Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)来源外泌体(exosomes,Exos)-miR-21-5p(miR-21)调控上皮钠离子通道(epithelial sodium channel,ENaC)对高氧性急性肺损伤(hyperoxia-induced acute lung injury,HALI)的保护效应及可能机制。方法6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠60只,其中20只使用差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并培养,采用密度梯度离心法提取AEC-Ⅱ来源外泌体,透射电镜鉴定外泌体形态。余40只小鼠按随机数字表法分为(n=10):常氧(Control)组、高氧(HALI)组、高氧+Exos-miR-21(HALI+miR-21)组和高氧+siPI3K+Exos-miR-21(HALI+siPI3K+miR-21)组。除Control组外,余3组小鼠暴露于95%O 2的自制高氧饲养箱中构建HALI模型。72 h后RT-qPCR检测肺组织及外泌体miR-21表达;HE染色观察肺组织形态学变化并行肺损伤病理评分,计算肺组织湿/干质量比及肺泡液体清除率(alveolar fluid clearance,AFC);可见分光光度法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平;荧光分光光度法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测PTEN、AKT、p-AKT、PI3K及α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN靶向关系。结果原代AEC-Ⅱ提取的囊泡状物质经鉴定为外泌体,外泌体中miR-21表达显著增高(P<0.05),PTEN为miR-21靶基因。与Control组比较,HALI组HE染色可见肺组织肺间隔增厚、大量炎症细胞浸润及肺泡萎陷,HALI组、HALI+miR-21组及HALI+siPI3K+miR-21组肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达升高(P<0.05);SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),以HALI+siPI3K+miR-21组最明显。与HALI组比较,HALI+miR-21组HE染色可见肺间隔增厚、炎症细胞浸润明显减少,肺泡萎陷显著减轻;肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05);而SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤。

MicroRNA-7-5p通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道

目的:探讨microRNA-7-5p通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/血清糖皮质激素诱导激酶-1(SGK-1)信号通路负向调控人肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)的机制。方法:对人类非小细胞肺癌肺泡上皮细胞系A549细胞转染microRNA-7-5p模拟剂,设为microRNA-7-5p组,阴性对照组A549细胞转染与目的基因序列无同源性的不表达microRNA-7-5p的阴性对照剂。雷帕霉素组在A549细胞培养基中加入雷帕霉素。PP242组在A549细胞培养基中加入PP242。空白对照组仅加入lipo fectamineTM 2000试剂。采用RT-qPCR检测各组SGK-1 mRNA;免疫印迹法检测SGK-1蛋白、ENaC蛋白的表达量。比较各组的microRNA-7-5p表达水平、SGK-1 mRNA及蛋白表达量、ENaC蛋白表达量。结果:microRNA-7-5p组的microRNA-7-5p表达水平高于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组和PP242组,A549细胞转染成功上调microRNA-7-5p表达水平(P<0.05)。microRNA-7-5p组中,SGK-1 mRNA水平、SGK-1及ENaC-α、ENaC-β、ENaC-γ蛋白表达量均低于空白对照组、阴性对照组、雷帕霉素组(P<0.05)。结论:microRNA-7-5p可能通过mTORC2/SGK-1信号通路负向调控ENaC。

上皮细胞钠离子通道ENaC及其基因研究现状

人类上皮细胞钠离子通道（hENaC）由α、β、γ3个亚单位组成，分别由CNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因所编码。ENaC负责钠离子的限速重吸收，对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用。功能获得性ENaC基因突变可引起一种罕见的遗传性高血压——Liddle综合征；而功能丧失性ENaC基因突变可引起一种遗传性低血压——假性低醛固酮血症；原发性高血压是受遗传因素和环境因素共同影响的复杂性疾病，由于ENaC的维持钠的自身平衡和血压的重要作用，因此ENaC基因作为原发性高血压的候选基因而备受关注。

钠离子对成骨细胞的影响及其与上皮钠通道的关系

探讨不同浓度钠离子（Na ＋ ）对大鼠成骨细胞（Ob）成骨功能的影响，及其与上皮钠通道（ENaC）的相关性。方法 Ob经1×10 -4 ~1 mol/L Na ＋ 处理后，检测Ob的增殖和分化情况。再从中选3个浓度Na ＋ 处理Ob，RT-PCR测定成骨功能相关基因（Cbfa1，OPN，OC）及ENaC-α的表达变化。结果 在1×10 -4 ~1 mol/L范围内，Na ＋ 对Ob具有双向影响作用，与对照组相比低浓度Na ＋ 明显促进Ob分化，升高Na＋浓度则抑制Ob分化，而Na＋对Ob的增殖无影响。RT-PCR示：Na ＋ 对Ob中 Cbfa1、OPN 及 OC 表达同样具有双向作用，低浓度促进表达，高浓度抑制；并且 ENaC-α mRNA 在 Na ＋ 调控下的变化情况与成骨功能相关基因及Ob分化活性的变化相一致。 结论 Na ＋ 可直接影响Ob的分化及成骨功能相关基因的表达，而且 Na ＋ 对Ob的影响作用与ENaC相关。

