ESRP1、p-PI3K、p-AKT和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与前列腺外周带慢性炎症患者相比,早期前列腺癌患者外周带病变组织中ESRP1的mRNA水平升高(t=6.372,P<0.001)。多模态MRI联合ESRP1 mRNA诊断早期前列腺癌的曲线下面积和敏感性高于多模态MRI或ESRP1 mRNA的单独诊断。与对照组和shRNA-NC组比较,shRNA-ESRP1组ESRP1的mRNA和蛋白表达水平均降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax的mRNA表达水平升高,Bcl-2的mRNA表达水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2和MMP9的mRNA表达水平均降低,E-cadherin的mRNA表达水平升高,N-cadherin和Vimentin的mRNA表达水平降低,p-PI3K、p-AKT和p-NF-κB p65表达水平降低(P<0.05)。与对照组和LV-NC组比较,LVESRP1组ESRP1的mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量、Bcl-2、MMP2、MMP9、N-cadherin和Vimentin的mRNA水平、p-PI3K、p-AKT和p-NF-κB p65表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和E-cadherin的mRNA水平均升高(P<0.05)。与对照组和LV-NC组比较,LV-ESRP1组ESRP1的mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量、Bcl-2、MMP2、MMP9、N-cadherin和Vimentin的mRNA水平、p-PI3K、p-AKT和p-NF-κB p65表达水平均升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和E-cadherin的mRNA水平均降低(P<0.05)。结论多模态MRI联合ESRP1诊断早期前列腺癌具有较高价值,ESRP1可能通过PI3K/AKT/NF-κB通路调节前列腺癌细胞的恶性行为。

表皮生长因子样因子在LH峰效应中的作用及临床研究进展

表皮生长因子样因子(epidermal growth factor-like factor)——双调蛋白(amphiregulin,Areg)、上皮调节蛋白(epiregulin,Ereg)和细胞调节素(betacellulin,BTC)通过旁分泌和自分泌方式介导黄体生成素(luteinizing hormone,LH)峰效应,从而诱导卵母细胞减数分裂恢复、卵丘扩展以及排卵。

沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响

目的 :研究沉默上皮剪接调节蛋白(1epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亚型转换的影响。方法:构建靶向ESRP1基因的ESRP1-sh RNA慢病毒表达载体(p LVTHM/ESRP1-sh RNA1和p LVTHM/ESRP1-sh RNA2),同时设置阴性对照(negative control,NC)质粒(p LVTHM/NC-sh RNA);将3种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染卵巢癌OVCAR5细胞后,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ESRP1 m RNA及蛋白的表达水平;采用限制性内切酶AvaⅠ和Hin CⅡ检测沉默ESRP1基因后对FGFR2亚型转换的影响;MTT法检测沉默ESRP1基因后对OVCAR5细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)及β-链蛋白(β-catenin)表达的变化。结果:成功构建靶向ESRP1基因的sh RNA慢病毒表达载体并包装获得慢病毒;与阴性对照组比较,靶向ESRP1基因的sh RNA能明显抑制OVCAR5细胞中ESRP1 m RNA及蛋白的表达(P值均<0.05);沉默ESRP1基因的表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2由上皮亚型(FGFR2b)向间质亚型(FGFR2c)的转换,并促进OVCAR5细胞的增殖(P<0.05);同时,下调E-cadherin的表达水平而上调N-cadherin的表达水平,并激活β-catenin(P值均<0.05)。结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路。