上皮型钙黏素基因启动子甲基化与胃肠腺癌的关系及意义

目的探讨上皮型钙黏素(E-cad)基因启动子CpG岛甲基化与胃腺癌(GAC)和大肠腺癌(CRAC)的关系及意义。方法用甲基化特异性PCR技术检测82例GAC组织(GAC组)、30例十二指肠球部溃疡胃窦黏膜组织(对照组)、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生胃黏膜组织(胃炎组)、94例CRAC组织(CARC组)及其癌旁非肿瘤组织中的E-cad基因启动子CpG岛甲基化状况。结果GAC组E-cad甲基化率显著高于对照组和胃炎组(P<0.01,<0.05),低分化者显著高于高、中分化者(P<0.05),～期肿瘤显著高于～期(P<0.05);CRAC组显著高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01)。结论E-cad基因启动子CpG岛甲基化可能参与胃肠腺癌发生。

肝细胞癌上皮型钙粘素基因甲基化及其临床特征分析

目的:探讨上皮型钙粘素基因启动子CpG岛甲基化与肝细胞癌(HCC)及其临床病理特征的关系。方法:用甲基化特异性PCR技术检测53例HCC肿瘤组织及其癌旁非肿瘤组织和15例肝海绵状血管瘤周围正常肝组织中,上皮型钙粘素基因启动子CpG岛甲基化状况。结果:上皮型钙粘素基因在HCC肿瘤组织中的甲基化率显著高于癌旁非肿瘤组织(P=0.007,P<0.01),显著高于正常肝组织(P=0.006,P<0.01),在Ⅲ～Ⅳ期肿瘤中的甲基化率显著高于Ⅰ～Ⅱ期肿瘤(P=0.037,P<0.05),在包膜完整的肿瘤中甲基化率显著高于包膜不完整的肿瘤(P=0.043,P<0.05),在HBV阳性的肿瘤组织中甲基化率显著高于HBV阴性的肿瘤组织(P=0.024,P<0.05),在不同大小的肿瘤之间、单个结节与多个结节的肿瘤之间甲基化率的差异均无显著性。结论:上皮型钙粘素基因启动子CpG岛甲基化可能参与肝细胞的癌性转变。

肝内胆管癌中上皮-钙黏附素基因CDH1的甲基化研究

目的:探讨肝内胆管癌组织中上皮-钙黏附素(epithelial-cadherin,E-cadherin基因CDH1的甲基化状况。方法:42例肝内胆管癌标本系东方肝胆外科医院术后肿瘤组织和癌旁组织的石蜡包埋及新鲜冰冻标本。男性32例,女性10例。分别采用MSP、RT-PCR以及EnVision方法检测42例肝内胆管癌患者术后标本中CDH1基因甲基化以及E-cadherin的mRNA及蛋白表达变化。结果:肝内胆管癌中CDH1甲基化发生率为28.6%。E-cadherin的mRNA及蛋白表达减低率分别为64.3%和69.1%。CDH1基因甲基化与E-cadherin蛋白表达、mRNA表达以及胆管癌肝内转移之间存在显著相关(分别P=0.008,P=0.031和P=0.020)。CDH1甲基化与生存预后之间无相关性,E-cadherin表达异常与患者不良生存则显著相关(P=0.002)。结论:肝内胆管癌中常发生CDH1高甲基化及E-cadherin表达异常,表明CDH1甲基化及E-cadherin的表达异常与肝内胆管癌的发生发展密切相关。

上皮钙粘附素启动区域甲基化与胃癌的相关性

目的 :研究胃癌组织中上皮钙粘附素启动子区域甲基化与胃癌组织学特征和侵袭的关系。方法 :用甲基化特异的聚合酶链反应 ( MSP)及酶切法检测 4 9例胃癌组织中钙粘附素启动区域甲基化状态并予以测序。结果 :低分化腺癌 ( Borrm an ～ 级 )甲基化发生率为 73 .7%,远高于其它病理类型癌发生率 3 3 .3 %( P<0 .0 1) ,有淋巴结转移的甲基化率为 70 .4 %,高于无淋巴结转移的甲基化率者 2 2 .7%( P<0 .0 1)。结论 :钙粘附素启动区域甲基化与胃癌组织学特征及侵袭有相关性 ,可以作为预测胃癌侵袭与转移有价值的指标。