上皮钠离子通道对大鼠破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

目的本文探讨上皮钠离子通道(ENa C)对破骨细胞功能和活性的影响。方法采用大鼠巨噬细胞集落刺激因子和核转录因子-κB受体活化因子配体诱导大鼠骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞。以1.5×104密度接种到12孔板,查随机表分3孔为1组,分为4组:Control组和不同浓度阿米洛利(Ami,ENa C的抑制剂)组。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行阳性破骨细胞鉴定;将破骨细胞和骨片共同培养,测定骨吸收陷窝的数目;用RT-PCR技术分析破骨细胞标志酶基因组织蛋白酶K(CK)的表达。结果不同浓度的Ami处理破骨细胞后,TRAP染色阳性破骨细胞减少,抑制破骨细胞的形成和骨吸收,而且降低破骨细胞特异性基因CK的表达。结论本次实验在细胞水平证明ENa C在破骨细胞上的表达并且调控破骨细胞的分化和骨吸收,说明ENa C可能参与破骨细胞的功能调节,提示破骨细胞可能存在一个与ENa C相关调节的新途径,为骨代谢的研究提供了一个新思路。

地塞米松对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠通道的影响

目的探讨地塞米松对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠通道的影响。方法将常规培养的A549细胞分为海水处理组(SG)、阴性对照组(NG)和地塞米松处理组(DG)。SG组经灭菌配方海水常规孵育,DG组在经海水处理后,加入地塞米松(终浓度1μmol/L)处理,NG组常规培养至实验终点。配方海水渗透压1300mmol/L,pH8.2,相对密度1.05。采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵α1亚单位(NKA-α1)、钠通道α亚单位(α-ENaC)的表达,水解比色法检测NKA活性。结果流式细胞术检测结果显示,海水孵育30min后A549细胞的存活率为90.60%±2.11%,地塞米松(1μmol/L孵育6h)处理对海水孵育后细胞的存活率无影响。NG组的NKA-α1和α-ENaC蛋白表达(0.113±0.041、0.396±0.124)显著高于SG组(0.038±0.009、0.093±0.038;P<0.01)或DG组(0.067±0.015、0.165±0.078;P<0.01),但DG组显著高于SG组(P<0.05)。与NG组[31.298±5.779μmol/(mg·h)]比较,SG组NKA酶活性[14.211±3.885μmol/(mg·h)]明显降低(P<0.05);DG组的NKA酶活性[18.641±1.921μmol/(mg·)]较SG组有升高(P<0.05)。结论在不影响人肺泡上皮细胞存活状况的情况下,地塞米松可以抑制海水孵育导致的α-ENaC、NKA-α1含量及NKA活性的下降。

上皮细胞钠通道α亚单位基因4种单核苷酸多态性与新疆哈萨克族人原发性高血压的相关性

目的研究上皮细胞钠通道(ENaC)基因启动子区G2139A、G3091A、第13外显子区T663A及第2内含子区T3593C位点的单核苷酸多态性(SNPs)及其构成的单体型与新疆哈萨克族人原发性高血压(EH)的相关性。方法采用病例-对照研究的方法,选择牧区哈萨克族EH患者(EH组)252例和血压正常者(NT组)254例,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性的方法,鉴定不同个体上述4个位点的基因型及等位基因的类型,分析4种SNPs基因型及等位基因在该民族人群的分布特征及其在EH与NT组分布频率的差异,分析4个位点连锁不平衡关系,观察4种SNPs组成的单体型与新疆哈萨克族人EH的相关性。结果新疆哈萨克族αENaC基因存在上述4个位点的SNPs,在总体人群中,G2139A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为26.2%、52.3%和21.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为52.37%和47.63%;G3091A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为19.0%、52.5%和28.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为45.56%和59.44%;T663A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为15.6%、49.9%和34.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为40.53%和59.47%;T3593C位点TT、TC、CC基因型的频率分别为88.5%、10.5%和1.0%,T、C两种等位基因的分布频率分别为93.77%和6.23%。4个位点基因型的分布均符合Hardy-weinberg平衡(P>0.05)。4种SNPs基因型及等位基因的分布频率在EH和NT组差异均无显著性(P>0.05)。4个位点间不存在连锁不平衡关系。单体型分析显示由2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型在EH组显著高于NT组(P<0.01),由2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型在NT组显著高于ET组(P<0.05)。结论虽然αENaC基因G2139A、G3091A、T663A及T3593C SNPs作为单个位点可能不足以引起个体EH的发生或者仅对EH的发生产生极其微效的作用,但其所构成的单体型可能对新疆哈萨克族人EH的发病发挥重要作用,其中2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型可能与该民族EH的发生相关,而2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型可能是该民族EH发生的保护因子,可降低该民族EH的患病风险,ENaC基因是新疆哈萨克族高血压发生的重要易感基因。

