抑制Yes相关蛋白通过抑制上皮间质转化减轻CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化

目的探索Yes相关蛋白(YAP)可否通过调控上皮间质转化影响肝纤维化的发生发展。方法将8周龄C57BL/6小鼠18只随机分为对照组、肝纤维化模型组和YAP抑制剂维替泊芬干预组,6只/组。肝纤维化模型采用四氯化碳(CCl_(4))溶液腹腔注射8周造模;维替泊芬干预组在CCl_(4)基础上第7~9周采用维替泊芬腹腔注射干预。HE染色、Masson染色、肝脏生化学检测观察小鼠肝脏纤维化程度;转录组、蛋白组学测序及联合生信分析探明肝纤维化过程中上皮间质转化通路是否受YAP调控;免疫组化染色和Western blotting检测YAP及上皮间质转化关键基因E-cadherin、N-cadherin、Twist等表达变化。采集健康体检、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化患者血清各60例,酶联免疫吸附法检测其中YAP、N-cadherin、Vimentin、Twist血清表达水平。C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、肝纤维化模型组、Twist抑制剂干预组和Twist抑制剂与YAP激动剂共同干预组,6只/组。HE染色、Masson染色、网状纤维染色观察小鼠肝脏纤维化程度,Western blotting检测各组α-SMA、YAP和Twist表达变化。结果小鼠肝组织病理学结果提示肝纤维化小鼠与对照组相比肝小叶结构破坏、假小叶形成,维替泊芬干预组纤维间隔变性,部分小叶结构恢复。随肝纤维化发生,血浆ALT、AST水平显著升高(P<0.01),维替泊芬干预组肝功能改善(P<0.01)。采用肝组织转录组、蛋白组测序及联合分析找到在肝纤维化形成和维替泊芬干预过程中同时在mRNA和蛋白水平差异表达的基因,发现了N-cadherin和Twist在3组间差异具有统计学意义(P<0.05),并进行PPI分析显示YAP与E-cadherin、N-cadherin存在关联。免疫组化和Western blotting结果提示N-cadherin、Twist、Vimentin随肝纤维化形成升高,E-cadherin在肝纤维化组织中表达下降(P<0.01)。抑制YAP可下调肝组织N-cadherin、Twist蛋白表达(P<0.01)。慢性乙型肝炎患者血清YAP、N-cadherin、Vimentin和Twist水平均随肝炎及肝硬化发生升高,在APRI>0.5或FIB-4>1.45患者中显著升高(P<0.01)。血清YAP在健康对照、肝炎、肝硬化患者中平均水平分别为4.09、5.69和5.36 ng/mL(P<0.01),其与N-cadherin、Vimentin、Twist水平均呈显著正相关,相关系数分别为0.626、0.435、0.526。采用Harmine抑制小鼠肝组织Twist表达,并在Harmine基础上予以YAP激动剂XMU-MP-1干预,肝组织病理学结果提示抑制Twist使肝纤维化小鼠肝组织炎症及纤维化程度减轻,同时激活YAP表达可再次加重胶原纤维沉积。Western blotting检测结果提示Harmine下调肝纤维化小鼠肝组织中α-SMA、YAP及Twist蛋白表达,同时激活YAP使肝组织α-SMA和YAP表达升高(P=0.079,P<0.05)。结论上皮间质转化是肝纤维化发生的重要机制之一,抑制YAP可通过减少上皮间质转化发生减轻肝纤维化。