上皮性钙黏素及其基因启动子区甲基化与葡萄胎恶变关系

目的研究上皮性钙黏素(E-cadherin)及其基因启动子区CpG岛甲基化在葡萄胎恶变中的作用,探讨去甲基化制剂5′-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导绒癌细胞株中E-cadherin基因恢复表达的可能性。方法采用免疫组化SP法,检测10例正常早孕绒毛和37例葡萄胎组织中E-cadherin的表达。采用甲基化特异性PCR(MSP)检测正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎及绒癌细胞株JAR中E-cadherin基因CpG岛的甲基化状态,并用RT-PCR检测绒癌细胞株JAR经5-Aza-CdR处理后E-cadherin mRNA表达。结果正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎组织E-cadherin蛋白表达阳性率及甲基化率分别为100%、90.00%、41.18%和0、15.00%、41.18%,差异均有显著性(χ2=12.903、4.573,P<0.05)。E-cadherin蛋白表达在甲基化组低于非甲基化组(Ken-dall tau-b=0.769,P<0.05),且恶变葡萄胎组织中E-cadherin基因甲基化率与解剖学分期、预后评分有关(Kendalltau-b=-0.757、-0.663,P<0.05)。在JAR细胞株中E-cadherin基因启动子区呈甲基化状态,且其mRNA弱表达,经5-Aza-CdR处理后的JAR细胞株E-cadherin mRNA表达明显增强。结论 E-cadherin基因启动子区过度甲基化可能是E-cadherin失活的机制之一,与葡萄胎的恶性进展有关。5-Aza-CdR能逆转JAR细胞株中E-cadherin基因甲基化状态,从而恢复E-cadherin基因的转录活性。

上皮性卵巢癌中CDH1基因突变/甲基化对上皮型钙黏附素表达的影响

目的研究上皮性卵巢癌组织中CDH1基因突变和甲基化改变情况,分析对上皮型钙黏附素(E-cadherin)表达的影响。方法应用色谱分析-测序和甲基化特异的聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)的方法分析80例上皮性卵巢癌组织和38例正常卵巢组织的CDH1基因突变和启动子区甲基化情况。采用免疫组织化学方法检测上述标本中E-cadherin表达的情况,并分析CDH1基因突变和启动子区甲基化情况对E-cadherin蛋白表达的影响。结果80例卵巢癌组织中仅1例检测到外显子7错义突变;34例检出CDH1基因启动子区甲基化,有淋巴结转移组中甲基化频率明显高于无淋巴结转移组(74.3%vs17.8%,P<0.05);38例正常卵巢组织中未检测到CDH1突变和甲基化。卵巢癌组织中有CDH1基因启动子甲基化者E-cadherin表达明显低于无甲基化者(P<0.05)。结论CDH1基因突变在上皮性卵巢癌少见,CDH1基因启动子区甲基化可能是导致E-cadherin蛋白表达减低的主要原因。

人肺腺癌A549细胞株上皮钙黏素基因甲基化及尿多酸肽干预的研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对人肺腺癌A549细胞的作用,检测人肺腺癌A549细胞株抑癌基因上皮钙黏素(E-cadherin)甲基化状态及尿多酸肽对其干预的结果,寻找肺癌治疗的新靶点。方法检测不同浓度CDA-Ⅱ作用下,A549细胞的存活率(MTT法)及E-cadherin基因甲基化程度(甲基化特异PCR,MSP)。结果 CDA-Ⅱ抑制A549细胞生长;伴随CDA-Ⅱ剂量、作用时间增加,E-cadherin基因甲基化程度逐渐减弱(P<0.05)。结论 A549细胞存在部分甲基化,CDA-Ⅱ可使E-cadherin基因甲基化程度下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。

肝细胞癌上皮型钙粘素基因甲基化及其临床特征研究

目的探讨肝细胞癌上皮型钙粘素基因甲基化与肝细胞癌之间的关系。方法收集肝细胞癌患者53例,取手术切除肿瘤标本53分以及癌旁组织标本53份,并取30份正常人的肝组织标本作为对照,应用甲基化特异性PCR技术检测其肿瘤组织、癌旁非肿瘤组织或者正常组织中的上皮型钙粘素基因甲基化情况。结果肿瘤组织甲基化率的甲基化率为45.3%,显著高于癌旁组织的11.3%(P<0.05);正常肝组织的甲基化率为6.7%,与肿瘤组织甲基化率比较差异显著(P<0.05),而与癌旁组织比较无显著差异;肿瘤Ⅲ-Ⅳ期、肿瘤组织包膜不完整、HBV阳性均与甲基化密切相关(P<0.05)。结论上皮型钙粘素基因甲基化可能参与了肝细胞癌性转变过程。

