microRNA-7对人肝癌细胞MHCC-97H上皮间质转化的影响及作用机制

目的探讨microRNA-7(miR-7)对肝癌细胞株MHCC-97H上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法将构建的miR-7真核载体单独及分别联合野生型或突变型EGFR 3’-UTR真核载体共转染MHCC-97H细胞,采用Realtime PCR、Western blot检测EMT标识蛋白E-cadherin、β-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达;细胞划痕、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化;双荧光素酶实验分析miR-7对EGFR的调控作用。结果与正常组相比,转染miR-7真核载体组细胞E-cadherin、β-catenin表达均显著升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin表达则明显降低(P<0.01);同时,细胞的侵袭、迁移能力均明显减弱(P<0.01);分别与转染GV272+EGFR 3’-UTR野生型和转染GV272/miR-7+EGFR 3’-UTR突变型相比,转染GV272/miR-7+EGFR 3’-UTR野生型组萤火虫荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。结论 miR-7可通过与EGFR 3’-UTR结合而抑制EGFR信号通路,降低MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力,进而抑制MHCC-97H细胞EMT。

SiRNA干扰FOXF2对人宫颈癌Hela细胞的上皮-间质转化的影响

目的研究siRNA干扰叉头框转录因子F2(forkhead box F2,FOXF2)对人宫颈癌Hela细胞的上皮-间质转化的影响。方法采用Real Time-PCR、Western blot分别检测siRNA干扰FOXF2前后Hela细胞中FOXF2mRNA、蛋白的表达变化来验证转染成功;同时用RT-PCR检测siRNA干扰FOXF2前后,Hela细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、Snail、Twist、P53、E2F1、RBmRNA的变化;Western blot检测siRNA干扰FOXF2前后,Hela细胞中E-cadherin、vimentin、Snail、P53、E2F1蛋白的变化。结果 siRNA干扰FOXF2后,RT-PCR、WB检测显示siRNA-FOXF2 1415组FOXF2的蛋白、mRNA均明显下降,验证转染率较高(P<0.001)。RT-PCR显示E-cadherin mRNA表达下降,vimentin、Snail及Twist mRNA表达升高;抑癌基因P53mRNA表达下降,致癌基因RB mRNA及其相关转录因子E2F1 mRNA表达升高。Western blot检测显示:E-cadherin蛋白表达下调,vimentin及Snail蛋白表达上调;抑癌基因P53蛋白表达下调,E2F1蛋白表达升高。结论 siRNA干扰FOXF2促进Hela细胞的上皮间质转化(EMT),并加速了肿瘤的进展。

miR-7与肝细胞性肝癌EMT及临床病理特征之间的相关性研究

目的探讨微小RNA-7(miR-7)与肝细胞性肝癌(HCC)临床病理特征及上皮间质化转变(EMT)之间的相关性。方法收集30组HCC(包括癌组织及对应癌旁组织)临床标本及临床相关病理资料,分别检测miR-7及EMT标志物N-钙粘蛋白(N-cadherin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,分析miR-7与HCC临床病理特征之间的相关性及miR-7与EMT之间的相关性。结果 miR-7、E-cadherin在癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),而N-cadherin的表达则相反。相关性分析表明,miR-7与E-cadherin呈正相关性,与N-cadherin呈负相关性。miR-7在HCC的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、是否伴随肝炎病毒感染无相关性,而与TNM分级、分化程度和血管侵犯密切相关。结论 miR-7的表达水平与EMT程度呈负相关性,检测miR-7的表达对HCC的临床诊断、治疗及预后判断具有潜在的重要意义。

ARK5蛋白在上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药中的作用

目的:探索上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药的机制,以提高卵巢癌患者化疗的疗效。方法:应用CCK8法检测卡铂处理后的上皮性卵巢癌细胞增殖,Western blot法检测上皮间质化转变相关蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况,流式细胞技术检测细胞表面CD133的变化情况,使用si RNA敲降AMP激活的蛋白激酶家族成员5(ARK5)后再观察卡铂的作用。结果:上皮性卵巢癌细胞系SKOV3与A2780的卡铂IC50分别为2.824 μg/m L 与1.760 μg/m L,并且卡铂能诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质化转变;卡铂诱导ARK5显著上调,而不影响SNF1/AMP激活的蛋白激酶表达,敲降ARK5基因能显著减弱卡铂诱导卵巢癌细胞产生上皮间质化转变的效果。结论:ARK5在上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药机制中具有重要作用,降低ARK5的表达可以减弱卡铂诱导卵巢癌细胞上皮间质化转变的作用。

