血浆D-二聚体、血栓调节蛋白与上皮性卵巢癌肿瘤细胞减灭术后铂类药物化疗敏感性的关系

目的分析血浆D-二聚体(D-D)、血栓调节蛋白(TM)与上皮性卵巢癌肿瘤细胞减灭术后铂类药物化疗敏感性的关系。方法选取2019年6月至2022年5月唐山市妇幼保健院收治的137例行铂类药物化疗的上皮性卵巢癌患者作为研究对象,均完成肿瘤减灭术,在化疗前进行血液检查,检查项目包括肿瘤标志物、血浆D-D、TM及相关指标。根据化疗结束后复发时间定义复发类型,复发时间<6个月定义为铂耐药复发,反之定义为铂敏感复发,采用Cox回归分析血浆D-D、TM对上皮性卵巢癌肿瘤细胞减灭术后铂耐药复发的影响。结果137例患者成功随访6个月,其中25例在随访6个月内肿瘤复发,铂耐药复发率为18.25%。铂耐药患者国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅳ期、分化程度G_(3)级、手术满意度R1比例高于铂敏感患者,血清糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、血浆D-D、TM表达高于铂敏感患者(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,G_(3)级分化程度、手术满意度R1、血清CA125、HE4及血浆D-D、TM表达上调是上皮性卵巢癌铂耐药复发的影响因素(P<0.05)。结论血浆D-D、TM表达上调与上皮性卵巢癌铂耐药复发风险增加有关,铂类药物化疗前的血浆D-D、TM表达对于评估铂耐药复发风险具有一定意义。

过氧化物酶体膜蛋白4通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路促进肝细胞癌细胞的上皮间质转化

目的:探讨过氧化物酶体膜蛋白4(PXMP4)对肝细胞癌(HCC)细胞迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:采用生物信息学和免疫组织化学方法分析HCC组织中PXMP4的表达,分析其与患者临床病理特征的相关性。在HCCLM3和MHCC97H细胞中干扰PXMP4,在Huh7和MHCC97L细胞中过表达PXMP4,利用WB和qPCR法验证干扰/过表达效率。利用CCK-8、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测干扰/过表达PXMP4对HCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,采用WB法检测干扰/过表达PXMP4或0、5、10和20μmol/L U0126处理对HCC细胞中N-cadherin、E-cadherin、vimentin、细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK表达的影响。结果:生物信息学和免疫组织化学分析显示,HCC组织中PXMP4呈高表达(P<0.05)。临床病理分析发现,PXMP4的表达与肿瘤分化程度有关联(P<0.05)。在HCC细胞中,干扰PXMP4后抑制细胞增殖、侵袭和EMT进程(P<0.05);反之,过表达PXMP4后促进HCC细胞增殖、侵袭及EMT进程(P<0.05)。此外,PXMP4通过激活ERK1/2信号通路促进HCC细胞EMT进程,U0126处理同样能够抑制HCC细胞EMT进程。结论:PXMP4在HCC组织中呈高表达且与HCC细胞分化有关联,PXMP4通过激活ERK1/2信号通路促进HCC细胞EMT进程。

乳腺浸润性导管癌中上皮剪接调节蛋白与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A表达的临床意义

目的探究乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中上皮剪接调节蛋白(ESRP1)与组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)的表达及临床意义。方法选取2018年4月至2021年4月于包头市肿瘤医院经手术治疗及病理学检查确诊为乳腺浸润性导管癌患者的组织标本(n=162)及癌旁组织标本(n=38)。采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5AmRNA的表达水平,采用免疫组化(IHC)法检测乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1与KDM5A蛋白的表达水平。比较乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中ESRP1、KDM5AmRNA相对表达量及ESRP1、KDM5A蛋白阳性表达率,分析ESRP1与KDM5A蛋白表达的相关性及乳腺浸润性导管癌患者ESRP1、KDM5A蛋白表达与临床病理特征的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1mRNA相对表达量高于癌旁组织,KDM5AmRNA相对表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中ESRP1蛋白阳性表达率均高于癌旁组织,KDM5A蛋白阳性表达率均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌中ESRP1蛋白表达与KDM5A蛋白表达呈负相关(r=-0.34,P<0.05)。ESRP1、KDM5A蛋白表达与淋巴结转移情况、分子亚型、临床分期、组织学分级有关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径、脉管侵犯、神经侵犯无关。结论ESRP1在乳腺浸润性导管癌中呈高表达,KDM5A呈低表达,二者与乳腺浸润性导管癌的关系密切,可参与乳腺癌的发生发展,联合检测有利于及早诊疗乳腺浸润性导管癌,为个体化治疗提供新思路,有望成为乳腺浸润性导管癌分子治疗的新靶点。