前列腺癌中E-钙粘素、p16及雌激素受体基因甲基化的检测及其临床意义

目的:研究前列腺病变中E-钙粘素、p16和雌激素受体(ER)基因启动子CpG岛甲基化状况及其与临床资料的关系,探讨基因过甲基化在前列腺癌(PCa)发生发展中的作用及其临床意义。方法:收集石蜡包埋前列腺全切术标本:良性前列腺增生(BPH)13例,高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)10例,有随访记录的PCa 20例。采用甲基化特异性PCR(MSP)技术对E-钙粘素、p16和ER基因CpG岛甲基化进行检测。结果:E-钙粘素、p16和ER基因过甲基化在PCa中的发生率分别为30%、25%和65%。非恶性病变(BPH和HGPIN)很少发生DNA过甲基化。结论:PCa的发生及进展与E-钙粘素、p16和ER基因过甲基化密切相关,检测甲基化状况对HGPIN与PCa的鉴别诊断可能有辅助作用。E-钙粘素和ER基因过甲基化可能提示预后差。

遗传性和散发性胃癌上皮型钙黏附素的表达和启动子甲基化状态的关系

目的检测上皮型钙黏附素的表达和其基因(CDH1)的启动子甲基化情况,探讨上皮型钙黏附素在家族遗传性胃癌和散发性胃癌发生中的作用。方法收集符合诊断标准的家族性遗传性胃癌19例、不伴胃癌家族史散发性胃癌19例,正常胃粘膜组织对照组19例。采用免疫组织化学方法检测上皮型钙黏附素表达情况,采用甲基化特异的PCR检测基因启动子甲基化情况。结果上皮型钙黏附素在遗传性和散发性胃癌组的表达均有明显下调,与正常组织的差异具有统计学意义(P<0.001)。遗传性胃癌和散发性胃癌的上皮型钙黏附素均降低,但两组差异没有统计学意义(P=0.84)。正常组织中未检测到启动子甲基化,遗传性胃癌中3例检测到甲基化,散发性胃癌组中检测到10例启动子甲基化,散发性胃癌组的甲基化率高于遗传性胃癌组(P<0.01)。结论CDH1基因启动子区甲基化可能是导致散发性胃癌上皮型钙黏附素表达下调的重要原因,但可能不是遗传性胃癌的上皮型钙黏附素表达下调的主要作用机制。

遗传性胃癌与上皮钙粘附素基因突变的研究进展

上皮钙粘附素(E-cadherin,E-CD)是存在于正常上皮组织的钙依赖性蛋白粘附分子,又称为CAM120/80,与上皮细胞间粘附有重要关系,编码基因被称为E-CD或CDH1基因.1998年新西兰的Parry等在遗传型胃癌的毛利人家族发现E-CD基因突变.随后有许多研究表明其他许多肿瘤也存在E-CD基因突变.进一步研究证实,E-CD在家族弥漫型胃癌的发生发展中有重要作用.我国胃癌的病死率居恶性肿瘤之首,占恶性肿瘤总病死率的23.24%.近年来弥漫型胃癌的比例有所上升.由于弥漫型胃癌约有10%显示出家族聚集性,引起了众多研究者的注意.我国符合遗传型胃癌诊断标准的约占全部胃癌的0.8%.遗传性胃癌具有发病集中、患者年轻等特点,故研究其作用机制对于遗传型胃癌的预防、诊断和预后判断等都有重要的学术价值.