AQP3在上皮型卵巢癌细胞卡铂耐药中的作用

目的探索上皮型卵巢癌细胞卡铂耐药的机制,为提高卵巢癌患者化疗效果提供前期基础。方法应用CCK8方法检测卵巢癌细胞对卡铂的IC50浓度,用Western blot方法检测卡铂处理后细胞上皮间质化转变(EMT)蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况,使用siRNA敲降AQP3后再观察卡铂对其作用。结果卵巢癌细胞系SKOV3与A2780的卡铂IC50分别为2.814μg/mL与1.516μg/mL,同时发现卡铂能诱导卵巢癌细胞发生EMT,基因芯片结果显示水通道蛋白AQP3显著上调,进一步敲降AQP3基因后,能显著减弱卡铂诱导卵巢癌细胞产生EMT的效果。结论 AQP3在卵巢癌细胞卡铂耐药机制中具有重要作用,降低AQP3的表达可以减弱卡铂诱导卵巢癌细胞上皮间质化转变的效果。

水通道蛋白AQP2在原发性肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中的作用研究

目的探索原发性肝细胞肝癌(HCC)多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药的机制,为进一步提高HCC患者介入治疗的疗效提供前期探索。方法应用Western blotting方法检测DOX处理后的上皮间质化转变(EMT)的相关蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况,使用流式细胞仪观察细胞干性标记CD133的变化情况,使用基因芯片技术观察DOX处理后的细胞机制变化。结果 DOX能诱导HCC细胞发生上皮间质化转变,并且能提升HCC细胞CD133的比例(3.5%vs 35.5%,P<0.05);基因芯片提示HCC细胞内水通道蛋白AQP2基因显著上调;敲降AQP2基因后,能显著减弱DOX诱导HCC细胞产生EMT的效果。结论水通道蛋白AQP2在肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中具有重要作用,降低AQP2的表达可以减弱多柔比星诱导肝癌细胞上皮间质化转变的效果。

Snail对宫颈癌细胞侵袭转移的影响

目的研究Snail与宫颈癌侵袭转移间的关系,并探讨其分子机制。方法构建正义全长Snail真核表达载体并转染宫颈癌细胞系HeLa、SiHa。采用Western blot方法分析相关基因表达,细胞伤痕愈合实验,Trans well模型穿膜细胞计数检测细胞侵袭转移能力。结果①在转染pEGFPC1/Snail的宫颈癌细胞株HeLa、SiHa中E-cadherin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调(P<0.05)。②宫颈癌细胞系HeLa、SiHa转染正义全长Snail真核表达载体,12h细胞伤痕愈合能力显著提高(P<0.05);转染pEGFPC1/Snail后,HeLa、SiHa细胞12h穿膜细胞数明显增多(P<0.05)。Snail过表达可显著促进宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的侵袭转移潜能。结论转录因子Snail促进宫颈癌上皮细胞间质化转变(EMT),并提高其侵袭转移能力。

视网膜α-crystallins在增生性视网膜疾病中的研究进展

α-crystallins是小分子热休克蛋白家族(small-molecule heat shock protein,sHSP)的重要成员,包括αA-crystallin和αB-crystallin,在各类组织细胞中具有细胞保护和分子伴侣功能。近年来,多项研究发现,视网膜组织α-crystallins可利用自身特性通过各种途径参与增生性视网膜病的血管新生、上皮/内皮细胞间质化等过程。本文主要介绍α-crystallins,尤其是αB-crystallin调节增生性视网膜疾病发展的分子机制,探讨其潜在的临床应用价值。

Twist和E-cadherin在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的探讨上皮间质转化因子Twist1、Twist2和上皮黏附分子E-cadherin在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及其意义。方法采用SP免疫组织化学法检测24例正常内膜(正常对照组)和卵巢型子宫内膜异位症异位内膜I-II期24例及III-IV期30例(异位组)的Twist1、Twist2及E-cadherin蛋白的表达染色评分分值情况,并作不同组间的比较。结果 Twist1、Twist2染色评分异位组I-II期(4.25±0.79,3.83±0.96)及IIIIV期(4.67±0.88,4.30±0.95)均高于正常组(3.50±0.83,3.54±0.88)(P均<0.05);Twist2染色评分异位组III-IV期(4.30±0.95)高于I-II期(3.83±0.96)(P<0.05)。E-cadherin蛋白染色评分异位组I-II期(3.79±0.98),III-IV期(3.57±0.73)均低于正常组(4.54±0.93)(P均<0.05)。Twist1和Twist2分别与E-cadherin呈负相关(r1=-0.42,r2=-0.81,P均<0.05);Twist1和Twist2呈正相关(r=0.32,P<0.05)。结论 Twist1、Twist2、E-cadherin表达与卵巢型子宫内膜异位症的发生相关,子宫内膜异位细胞侵袭转移能力的增强可能与Twist1、Twist2的高表达和E-cadherin的低表达有关。