PI3K/Akt信号通路上调急性肺损伤大鼠肺泡上皮钠通道表达

目的探讨PI3K/Akt信号通路对急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)α、β和γ亚基表达的影响。方法成年SD大鼠随机分为对照组、ALI组(脂多糖)、胰岛素组及渥曼青霉素组,每组5只。观察肺组织病理改变,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量总肺水含量,RT-PCR和Western blot测定ENaC mRNA和蛋白、p-Akt表达。结果胰岛素组BALF蛋白含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、总肺水含量较ALI组显著减少(P<0.05),渥曼青霉素组BALF蛋白含量、MPO活性及总肺水含量较胰岛素组显著增加(P<0.05)。ALI组α-、β-和γ-ENaC蛋白表达显著低于对照组(0.33±0.06 vs 1.27±0.07,0.18±0.04 vs 0.72±0.04,0.37±0.04 vs 0.69±0.05)(P<0.05)。胰岛素组蛋白表达α-ENaC(2.19±0.04)、β-ENaC(1.18±0.07)和γ-ENaC(1.18±0.08)显著高于ALI组(P<0.05)。渥曼青霉素组蛋白表达α-ENaC(0.86±0.09)、β-ENaC(0.58±0.05)和γ-ENaC(0.59±0.02)显著低于胰岛素组(P<0.05)。胰岛素组ENaC mRNA和p-Akt较ALI组显著升高(P<0.05)。渥曼青霉素组ENaC mRNA和p-Akt较胰岛素组显著降低(P<0.05)。结论激活PI3K/Akt通路上调3种ENaC亚基表达,从而清除肺水肿液。

急性肾衰大鼠肾脏上皮钠通道和钠钾氯共转运蛋白的表达

目的:观察急性肾功能衰竭(ARF)时钠转运蛋白NKCC2和γENaC的水平及细胞定位,探讨ARF时水盐代谢障碍的机制。方法:ARF组大鼠肌注甘油建立ARF模型,对照组(Control)则给等量生理盐水;观察肾组织病理学改变,检测血清及尿液生化指标,应用免疫组化和蛋白印迹方法检测肾脏NKCC2和γENaC表达及胞内定位。结果:肌注甘油后第1、2和3天ARF组大鼠尿量分别为(35.2±8.7)、(47.9±11.0)和(43.2±17.0)mL.d-1,明显高于对照组(P<0.05),第4天开始逐渐恢复到对照组水平[(22.0±5.2)mL.d-1];ARF大鼠血肌酐和尿素氮分别为(53.8±12.2)和(9.5±1.2)mmol.L-1,明显高于对照组[分别为(38.9±9.1)和(7.9±1.5)mmol.L-1](P<0.05);ARF组大鼠肾小管管腔变小,上皮细胞发生脂肪变性,管周有炎细胞浸润;免疫组化检测ARF组大鼠NKCC2和γENaC表达增加;蛋白印迹光密度比值分析,肾小管上皮细胞膜NKCC2和γENaC蛋白增加比例(分别为2.54±0.27和1.83±0.23)明显高于细胞质(分别为1.53±0.17和1.21±1.18)(P<0.05)。结论:ARF时细胞膜及细胞质NKCC2和γENaC表达均增高,以细胞膜增高更为明显,提示AFR时肾组织相对正常肾单位代偿性功能增强,通过钠转运蛋白水平及细胞定位的变化参与水盐代谢的调节。