Sall4与上皮间质转化标志物在子宫内膜癌组织中的表达与意义

目的探讨子宫内膜癌组织中sall4和上皮间质转化标志物[波形蛋白(vimentin)和钙黏蛋白(e-cadherin)]的表达及对肿瘤生物学行为的影响。方法采用免疫组化方法检测子宫内膜癌、子宫内膜组织及增生子宫内膜组织中sall4、vimentin和E-cadherin的阳性表达率;采用spearman相关分析子宫内膜癌中sall4与vimentin和E-cadherin表达的相关性,logistis回归分析考察相关临床病理因素的预后风险,Kaplan-Meier法分析sall4阳性表达患者术后3年生存率。结果子宫内膜癌组织中sall4和vimentin的阳性表达率高于子宫内膜组织和增生子宫内膜组织、E-cadherin的阳性表达率,低于子宫内膜组织和增生子宫内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织中sall4、E-cadherin阳性表达与肿瘤浸润程度(χ^(2)=4.286、8.148)、肿瘤组织分化(χ^(2)=6.166、6.834)、肿瘤直径(χ^(2)=4.115、6.074)、FIGO分期(χ^(2)=5.287、6.163)及淋巴结侵犯(χ^(2)=4.473、4.463)有关(P<0.05),而与年龄(χ^(2)=0.051、0.003)无关(P>0.05);vimentin阳性表达与肿瘤浸润程、肿瘤组织分化、肿瘤直径及FIGO分期有关(χ^(2)=6.787、7.577、5.370、4.450,P<0.05),而与淋巴结侵犯、年龄无关联(χ^(2)=0.617、0.207,P>0.05);sall4与E-cadherin在子宫内膜癌组织中的表达存在负相关(r=-0.328,P<0.05),与vimentin表达存在正相关(r=0.396,P<0.01);手术后子宫内膜癌患者影响预后的风险因素有肿瘤组织分化及浸润程度、淋巴结侵犯、FIGO分期及sall阳性(β=1.662、1.341、2.277、1.895、1.401,P<0.05),sall4高表达患者术后3年生存率明显低于低表达患者生存率(P<0.05)。结论sall4﹑vimentin及E-cadherin在子宫内膜癌中的异常表达与肿瘤发生和进展存在关联。

黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制

目的观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法取对数生长期MDA-MB-231细胞分为一组、二组、三组及对照组,一组、二组、三组分别加入2.5、5、10μmol/L的黄岑素,对照组不做任何处理。培养48 h时采用划痕修复实验观察四组细胞迁移能力、采用Transwell侵袭实验观察四组细胞侵袭能力,采用Western Blotting法检测细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、整合素αv、β3、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(整合素p-PI3K)。结果与对照组相比,黄岑素组细胞迁移率降低、侵袭细胞数少,细胞E-cadherin相对表达量高,vimentin、整合素αv、整合素β3、p-FAK、p-PI3K蛋白相对表达量低,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论黄芩素抑制MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移及EMT。黄岑素可能通过抑制整合素αv、整合素β3表达,进一步抑制p-FAK、p-PI3K蛋白表达,抑制MDA-MB-231的侵袭、迁移及EMT。

lncSIL通过EZH2/P21/CDK6信号通路负向调控TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化

目的研究在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺泡上皮细胞间质转化(EMT)进程中lncSIL的作用及其相关信号通路。方法采用Western blot法研究沉默lncSIL后对TGF-β1诱导EMT进程中细胞标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达的影响;通过RNA pulldown分析lncSIL相互作用蛋白,并检测过表达或沉默lncSIL后对其靶基因组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶(EZH2)以及下游因子P21蛋白(P21)和细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)表达的影响,并结合流式细胞术分析lncSIL对细胞周期进程的作用。结果沉默lncSIL后,间质细胞标志蛋白α-SMA和Col I表达升高,肺泡上皮细胞标志蛋白E-cad表达下降;RNA pulldown实验结果显示EZH2是与lncSIL相互作用的靶蛋白,并且沉默lncSIL后EZH2表达升高,其下游基因P21表达下调,CDK6表达上调,同时S期细胞的数量显著升高;过表达lncSIL时,EZH2与CDK6表达下调,P21表达上调,同时S期细胞的数量明显降低。结论lncSIL通过负向调控EZH2/P21/CDK6信号通路抑制细胞周期进程进而抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞向间质转化。

水苏碱调节Shh/Gli1信号通路对口腔癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组。EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响。结果L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05)。结论Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的。

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA和蛋白表达。结果在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达(P<0.05)。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达(P<0.05)。转染si-lncRNA XIST后,lncRNA XIST水平、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);共转染si-lncRNA XIST和miR-340-5p inhibitor后上述指标均得到逆转(P<0.05)。结论lncRNA XIST通过下调miR-340-5p促进卵巢癌细胞EMT。