上皮型钙粘素在宫颈鳞癌及癌前病变组织中的表达及其基因启动区CpG岛甲基化研究

目的检测上皮型钙粘素及其基因启动区CpG岛甲基化在宫颈癌组织及癌前病变组织中的表达及其在宫颈癌发病、侵袭和转移中的作用和意义。方法选择中南大学湘雅医院附属二院2006年10月～2009年10月40例宫颈鳞癌、52例宫颈上皮内瘤样病变（CINs）、18例正常宫颈。采用免疫组织化学法和甲基化特异PCR（MSP）法,检测E-cadherin蛋白表达及其基因启动子CpG岛甲基化状况。结果正常宫颈组织-CINs-鳞癌,这一演变过程中各组E-cad蛋白膜表达的阳性率和甲基化率分别为100%、61%、15%;0、28%、62.5%、100%分别呈降低和升高的趋势,各组比较差异均具有统计学意义（P〈O.05,P〈0.01）且与临床分期和病理分级（P〈O.05）;宫颈癌甲基化组（1/25））低于非甲基化组（5/15）,两者比较差异有统计学意义（P〈O.01）。结论 E-cad蛋白表达失活使其丧失了抑癌作用是宫颈癌发生、发展、转移的早期信号;其启动区CpG岛甲基化是E-cad蛋白灭活的机制之一。

应用MSP检测胃癌钙粘附素启动区域甲基化的临床意义

目的 检测胃癌及正常组织中上皮钙粘附素启动区域甲基化状况。方法 用甲基化特异的PCR法 (MSP)及酶切法检测 49例胃癌组织中钙粘附素启动区域甲基化状态。结果 胃癌组织中检测到程度不等的甲基化 ,其中低分化腺癌 (Borrman′sⅢ Ⅳ )甲基化发生率为 73 7% ,远高于其它病理类型癌发生率 33 3 %。正常组织未检测到甲基化。结论 甲基化特异的PCR法 (MSP)是检测胃癌钙粘附素启动区域甲基化状况一种较新且特异的实验方法 。

上皮型钙黏蛋白基因甲基化与消化系肿瘤

上皮型钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)基因位于染色体16q22.1,它编码的E-cad蛋白是一种钙依赖性黏附分子,分布于各类上皮细胞,在维持细胞的极性和完整性方面起重要作用。近年来大量研究表明,E-cad基因启动子区5'CpG岛的高甲基化可导致基因功能丧失,并与多种肿瘤尤其是消化系肿瘤的增殖、侵袭或转移密切相关。

E-钙黏附素基因甲基化及蛋白的表达在食管癌中的研究进展

食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一。其形成是多因素的作用、多基因的变化和多阶段发展的结果,而肿瘤的发生主要是基因表达异常造成的[1]。基因表达异常包括基因突变、基因缺失、基因过度表达和基因表型改变等,

木犀草素与叶酸对黄曲霉毒素B1致食管上皮细胞毒性及MTHFR基因高甲基化的影响

目的:研究木犀草素(luteolin,LUT)与叶酸(folic acid,FA)对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导损伤的人正常食管上皮细胞(human normal esophageal epithelial cells,HEEC)MTHFR基因甲基化的影响。方法:不同浓度(0、13、25、50、100、200μmol/L)AFB1染毒HEEC 24、48、72 h,CCK-8法检测细胞活力;将HEEC分为空白对照组、AFB1染毒组(200μmol/L)、LUT干预组(160μmol/L)、FA干预组(20、200μmol/L)以及联合干预组(160μmol/L LUT+20μmol/L FA、160μmol/L LUT+200μmol/L FA),处理24 h后CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blot检测MTHFR蛋白的表达水平,MassARRAY甲基化检测MTHFR基因启动子区甲基化的情况。结果:不同浓度的AFB1染毒HEEC 24、48、72 h均可以抑制细胞增殖,而经LUT和FA干预后,与AFB1染毒组相比,LUT及联合干预组细胞周期阻滞显著减少(P<0.05),细胞抑制率及凋亡率显著降低(P<0.05),MTHFR蛋白表达上调有所改善(P<0.05)。且LUT与FA及二者联合对MTHFR基因启动子区高甲基化水平均有降低作用(P<0.05)。结论:AFB1对HEEC有毒性作用,表现在增殖抑制、周期阻滞,促进凋亡,上调了MTHFR蛋白的表达,LUT干预可减弱这些损伤,对AFB1所致毒性起到一定的保护作用。AFB1提高了MTHFR基因启动子区甲基化水平,导致表观遗传的改变。LUT与FA及联合作用可以降低该甲基化水平,改善该表观遗传的改变。