地塞米松对气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳黏膜上皮钠通道mRNA转录的影响

目的探讨地塞米松对气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)转录的影响。方法 18只清洁级SD大鼠随机分为为干预组、模型组及正常对照组,每组6只(12耳)。正常对照组未予任何处理,干预组及模型组通过增加环境气压制作气压创伤性中耳炎模型,干预组在造模后连续三天腹腔注射地塞米松(2mg/kg,加入生理盐水0.5ml)。在造模后第1、3、7天分别观察各组鼓膜形态变化;在造模后第七天取中耳黏膜,采用实时定量-聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,Real time-PCR)检测各组大鼠中耳黏膜中ENaC转录情况。结果对照组大鼠各时间段鼓膜均未见明显异常。模型组第1天每只大鼠至少有一耳鼓室内充满琥珀色积液,鼓膜充血,松弛部膨出,可见小气泡;第3天时鼓室仍有琥珀色积液,以上鼓室为著,松弛部内陷,气泡消失;第7天时未见鼓室积液,鼓膜亦基本恢复正常。干预组第1天每只大鼠至少有一耳可见鼓室内充满琥珀色积液,鼓膜充血,松弛部膨出,可见小气泡;第3天时所有大鼠双耳均未见明显鼓室积液征,鼓膜浑浊;第7天时未见鼓室积液,鼓膜亦基本恢复正常。干预组大鼠中耳黏膜α-ENaC-mRNA、β-ENaC-mRNA、γ-ENaC-mRNA均上调,分别为模型组的2.04、2.56、2.00倍(P<0.01)。结论地塞米松能加速气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳腔内积液的清除,增加ENaC在中耳黏膜中的基因转录,可能是糖皮质激素清除中耳腔积液的机制之一。

上皮细胞钠通道α亚基在大鼠和人睾丸、精子中的表达及其与精子活力的关系

目的:研究上皮细胞钠离子通道α亚基(ENaC-α)在大鼠和人的睾丸、精子上的表达及其与人精子活力之间的关系。方法:用western-blot检测ENaC-α在大鼠和人睾丸、精子上的表达,同时免疫荧光检测其在大鼠睾丸的分布特点。用计算机辅助精液分析检测ENaC-α的特异阻断剂EI-PA[5-(N-ethyl-N-isopropyl)-amiloride hydrochloride]对精子活力的影响。结果:ENaC-α亚基表达于大鼠睾丸精母细胞、精子细胞,以及大鼠成熟精子的鞭毛中段;它也存在于人睾丸和成熟精子的鞭毛中段。体外精子活力实验表明,获能过程中ENaC的阻滞,可以促进人精子活力的增加,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:ENaC-α构成的离子通道在生精细胞中表达,最终局限分布于成熟精子的鞭毛中段的质膜中。而特异阻断剂EIPA可以抑制上皮细胞钠离子通道,从而提高精子活力。

FOXO1对急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道的调控作用及其机制

目的:探讨叉头框蛋白O1(FOXO1)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)的调控作用,并阐明其可能的作用机制。方法:20只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和LPS组,每组10只。经相应处理后分别留取标本,HE染色观察2组小鼠肺组织病理形态表现,RT-PCR和Western blotting法检测2组小鼠肺组织中α亚基ΕΝαC(αENaC)mRNA表达水平及磷酸化FOXO1(pFOXO1)表达水平。培养肺泡上皮A549细胞,分别进行基因干预,使A549细胞过表达或沉默FOXO1基因,RT-PCR法检测αENaC mRNA表达水平。A549细胞分为对照组、胰岛素组、胰岛素+PI3K抑制剂组和胰岛素+AKT抑制剂组,分别干预后收集细胞,Western blotting法检测各组A549细胞中pFOXO1(Ser256)蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组A549细胞中αENaC mRNA表达水平,免疫荧光法检测FOXO1在细胞中的定位情况。结果:与对照组比较,LPS组小鼠肺组织病理评分明显升高(P<0.05),肺组织中pFOXO1(Ser256)和αENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),二者呈正相关关系(r=0.703,P<0.05);与对照组比较,过表达FOXO1组A549细胞中αENaC mRNA表达水平降低(P<0.05),沉默FOXO1组αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,胰岛素组A549细胞中pFOXO1(Ser256)蛋白和αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05),pFOXO1主要分布于细胞质中,而胰岛素+PI3K抑制剂和胰岛素+AKT抑制剂组A549细胞中αENaC mRNA和pFOXO1蛋白表达水平低于胰岛素组P<0.05)。结论:FOXO1磷酸化失活后由细胞核穿梭至细胞浆,对αENaC的抑制作用减弱,从而上调αENaC表达。