三阴性乳腺癌中SOX10表达的临床意义及与上皮间质转化的相关性

目的探讨Y框蛋白10基因(SRY‑related hmg‑box 10,SOX10)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)组织中表达的临床意义及其与上皮间质转化(epithelial‑mesenchymal transition,EMT)的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测80例TNBC及60例非TNBC组织SOX10的表达水平,同时检测TNBC组织中EMT关键标志物波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏素(E‑cadherin)的表达水平,分析TNBC中SOX10、vimentin和E‑cadherin的表达与患者临床病理参数之间的关系及SOX10与EMT标志物的相关性。结果SOX10在TNBC中的表达明显高于非TNBC,差异有统计学意义(P<0.001)。SOX10的表达与TNBC患者的肿瘤分型、组织学分级、Ki67高增殖表达(Ki67≥30%)及淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、肿瘤最长径无关。SOX10的表达与vimentin表达呈正相关(r=0.398,P<0.001),与E‑cadherin表达呈负相关(r=-0.337,P<0.01)。结论SOX10在TNBC中特异性高表达,可作为TNBC鉴别诊断及预后的有效生物学标志物。SOX10可能通过调控EMT相关蛋白的表达促进肿瘤的侵袭和转移。

肝细胞癌合并微血管侵犯中上皮-间质转化相关分子机制的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种常见的消化系统恶性肿瘤,具有较高的死亡率和复发率。微血管侵犯(MVI)是肝切除术后肿瘤复发、预后不良的独立危险因素。上皮-间质转化(EMT)是HCC患者合并MVI的重要因素之一,在HCC的侵袭和迁移中起着重要作用。BOP1、AP-1、Lnc-TSPAN12、STIP1、FOXM1等多种生物大分子在HCC合并MVI患者中的异常表达与EMT密切相关,这些生物标志物可能在HCC的进展中具有重要的作用,有希望成为HCC新的治疗靶点。本文回顾了有关文献,系统阐述了EMT在HCC合并MVI发生发展中的作用,探讨了HCC合并MVI有关的生物标志物和相关分子机制,为HCC的发生发展、诊断、选择新的治疗靶点提供参考。 。

独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞PANC-1,取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞,随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组,独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预,Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;干预48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果与Control组比较,独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高,而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低(P均<0.05)。随着浓度增加和培养时间延长,独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降,呈现浓度和时间依赖性(P均<0.05)。独角莲醇提物500μg/mL组无论是培养24 h还是培养48 h细胞活力均显著升高,在后续研究中剔除。此外,由于培养48 h独角莲醇提物各浓度组细胞活力降低更显著,故选择培养48 h进行后续研究。与Control组比较,独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组划痕愈合率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax表达上调,EMT相关蛋白E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(P均<0.05)。结论一定浓度的独角莲醇提物不仅能抑制人胰腺癌细胞增殖和迁移并促进其凋亡,还能抑制其EMT。

缺氧诱导因子-1α和上皮间质转化相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的 探讨乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 免疫组化S-P法检测90例乳腺癌和40例乳腺纤维腺瘤组织中HIF-1α、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、微血管密度(MVD)的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 HIF-1α在乳腺癌组织中阳性率为68.9%(62/90),高于乳腺纤维腺瘤的7.5%(3/40)(χ^(2)=41.742,P<0.001)。E-cadherin在乳腺癌组织中的阳性率为70.0%(63/90),低于乳腺纤维腺瘤的95.0%(38/40)(χ^(2)=9.998,P<0.001)。Vimentin在乳腺癌组织中的阳性率为34.4%(31/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=18.091,P<0.001)。VEGF-C在乳腺癌组织中的阳性率为46.7%(42/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=27.582,P<0.001)。MVD在乳腺癌组织中的阳性率为96.7%(87/90),高于乳腺纤维腺瘤的0.0%(0/40)(χ^(2)=116.902,P<0.001)。HIF-1α表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期有关(χ^(2)=8.901,P=0.012;χ^(2)=8.711,P=0.013)。E-cadherin表达与乳腺癌肿块大小、组织学分级有关(χ^(2)=5.981,P=0.050;χ^(2)=6.051,P=0.048)。Vimentin表达与乳腺癌肿块大小、淋巴结转移、TNM分期有关(χ^(2)=6.047,P=0.049;χ^(2)=26.683,P<0.001;χ^(2)=28.651,P<0.001)。VEGF-C与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和分子分型有关(χ^(2)=12.562,P=0.000;χ^(2)=17.803,P<0.001;χ^(2)=13.485,P=0.004)。MVD与乳腺癌肿块大小有关(χ^(2)=8.595,P=0.014)。HIF-1α与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.513,P<0.001),与Vimentin、VEGF-C、MVD表达呈正相关(r=0.392,P=0.002;r=0.694,P<0.001;r=0.745,P<0.001)。结论 HIF-1α和EMT相关蛋白可能与乳腺癌的肿瘤血管生成有关,HIF-1α可能通过调控EMT在乳腺癌的侵袭、转移过程中发挥作用。