沉默调节蛋白1对脂多糖诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的 探讨沉默调节蛋白1(SIRT1)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的作用及机制。方法 分离大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,并分为对照组、模型组和实验组。模型组和实验组分别用空白和SIRT1 shRNA慢病毒感染后,再加入LPS诱导细胞损伤。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Western blot检测SIRT1的表达;采用CCK-8实验检测细胞活力;采用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达;采用JC-1染色法检测线粒体膜电位;采用化学显色法检测细胞丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组相比,模型组Ⅱ型肺泡上皮细胞SIRT1 mRNA和蛋白表达水平升高,细胞活力下降,促炎因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平和分泌水平升高,线粒体膜电位下降,MDA水平升高,SOD活性下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,实验组Ⅱ型肺泡上皮细胞SIRT1 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞活力升高,促炎因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平和分泌水平下降,线粒体膜电位升高,MDA水平下降,SOD活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SIRT1通过影响线粒体活性和细胞氧化还原稳态促进LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤。

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的:观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用;研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cy-clin E、CDK_2和p27^(Kipl)蛋白表达的改变,并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法:0.2～3.2 mg/ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96 h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96 h时细胞内cyclin E、CDK_2和p27^(Kipl)的蛋白表达。结果:庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用,庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性;庆大霉素致细胞周期停滞于G_1期。随着庆大霉素浓度的增加,细胞内cy-clin E和 CDK_2蛋白表达逐渐下调,而p27^(Kipl)蛋白表达则逐渐上调。结论:庆大霉素诱导的LLC-PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclin E和 CDK_2表达下调以及p27^(Kipl)表达上调有关。

沉默葡萄糖调节蛋白78基因增强高氧诱导的肺泡上皮细胞凋亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达对高氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法培养人肺腺癌A549细胞,用构建的siRNA片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染A549细胞,将细胞分为高氧空白组、阴性对照(阴性siRNA)组和实验(GRP78-siRNA)组3组,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型。48 h后通过实时定量PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA的表达,Western blot技术检测CHOP蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果应用siRNA抑制GRP78表达后,GRP78 mRNA和蛋白表达下调、CHOP mRNA和蛋白表达上调、A549细胞凋亡增加。结论下调GRP78基因可增强高氧活化的CHOP凋亡途径,诱导肺泡上皮细胞凋亡。

葡萄糖调节蛋白78真核表达载体及稳定转染人视网膜色素上皮细胞株的构建

背景:葡萄糖调节蛋白78是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用。目的:构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系。方法:扩增人葡萄糖调节蛋白78全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78。通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达细胞系。结果与结论:体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR方法检测,G418筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78mRNA的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78。

缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响及GRP78表达的变化。方法体外培养人RPE细胞,采用CoCl2诱发细胞缺氧模型、H2O2诱发氧化应激模型。实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为100μmol·L-1、200μmol·L-1、400μmol·L-1、800μmol·L-1的CoCl2、H2O2作用12h,用MTT法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在CoCl2浓度为200μmol·L-1、H2O2浓度为400μmol·L-1的基础上,分别选取药物作用8h、12h、16h3个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测GRP78蛋白的表达情况。结果量-效关系组:不同浓度CoCl2组RPE细胞活性与空白对照组相比均明显下降(均为P<0.05);400μmol·L-1及800μmol·L-1 H2O2组细胞存活率较空白对照组均明显下降(均为P<0.05)。时-效关系组:空白对照组GRP78表达阳性细胞率为(5.4±3.0)%;CoCl2作用8h、12h、16h GRP78阳性细胞率分别为(34.2±7.1)%、(54.4±9.1)%、(34.7±6.8)%;H2O2作用8h、12h、16hGRP78阳性细胞率分别为(37.8±7.1)%、(57.4±5.1)%、(42.5±3.9)%。经统计学分析,CoCl2、H2O2处理8h后,RPE细胞中GRP78表达均较空白对照组明显升高(均为P<0.01),作用12h时GRP78的表达量最高,作用16h时GRP78的表达量又有下降。结论 GRP78可以作为RPE细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,GRP78的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系。