上皮细胞钠通道α亚基Thr663Ala多态性与中国人群脑出血发病无关

目的了解上皮细胞钠通道α亚基(αENaC)Thr663Ala多态性与中国人群脑出血之间的关系。方法利用多聚酶链反应和分子杂交技术对该位点在中国人群脑出血患者(202例)中的分布进行了检测和分析,并与对照组人群(190例)进行比较。结果αENaCThr663Ala多态性在两组人群中的分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,ThrThr、ThrAla、AlaAla三种基因型在脑出血组分布频率分别为30·69%、44·55%和24·75%,对照组中分别为25·26%、43·68%和31·05%,两组人群663Ala等位基因频率分别为47·03%和52·89%,差异均无统计学意义。此外,中国人群663Ala等位基因频率与日本人相仿,显著高于美国白人和黑人。结论αENaCThr663Ala多态性不是中国人群脑出血的分子遗传学标记物,663Ala等位基因频率分布在亚洲人和美国人中存在种族差异。

急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

目的研究急性大鼠肺泡II型细胞钠通道各亚基的表达。方法20只健康SD大鼠,对其肺泡II型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平。结果急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单位均有表达,其中α-亚基mRNA表达最强,显著高于β-和γ-亚基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别。结论大鼠肺泡II型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用。

成骨细胞上皮钠离子通道研究进展

骨质疏松是一种最为常见的代谢性骨病,其发病机制比较复杂,且与成骨细胞的功能息息相关。上皮钠离子通道(epithelial sodium channel,ENaC)蛋白是细胞膜上的一种糖基化大分子蛋白,现已发现其结构、功能异常与许多疾病的发生和发展有关。骨骼中的钠离子占体内总钠量的一半,钠离子的平衡受上皮钠离子通道(ENaC)调节。研究表明,成骨细胞上有ENaC的表达,其对成骨细胞的增殖、分化及功能均有影响,可能与骨质疏松发病机理有关。本文综述了近年来成骨细胞上皮钠离子通道的相关研究进展。

去氨加压素对耳蜗功能及上皮钠通道表达的调节作用

目的研究去氨加压素DDAVP调节豚鼠耳蜗功能及上皮钠通道蛋白α亚基(α-ENaC)的表达,探讨其在内淋巴积水中的作用。方法将24只豚鼠随机分为3组,分别给予0、5、10天DDAVP,通过耳蜗电图(ECochG)检测耳蜗功能学改变。应用苏木素-伊红染色(HE)确定各组耳蜗组织形态学改变,并用免疫组化法确定α-ENaC蛋白在耳蜗定位表达。采用蛋白印迹实验(WesternBlot)分别检测不同给药时间豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达水平。结果DDAVP注射后,ECochG提示部分豚鼠耳蜗出现内淋巴积水,HE证实豚鼠内淋巴积水。α-ENaC蛋白在耳蜗血管纹、螺旋韧带、Reissner膜、Corti器、螺旋缘、螺旋神经、耳蜗神经表达。与未给予DDAVP相比,10天组豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高(P<0.05);。结论 DDAVP调节豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高,进而调节内淋巴代谢,诱导内淋巴积水,影响内耳功能。

β2肾上腺素受体基因、α上皮细胞钠通道基因和G蛋白β3亚基基因联合变异与维吾尔族人群高血压的关系

目的:探索β2肾上腺素受体(ADRB2)基因G1023A,α上皮细胞钠通道(ENaC)基因G2139A和G蛋白β3亚基(GNB3)基因C825T多态性与新疆维吾尔族人群原发性高血压的关系。方法:采用人群为基础的病例对照研究,高血压组269例,正常血压组229例。用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测ADRB2基因G1023A基因型、ENaC基因G2139A基因型和GNB3基因C825T基因型,分析其与与维尔族人群高血压的关系。结果:高血压组和正常血压组的ADRB2基因型分布分别为GG:0.202、0.147;AG:0.266、0.339;AA:0.532、0.513,差异无统计学意义(P=0.119)。高血压组和血压正常组的ENaC基因型分布分别为GG:0.249、0.266;AG:0.472、0.476;AA:0.281、0.260,差异无统计学意义(P=0.840);高血压组和血压正常组的GNB3基因型分布分别为CC:0.346、0.293;CT:0.394、0.437;TT:0.260、0.271,差异无统计学意义(P=0.418)。用Logistic回归模型校正年龄、性别、吸烟、体重指数、腰围、臀围、血糖、甘油三酯、总胆固醇及胆红素之后,亦未发现三个位点与原发性高血压有关。进一步分析未发现三个位点对维吾尔族高血压的发病有交互作用(P=0.080)。结论:在新疆维吾尔人群中,未发现ADRB2基因G1023A、ENaC基因和GNB3基因多态性单独或联合作用在高血压发病中起作用。