花姜酮对口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化的影响

目的研究花姜酮对人口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)花姜酮处理人口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞,分别在培养24、48、72 h时,应用实时定量荧光PCR检测EMT标志物波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA表达水平,并于培养48 h时采用Western blot法检测Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;采用MTT检测细胞增殖能力、流式细胞仪测定细胞凋亡能力、Transwell小室测定细胞侵袭能力。结果花姜酮处理后,HSC-3细胞E-cadherin mRNA表达水平显著提高(P<0.05);HSC-3细胞Vimentin mRNA表达受到明显抑制,且具有浓度依赖性(P<0.05)。花姜酮处理48 h时,随着花姜酮浓度的增加,HSC-3细胞中Vimentin蛋白表达水平逐渐降低,E-cadherin蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05)。随着花姜酮作用时间的延长及花姜酮浓度的增加,HSC-3细胞的增殖率逐渐降低(P<0.05)。花姜酮处理后,HSC-3细胞凋亡率明显升高,且随着花姜酮浓度的增加凋亡率显著升高(P<0.05);花姜酮处理后,HSC-3细胞侵袭数显著减少,随着花姜酮浓度的增加细胞侵袭数逐渐减少(P<0.05)。结论花姜酮可以通过抑制人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡,进而抑制EMT进程。

芍药汤通过PPARγ调控TGF-β1/Smads信号通路对溃疡性结肠炎湿热内蕴证肠纤维化上皮间质转化的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ介导TGF-β1/Smads信号通路调控上皮间质转化在溃疡性结肠炎肠纤维化中的作用及芍药汤的干预机制。方法采用复合病因造模建立溃疡性结肠炎湿热内蕴证大鼠模型。将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组(美沙拉嗪0.42 g/kg)和芍药汤低、中、高剂量组(11.1、22.2、44.4 g/kg),给药组分别予相应药物灌胃14 d。末次给药后24 h观察大鼠一般状况及结肠损伤情况,免疫组化染色检测结肠组织白细胞介素(IL)-6、IL-10、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白表达,Western blot检测结肠组织PPARγ、转化生长因子(TGF)-β1、p-Smad蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜损伤严重,结肠组织IL-6、α-SMA、TGF-β1、p-Smad蛋白表达明显升高(P<0.01),IL-10、E-钙黏蛋白、PPARγ蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组结肠黏膜损伤明显减轻,结肠组织IL-6、α-SMA、TGF-β1、p-Smad蛋白表达明显降低(P<0.01),IL-10、E-钙黏蛋白、PPARγ蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),以芍药汤高剂量组作用最明显。结论芍药汤可减轻溃疡性结肠炎湿热内蕴证大鼠肠纤维化程度,其机制可能与上调结肠组织PPARγ表达,抑制TGF-β1/Smads信号通路,抑制上皮间质转化有关。