细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK激酶的活性。结果A549细胞施加14%牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P<0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断。结论机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。

上皮剪接调节蛋白与肿瘤细胞上皮-间质转化

上皮-间质转化(EMT)是具有极性的上皮细胞向间质细胞转化的过程,在机体正常发育和肿瘤细胞的侵袭及转移过程中具有重要作用。近年来,大量的实验数据表明上皮剪接调节蛋白(epithelial splicing regulatory proteins,ESRPs)具有抑制肿瘤EMT的作用,是肿瘤恶性转化的一种负向调控因子,受TGF-β-Smad信号通路的调节。ESRPs通过选择性剪接作用在转录后水平直接或者间接地调控FGFR2、Rac1b、E-钙黏蛋白及ZEBs等EMT相关因子的表达,抑制上皮细胞向间质细胞转换。本文综述了ESRPs的分子结构特征及其抑制肿瘤细胞EMT机制的研究进展,并对其在临床上作为恶性肿瘤诊断标志物的可能性进行了讨论。

上皮剪接调节蛋白1(ESRP1)在人卵巢癌组织及细胞系的表达

卵巢癌是危害广大妇女健康最常见的恶性肿瘤之一。人上皮剪接调节蛋白1（epithelial splicing regulatory prolein1，ESRP1）通过与富含UGG的序列结合，可促进上皮基因亚型的选择性剪接，如成纤维细胞生长因子受体2（fibroblast gowth factor rereptor2，FGFR2）。

调节性T细胞促进放射性肺损伤大鼠体内β-连环蛋白介导的上皮细胞向间质转化和肺纤维化发展的机制

目的 研究调节性T细胞(Treg)促进放射性肺损伤大鼠体内β-连环蛋白介导的上皮细胞向间质转化和肺纤维化发展的机制。方法 将54只6~8周龄的雌性F344/N大鼠根据实验目的分为3组:对照组(正常大鼠,等剂量0.9%氯化钠溶液腹膜内注射),放射诱导组(肺损伤模型大鼠,等剂量0.9%氯化钠溶液腹膜内注射)和CD25抗体+放射诱导组(肺损伤模型大鼠,单克隆抗CD25抗体腹膜内注射,共注射4次),每组各18只。通过蛋白质印迹分析检测实验大鼠肺组织中β-连环蛋白的表达情况;流式细胞术检测调节性T细胞含量;苏木精-伊红染色对大鼠肺组织进行组织学检查,根据Szapiel评分对各组大鼠的肺泡炎和纤维化程度进行分析评分;酶联免疫吸附试验检测大鼠血液中羟脯氨酸和Ⅳ型胶原的含量。结果 处理后即刻至处理后2周,与对照组相比,放射诱导组大鼠的β-连环蛋白表达增加,而CD25抗体+放射诱导组较放射诱导组β-连环蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。处理后即刻至处理后2周,放射诱导组较对照组肺泡炎和肺组织纤维化评分高,损伤严重,CD25抗体+放射诱导组评分较放射诱导组减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。处理后即刻至处理后2周,与对照组相比,放射诱导组羟脯氨酸含量和Ⅳ型胶原含量增加,CD25抗体+放射诱导组羟脯氨酸含量和Ⅳ型胶原较放射诱导组含量下降,差异均有统计学意义(P <0.05)。处理后即刻至处理后2周,放射诱导组较对照组Tregs含量上升,而CD25抗体+放射诱导组Tregs含量较放射诱导组下降,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 调节性T细胞通过β-连环蛋白介导放射性肺损伤中EMT,促进肺部细胞纤维化和肺部胶原蛋白沉积,而通过阻断Treg可显著改善此现象。