CDH1基因启动子甲基化在上皮性卵巢癌转移方面的研究

目的探讨CDH1基因启动子甲基化对上皮性卵巢癌转移的影响。方法采用免疫组织化学方法检测38例正常卵巢上皮和80例上皮性卵巢癌组织中E-钙黏附素(E-cadherin)表达;应用甲基化特异的PCR(MSP)检测上述组织中CDH1基因启动子区甲基化;应用5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)使SKOV3细胞去甲基化,观察SKOV3细胞体外侵袭性的改变,并通过RT-PCR检测CDH1基因的改变。结果E-cadherin在正常卵巢组织中表达明显高于上皮性卵巢癌(P<0.05)。34例CDH1基因启动子区甲基化全部出现在卵巢癌组织中,有淋巴结转移组织中甲基化明显高于无淋巴结转移者(P<0.05),而CDH1基因启动子区有甲基化的卵巢癌组织中E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。经5-Aza-CdR处理后的SKOV3细胞体外侵袭性降低(P<0.01),CDH1基因的表达明显上调(P<0.01)。结论E-cadherin表达降低与上皮性卵巢癌转移关系密切,CDH1基因启动子区甲基化可能是导致E-cadherin蛋白表达减低的重要原因之一,因此启动子区甲基化与上皮性卵巢癌转移有关。

层粘蛋白及上皮型钙粘附素在妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的研究层粘蛋白(LN)及上皮型钙粘附素(E-cd)在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与恶性滋养细胞肿瘤侵袭的关系。方法应用免疫组织化学SP方法检测葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜上皮癌(简称绒癌)石蜡包埋组织中LN、E-cd的表达情况。结果LN、E-cd在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒癌中的表达存在差别(P<0.001)。LN、E-cd在侵蚀性葡萄胎及绒癌中的表达与葡萄胎比较均明显下降(P<0.001)。结论LN、E-cd在妊娠滋养细胞疾病中的表达异常,与恶性滋养细胞的高侵袭力密切相关。

非小细胞肺癌中E-cadherin基因甲基化及蛋白表达的研究

目的本实验通过探讨非小细胞肺癌癌组织与相应癌旁组织中E-cadherin(E-cad)基因异常甲基化改变及其蛋白表达的特点,以及其与肺癌发生发展的关系,从而为今后肺癌的诊断,治疗及预后提供新思路。方法应用DNA提取、甲基化特异PCR、蛋白电泳及免疫组化技术对肺癌组织与相应癌旁组织进行相关研究。结果50例癌组织的E-cadherin蛋白表达阳性率为32%(16/50),相应的癌旁组织阳性率表达为84%(42/50);癌组织中E-cadherin蛋白表达显著低于相应癌旁组织蛋白表达(P<0.001);同时50例癌组织及其对应癌旁组织的甲基化阳性率分别为74%(37/50)、40%(20/50),癌组织的E-cadherin甲基化阳性率高于相应的癌旁组织(P<0.001)。结论非小细胞肺癌组织中E-cadherin蛋白呈低表达,癌组织的E-cadherin基因启动子存在异常甲基化,E-cadherin基因启动子的异常甲基化可能与E-cadherin蛋白表达下调具有相关性,可作为肿瘤恶性程度的良好指标。

甲基化特异性PCR法检测胰腺癌组织E-cadherin基因甲基化

目的:探讨胰腺癌组织E-cadherin(E-cad,上皮钙粘附素)5’-CpG岛异常甲基化情况;进一步讨论DNA异常甲基化在临床早期诊断、预后中的应用。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)检测27例胰腺癌组织和9例良性胰腺组织E-cad基因甲基化情况。结果:①在9例胰腺良性肿瘤及正常胰腺组织中,E-cad基因非甲基化PCR扩增均为阳性,未见甲基化PCR扩增。②在27例胰腺癌组织E-cad基因甲基化PCR扩增阳性9例(33.33%,9/27),其中完全甲基化6例,部分甲基化3例;而非甲基化PCR扩增阳性为18例(66.67%,18/27)。③E-cad基因异常甲基化与性别、年龄大小、肿瘤大小之间均无显著性差异(P>0.05),但与肿瘤的组织学分级相关。结论:在胰腺癌组织中E-cad基因异常甲基化是胰腺癌组织区别于其它胰腺良性病变的生物学标志之一。