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2调节香烟提取物诱导的肺上皮间质转化

目的探索蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导肺上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调节作用。方法采用Q-PCR法和ELISA法探究Shp2抑制剂PHPS1对CSE诱导的肺上皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响;免疫荧光染色法检测EMT相关因子的表达;Western blot法检测p-Shp2/Shp2、p-Smad2/Smad2的蛋白水平。结果 CSE诱导肺上皮细胞Shp2的激活,导致TGF-β1分泌释放增加,进而引起E-钙黏蛋白表达下调,以及波纹蛋白和α-肌动蛋白表达上调,这些变化可被Shp2抑制剂PHPS1抑制。抑制Shp2活性或表达可抑制CSE诱导的Smad2的磷酸化。结论Shp2调节CSE诱导的肺上皮间质转化可能通过Shp2/Smad2信号途径,提示Shp2可能是治疗肺癌和慢性阻塞性肺病新靶点。

LncRNA SNHG15通过miR-483-3p/DDIT4轴调节非小细胞肺癌细胞的顺铂敏感性和上皮间质转化

目的 探究LncRNA SNHG15对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性和上皮间质转化的影响以及miR-483-3p/DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)轴在其中发挥的作用。方法 体外培养NSCLC细胞(A549)、NSCLC耐药细胞(A549/DDP),检测两种细胞对DDP的IC50及LncRNA SNHG15、miR-483-3p、DDIT4 mRNA与蛋白表达,将A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组、si NC组、si SNHG15组、si SNHG15+inhibitor NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组;蛋白印迹分析法检测各组细胞E-cad、N-cad、DDIT4蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-483-3p与LncRNA SNHG15、DDIT4的靶向关系。结果 与A549细胞相比,A549/DDP细胞对DDP的IC50、LncRNA SNHG15、DDIT4 mRNA与蛋白升高,miR-483-3p水平降低(P <0.05);A549/DDP组细胞间黏附明显被破坏;si SNHG15组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组细胞排列相对紧密,呈现上皮细胞特性;si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组较si SNHG15组细胞排列松散、扩散细胞多;与A549/DDP组相比,si SNHG15组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达升高,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达降低(P <0.05);与si SNHG15组相比,si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达降低,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达升高(P <0.05)。结论沉默A549/DDP细胞中SNHG15表达可通过调控miR-483-3p/DDIT4,抑制A549/DDP细胞增殖、侵袭、迁移、EMT,并降低A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

桑白皮提取物桦木酸对TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化的抑制作用

目的探讨桑白皮提取物桦木酸对生长转化因子(TGF-β1)诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化的抑制作用及其可能机制。方法以HPAEpiC细胞为研究对象,采用0.5 ng·mL^-1 TGF-β1诱导的上皮间质转化模型进行实验。设置空白对照组、模型组、桦木酸给药组。MTT法检测桦木酸对HPAEpiC细胞存活率的影响;Real-time PCR分析桦木酸对诱导后的HPAEpiC细胞内miR-200b-5p、miR-200c-5p表达水平及上皮间质转化标志物(Coll、E-cad、α-SMA mRNA)表达水平的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测桦木酸对诱导后HPAEpiC细胞内羟脯氨酸(HYP)分泌水平的影响。结果桦木酸对HPAEpiC细胞增殖活性呈单向抑制趋势,且增殖抑制率与药物浓度呈依赖关系。与模型组比较,桦木酸可有效抑制诱导后细胞内miR-200b-5p(P<0.05)、miR-200c-5p(P<0.01,P<0.05)表达,同时降低细胞内ColⅠ(P<0.01)、α-SMA mRNA(P<0.05)表达,促进E-cadherin mRNA表达(P<0.01,P<0.05),降低细胞内HYP含量(P<0.01,P<0.05)。结论桑白皮提取物桦木酸对TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化有一定的抑制作用,为特发性肺纤维化潜在的治疗药物,其可能的作用机制为抑制miR-200b-5p、miR-200c-5p表达;下调ColⅠ和α-SMA mRNA,上调E-cad mRNA。