肿瘤内皮细胞通过上皮调节蛋白在食管癌中的迁移和癌症干细胞样表型研究

目的 探讨肿瘤内皮细胞(HENECs)通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型研究。方法 从2018年1月至2020年12月临床随访的食管癌患者中随机获得98个石蜡包埋的食管癌组织和成对的相邻正常食管癌组织,同时收集同时段50例石蜡包埋的食管癌和成对的淋巴结转移样本。肿瘤循环内皮细胞(HECECs)和HENECs分别从食管癌和相邻的正常组织中分离得到,经过细胞培养、体外血管生成试验、入侵检测、免疫组织化学、Western blot实验、免疫荧光染色,研究肿瘤内皮细胞通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型。结果 HECECs的增殖速度比HENECs快;与HENECs相比,HECECs可以连续传代至少25次,这些差异表达基因与细胞外基质因子高度相关;HECECs显著加速了EC9706和Kyse30细胞的侵袭和迁移;EREG过表达可使EC9706细胞侵袭率显著增加3.9倍;EC9706-EREG细胞和Kyse30-EREG细胞中球形数量分别比载体细胞和亲代癌细胞增加;正常组织中未见EREG免疫阳性,但98个原发病灶中有69个呈阳性染色,EREG高水平与浸润深度、淋巴结转移相关,差异有显著性意义(P<0.05)。结论 HECEC在增强入侵性方面发挥着关键作用,上皮调节蛋白对食管癌细胞的迁移、癌症干细胞表型和转移有潜在的影响。

呼吸道合胞病毒持续感染导致人支气管上皮细胞囊性纤维化穿膜传导调节蛋白功能障碍

目的:呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)持续感染可能是导致气道慢性疾病的病理原因,然而,其作用机制尚不清楚。囊性纤维化穿膜传导调节蛋白(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是一种顶端膜氯离子(Cl-)通道,对上皮液体、Cl-和碳酸氢盐运输的调节至关重要。CFTR功能障碍将导致支气管分泌物改变和黏液清除受损,与气道炎症有关。我们前期在RSV感染的小鼠模型中观察到气道上皮细胞CFTR表达下调。本研究通过构建RSV持续感染的气道上皮细胞模型,进一步研究其对CFTR表达和功能的影响。方法:以病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.01的RSV感染16HBE14o-细胞后继续传代。以real-time RT-PCR、免疫荧光及蛋白质印迹法检测CFTR的表达,以新型氯离子荧光探针MQAE测量细胞内Cl-浓度和全细胞膜片钳记录Cl-电流。结果:16HBE14o-细胞感染RSV病毒后存活至第3代(G3)。CFTR的表达在RSV感染后从G1到G3逐渐降低,同时伴随着CFTR功能的降低。16HBE14o-细胞暴露于RSV可导致TGF-β1表达进行性升高及其下游信号分子Smad2磷酸化。用SB431542阻断TGF-β1信号通路可阻止Smad2磷酸化,增加CFTR的表达。结论:RSV感染可导致气道上皮细胞CFTR功能缺陷,其作用可能是通过激活TGF-β1信号通路介导的。

肠上皮细胞紧密连接蛋白的结构功能及其调节

肠上皮细胞紧密连接(TJ)蛋白在肠道黏膜屏障中起着重要作用,其受损会导致细胞间的通透性增加,肠腔内的细菌、毒素等物质可穿透肠黏膜而进入其他组织、器官或循环系统,发生细菌或毒素移位,导致疾病。目前,肠上皮细胞TJ蛋白的研究已经十分丰富,对于TJ蛋白的结构与功能及其调节机制的探讨也更加深入。本文主要阐述肠上皮细胞TJ蛋白的组成、功能、信号调节及其影响因素。

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2 EMT的机制。方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2 EMT模型,Western blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号蛋白的影响。予不同剂量补肾化瘀泄浊方进行干预,Real-Time PCR检测EMT相关基因mRNA的表达,Western blot检测EMT相关蛋白、Smad2/3及ERK的表达;与ERK通路抑制剂PD98059作比较,观察补肾化瘀泄浊方通过ERK信号通路干预HK-2 EMT的作用。结果:与空白组比较,模型组HK-2细胞出现EMT特有的“纺锤形”结构,EMT标记α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),且磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化瘀泄浊方各剂量组HK-2细胞EMT样形态改善,α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平下降(P<0.05),且剂量越高作用越明显。与模型组比较,ERK通路抑制剂能显著下调α-SMA、Vimentin、磷酸化Smad2/3蛋白水平(P<0.05);补肾化瘀泄浊方高剂量具有与ERK通路抑制剂类似的作用。结论:TGF-β1可诱导HK-2 EMT,上调ERK及Smad2/3磷酸化水平,补肾化瘀泄浊方很可能通过抑制ERK通路活化,下调Smad2/3磷酸化水平,阻抑HK-2 EMT。