雄激素剥夺对油酸诱导急性肺损伤肺泡上皮钠离子通道表达的研究

目的:观察通过手术去势方法降低大鼠体内雄激素水平对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome,ALI/ARDS)肺组织中肺泡上皮钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel alpha-subunit,ENaC-α)的影响。方法:20只Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、假手术模型组、去势手术模型组4组,每组5只。以尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)0.15 ml/kg复制ALI/ARDS模型,去势手术模型组和假手术模型组分别于造模前2周(14 d)行开腹双侧睾丸切除术或开腹但不行睾丸切除。于造模成功6 h后行开胸手术,测定肺湿重/干重比值(wet/ery,W/D),用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot测定肺组织中ENaC-αmRNA及蛋白的表达。结果:(1)与正常对照组比较,所有模型组大鼠肺组织病理学改变明显且W/D比值明显增加(模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显降低(ENaC-αmRNA:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.001;ENaC-α蛋白:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.045)。(2)与模型组相比,去势手术组大鼠肺组织病理学改变较减轻,W/D比值明显降低(P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显上调(ENaC-αmRNA:去势手术模型组与模型组,P=0.002;ENaC-α蛋白:去势手术模型组vs.模型组,P=0.030)。结论:在ALI/ARDS发生时,雄激素本身对急性肺损伤时肺泡上皮细胞中ENaC-α的表达具有抑制作用,降低体内雄激素水平可以提高肺组织中ENaC-α的mRNA和蛋白的表达,降低肺组织水肿程度。

类固醇肌萎缩症与上皮钠通道表达的实验研究

目的基于类固醇肌萎缩症(SMA)大鼠模型,分析大鼠骨骼肌萎缩与其上皮钠通道蛋白(ENaC)表达的相关性,探讨ENaC在SMA发病机制中的可能作用。方法将32只3个月龄雌性SD大鼠分为4组分别给药:对照组(C组)每周4次肌内注射生理盐水;低频给药组(L组)、中频给药组(M组)和高频给药(H组)分别予以每周2、4、6次肌内注射地塞米松(Dex)每次1.0mg/kg。给药4周停药处死,取腓肠肌称质量,石蜡包埋制片,行苏木精-伊红(HE)染色形态学观察,肌纤维横截面积(FCSA)测量,以及糖皮质激素受体(GR)和α-上皮钠通道蛋白(α-ENaC)免疫组织化学检测(IHC)及其相关性分析。结果 (1)各给药组大鼠体质量和腓肠肌湿质量均较C组下降,且有剂量依赖性。(2)各给药组FCSA均较C组减少,且有剂量依赖性。(3)GR的M和H组积分光密度(IOD)值较C组增高;α-ENaC的L、M和H组IOD值较C组增高,且有剂量依赖性;GR和α-ENaC的IOD值变化呈正相关。结论 GC诱导骨骼肌组织ENaC表达增高,可能与SMA的肌萎缩病变相关。

胰岛素通过PI3K信号通路对肺泡上皮钠通道β亚基表达的调控

目的:探讨胰岛素对肺泡上皮细胞A549上皮钠通道β亚基(β-ENaC)表达的影响,阐明胰岛素调控β-ENaC的可能信号途径。方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,将细胞分为对照组、胰岛素组[分别以不同浓度(2、20和200mU·L-1)胰岛素作用不同时间(30、60和120min)]和LY294002组(胰岛素+LY294002)。采用RT-PCR和Western blotting法测定各组细胞中β-ENaC mRNA和蛋白表达水平以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,给予不同浓度(2、20和200mU·L-1)胰岛素作用后,β-ENaC mRNA和蛋白表达水平随浓度增加而增加(P<0.05)。与对照组比较,给予不同浓度(2、20和200mU·L-1)的胰岛素作用后,p-Akt蛋白表达水平随浓度增加而增加(P<0.05)。与对照组比较,胰岛素作用不同时间(30、60和120min)后,β-ENaC mRNA和蛋白表达水平随时间延长而增加(P<0.05)。与胰岛素组比较,LY294002组β-ENaC mRNA和蛋白表达及p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:激活PI3K/Akt通路能上调β-ENaC mRNA和蛋白表达水平,有益于肺水肿液的清除。