白花蛇舌草提取物通过Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化

目的:探讨白花蛇舌草提取物对胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化(EMT)的影响,分析其与Hippo-Yap相关蛋白(YAP)信号通路活化的关系。方法:体外培养胰腺癌SW1990细胞,试验分为7组:对照组(不添加任何药物处理),低剂量组(白花蛇舌草提取物20 mg/ml),中剂量组(白花蛇舌草提取物50 mg/ml),高剂量组(白花蛇舌草提取物100 mg/ml),抑制剂组(XMU-MP-1抑制剂),高剂量+抑制剂组,阳性对照组(冬凌草甲素15μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测SW1990细胞凋亡情况;Western blot检测YAP及其磷酸化蛋白(p-YAP)、E钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、转录因子(Snail)表达情况。结果:与对照组相比,白花蛇舌草提取物不同剂量组SW1990细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组均显著高于中剂量组、低剂量组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组SW1990细胞凋亡率、p-YAP及E-cadherin蛋白表达量均显著降低(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著高于高剂量+抑制剂组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组YAP、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达量显著升高(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著降低(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著低于高剂量+抑制剂组(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可能通过活化Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞EMT的发生。

上皮-间质转化及其相关分子标志物在肺癌中的研究进展

肺癌已成为全球死亡率最高的疾病之一。上皮细胞向间质细胞的转化(EMT)在肿瘤的侵袭与转移过程中发挥重要作用,而这一现象也存在于肺癌中,且与肺癌的侵袭和转移密切相关。对肺癌上皮间质转化的机制及其EMT相关标志物的研究有助于寻找精确的肺癌分子靶向治疗方式并为肺癌的临床诊断提供切实可行的方法。文章对肺癌EMT现象与机制以及EMT相关肿瘤标志物的研究进展进行综述。

乳腺癌上皮间质转化标志物的研究进展

转移和复发是乳腺癌的主要死因。近年来研究发现,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是乳腺癌转移的主要机制之一。EMT是指细胞由上皮表型向间质表型转变的过程,目前许多研究者报道了EMT相关的基因、蛋白、microRNA以及激酶等的改变与乳腺癌侵袭和转移的关系,然而到目前为止,有关EMT标志物与乳腺癌的关系缺乏系统的总结。本文就EMT标志物与乳腺癌侵袭和转移的关系进行综述。

抑癌基因PTEN对舌鳞状细胞癌侵袭性及上皮-间质转化相关蛋白表达的影响

目的:探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)对舌鳞状细胞癌侵袭性的影响,阐明PTEN与舌鳞状细胞癌上皮间质转化(EMT)的关系。方法:舌鳞状细胞癌SCC-4细胞株分为未转染组(SCC-4细胞)、转染组(稳定转染了PTEN的SCC-4细胞)和空载体组(转染了空载体的SCC-4细胞)。用Transwell侵袭实验测定3组SCC-4细胞的侵袭能力;Western blotting法检测与EMT相关的E-cad、vimentin和snail蛋白的表达。结果:未转染组、空载体组和转染组SCC-4细胞在Transwell侵袭小室中培养36h后穿膜细胞数分别为82±5、80±4和42±5,其中未转染组与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05),转染组与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.001)。与未转染组比较,转染组SCC-4细胞中E-cad、vimentin和snail蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),E-cad表达上调,vimentin和snail表达下调;空质粒组与未转染组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PTEN可能是通过抑制舌鳞状细胞癌SCC-4细胞株的EMT过程来降低其侵袭能力。

上皮-间质转化相关标志物对鼻咽癌远期疗效预测的意义

目的探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物神经钙粘连素(N-Cadherin)、上皮钙粘连素(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Twist在鼻咽癌肿瘤组织中的表达,及其对鼻咽癌复发、转移和预后的意义。方法采用免疫组织化学方法检测77例鼻咽癌组织标本中的E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白表达。通过计算机辅助图像分析系统定量分析各EMT相关标志物的表达情况。采用单因素和多因素分析方法评估上述标志物对鼻咽癌复发、转移的预测价值。结果单因素分析显示,E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白表达与鼻咽癌复发、转移相关(P<0.05)。多因素分析显示,E-Cadherin和Vimentin是影响鼻咽癌复发、转移的独立风险因素。采用Kaplan-Meier法进行生存分析并作生存曲线。Log-rank检验显示,肿瘤组织内E-Cadherin、N-Cadherin、Twist低表达与高表达患者间生存率均有显著差异(P<0.05),而Vimentin高表达与低表达患者间生存率差异不显著(P=0.055)。结论 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白与鼻咽癌转移、复发密切相关。EMT相关标志物对鼻咽癌侵袭、转移和预后有一定的预测价值。