肾小管上皮细胞增生和肥大与细胞周期调节蛋白的关系

肾小管上皮细胞增生和肥大过程中细胞周期调节蛋白相应发生变化。本文综述细胞周期调节蛋白的分类、功能以及肾小管上皮细胞增生和肥大时细胞周期调节蛋白的改变。

二氢嘧啶酶样蛋白3在肿瘤中的表达

二氢嘧啶酶样蛋白3(dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3)又称塌陷反应调节蛋白4(collapse response mediator protein 4,CRMP4),是一种在神经系统中高表达的胞质磷蛋白。其不仅参与细胞伪足中肌动蛋白的组成,也用于组装细胞骨架,还与细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程有关,这些特性可能与肿瘤增殖与转移功能有关。近年来有研究表明,DPYSL3参与多种癌细胞的增殖与侵袭过程,例如前列腺癌、膀胱癌、胃癌与肝癌等。然而,DPYSL3在不同肿瘤中的表达与预后存在明显的异质性。因此,进行DPYSL3在肿瘤表达水平的研究有望成为在不同肿瘤恶性程度与诊断过程中的生物标志物,从而提高肿瘤诊断率与患者预后水平。本文对DPYSL3在不同肿瘤中的表达、生物学功能及其对肿瘤的诊断、治疗及预后价值进行总结与探索,为肿瘤研究提供新思路。

miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化的作用

目的探究miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1(SP-1)调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化(EMT)的作用机制。方法体外培养人晶状体上皮细胞(HLE-B3),分为正常组、高糖组、阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组。除正常组细胞外,其余各组细胞于35.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖环境中培养。阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组分别共转染miRNA模拟物scramble和阴性siRNA序列、转染miR-29b模拟物、共转染miR-29b模拟物和SP-1基因序列。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-29b和SP-1 mRNA表达,采用Transwell法和细胞划痕实验检测各组细胞迁移活性。采用免疫荧光染色和Western blot检测和各组细胞钙黏蛋白(E-Cadherin、N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、SP-1蛋白表达情况。根据生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因验证miR-29b和SP-1基因的靶向关系。结果35.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖组处理HLE-B324 h,细胞中miR-29b mRNA相对表达量较正常组降低,SP-1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(均为P<0.05)。与正常组相比,高糖组细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加,E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达升高(均为P<0.05)。而与高糖组和阴性组相比,miR-29b mimics组细胞miR-29b mRNA相对表达量和E-Cadherin蛋白表达增加,SP-1、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达降低,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率均减少(均为P<0.05)。miR-29b mimics+SP-1组较miR-29b mimics组细胞中E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达增加,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加(均为P<0.05)。经双荧光素酶报告基因验证,转染miR-29b mimics质粒可降低SP1-3’UTR-WT荧光素酶活性(P<0.05),但不降低SP1-3’UTR-MUT荧光素酶活性(P>0.05)。结论miR-29b在糖尿病性白内障体外细胞模型中表达下调。上调miR-29b表达可通过靶向SP-1基因参与抑制高糖诱导晶状体上皮细胞EMT的进程。

高糖对人晶状体上皮细胞沉默信号调节蛋白6(SIRT6)表达的影响

目的观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞(SRA01/04)活性及沉默信号调节蛋白6(SIRT6)表达的影响。方法将SRA01/04细胞在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol·L^-1、15.5 mmol·L^-1、25.5 mmol·L^-1、35.5 mmol·L^-1、45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1)培养基中培养48 h后,用光镜观察SRA01/04细胞形态;CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性;Western blot检测各组细胞SIRT6蛋白的表达水平。然后将SRA01/04细胞用55.5 mmol·L^-1葡萄糖干预,培养不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h)后,Western blot检测不同时间SRA01/04细胞SIRT6蛋白表达水平。免疫荧光技术检测对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)和高糖组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖)细胞的SIRT6蛋白表达情况。结果随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的数量逐渐降低。CCK-8检测结果显示,与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组相比,随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的活性逐渐降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,SRA01/04细胞的SIRT6蛋白表达与葡萄糖呈浓度和时间依赖性,45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1葡萄糖组与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组比较,以及24 h组、48 h组和72 h组与0 h组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,SRA01/04细胞中的SIRT6蛋白主要在细胞核表达,高糖组SRA01/04细胞中SIRT6蛋白表达较对照组显著降低(P<0.05),且高糖组细胞核出现明显的核固缩和核碎裂现象。结论高浓度葡萄糖可以降低SRA01/04细胞的增殖活性,降低SIRT6蛋白的表达水平。