肺癌上皮-间质转变现象的研究进展

近几年来对于恶性肿瘤上皮-间质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的研究成为了防治恶性肿瘤的研究热点。国内外的研究发现恶性肿瘤如卵巢癌、前列腺癌、胃癌等中EMT现象参与恶性肿瘤局部淋巴结及远处脏器的转移,并发现EMT现象中主要的分子蛋白及信号通路。对于死亡率最高的恶性肿瘤肺癌中EMT现象的研究也取得了一定的成果。本文对于肺癌EMT现象中相关诱导分子及信号通路等方面的研究成果作一综述,希望通过总结分析,明确以后的研究方向,进一步探索肺癌等恶性肿瘤的分子靶向治疗方式。

Src酪氨酸激酶抑制剂对人胃癌细胞SGC7901上皮-间质转变相关基因的作用及机制

目的:探讨Src酪氨酸激酶抑制剂对人胃癌细胞SGC7901上皮-间质转变相关基因的作用及机制。方法:以Src酪氨酸激酶抑制剂作用前后的SGC7901细胞为研究对象,应用Western blot及real time PCR观察细胞内p-Src及上皮间质转变标志物E-钙黏素(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的变化,报告基因技术检测Snail在转录水平表达的变化。结果:Src酪氨酸激酶抑制剂可上调E-cadherin在mRNA和蛋白水平变化,下调β-catenin在mRNA和蛋白水平变化及Snail的启动子活性。结论:Src酪氨酸激酶抑制剂可抑制人胃癌细胞SGC7901上皮间质转变相关基因表达,其机制可能与其下调SGC7901细胞Snail的启动子活性有关。

miR-149促进鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间质转变(英文)

目的:探讨miR-149在鼻咽癌中的功能和机制。方法:Real-time PCR和2-△△Ct计算方法验证miR-149在鼻咽癌细胞系中的表达,分别应用MTT实验、划痕实验和transwell迁移实验分析miR-149对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能的影响。Western印迹检测E-cadherin的变化。结果:相对于正常鼻咽上皮细胞NP69,miR-149在5-8F和6-10B鼻咽癌细胞系中表达增高。MTT实验、划痕实验和transwell实验显示miR-149能够促进鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭。Western印迹证实miR-149能够降低E-cadherin的表达;反之,抑制miR-149能抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭转移能力。结论:miR-149通过调节细胞上皮-间质转变在鼻咽癌的侵袭转移中发挥重要作用。

肿瘤相关中性粒细胞诱导人粘液表皮样癌细胞上皮-间质转变和侵袭转移的功能及机制研究

目的:研究肿瘤相关中性粒细胞对人粘液表皮样癌MC3细胞上皮-间质转变(EMT)和侵袭转移过程调控的功能及机制。方法:分离培养C57小鼠骨髓中性粒细胞,Transwell检测肿瘤相关中性粒细胞对MC3侵袭和迁移的影响;Western印迹和Real-time PCR检测Vimentin等mRNA和蛋白表达;免疫荧光等检测Vimentin表达。结果:肿瘤相关中性粒细胞中TGF-β表达增加;MC3细胞与中性粒细胞共培养后Vimentin和Snail表达增加;裸鼠体内实验表明中性粒细胞浸润程度与Vimentin表达相关。结论:肿瘤相关中性粒细胞通过TGF-β诱导MC3细胞中Snail表达,并促进肿瘤侵袭和转移。

肝癌细胞中DNAJC6过表达可诱导上皮-间质转变过程的发生

目的通过体外实验,探讨DNAJC6在肝细胞肝癌进展中的作用途径。方法应用体外肝癌细胞培养、质粒构建、转染及逆转录-聚合酶链反应检测肝癌细胞Hep G2中DNAJC6表达对上皮-间质转变(epithelial-tomesenchymal transition,EMT)过程的影响。结果与对照组比较,转染DNAJC6后的肝癌细胞Hep G2中EMT相关转录因子Twist1、Snail、Slug、ZEB1表达水平明显升高(P<0.01),间质细胞标记物神经-钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达上调(P<0.01),上皮标记物上皮-钙黏素(E-cadherin)和上皮细胞紧密连接蛋白(ZO-1)表达下调(P<0.01)。结论 DNAJC6通过诱导EMT过程参与肝细胞肝癌的进程。

四跨膜蛋白CO-029过表达与胆管癌上皮-间质转变及转移的关系

目的探讨四跨膜蛋白CO-029表达与胆管癌上皮-间质转变(EMT)及肿瘤转移的关系和作用机理。方法利用已构建的vshRNA-CO-029(LV/GFP/CO-029)慢病毒质粒转染并筛选沉默CO-029基因表达的稳转胆管癌细胞株HCCC-9810-vshRNA-CO-029作为沉默组,以模拟质粒转染的HCCC-9810细胞作为模拟组,以未转染细胞作为对照组。分别以细胞划痕、Transwell和裸鼠体内种植实验检测三组细胞的迁移和侵袭转移能力变化。应用免疫共沉淀和肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激实验检测CO-029对EMT相关基因表达的影响。结果沉默组细胞划痕愈合率低于模拟组细胞[(27.11±4.58)%比(92.84±6.24)%],沉默组细胞穿过Matrigel胶的数量为(57.15±6.10)个,低于模拟组(108.20±9.21)个及对照组(112.00±10.45)个,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。裸鼠肝脏移植沉默组细胞的肝脏瘤体积为(2.17±0.54)cm3,而移植模拟组细胞的肝脏瘤体积为(0.74±0.15)cm3,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟组肺转移的发生率和肺转移瘤灶数目分别为100%(6/6)、(214.17±35.64)个,沉默组分别为16.7%(1/6)、(41.56±14.15)个,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示CO-029可与TNF-αR1形成复合物,TNF-α可诱导模拟组细胞的E-钙黏蛋白表达下调,波形蛋白和N-钙黏蛋白表达上调,而沉默组细胞中则无明显变化。结论CO-029表达与胆管癌侵袭转移能力正相关,并可能与TNF-α协同诱导胆管癌细胞发生EMT,是胆管癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。

糖代谢重编程在肿瘤上皮-间质转变过程中的生物学意义

上皮-间质转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)即成熟组织中的上皮细胞转变成具有迁移能力的间质细胞,该过程在恶性肿瘤的侵袭和转移过程中发挥重要作用。随着肿瘤的发生发展,细胞在恶性转变的同时往往会发生代谢方式的重编程,从依赖线粒体氧化磷酸化产生ATP的代谢方式转变为通过糖酵解途径吸收和利用葡萄糖。本文主要对肿瘤糖代谢重编程与细胞EMT转变关系的研究进展进行了综述。

TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变

目的检测转化生长因子(TGF-β1)能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞-间质细胞转变(epithelial-mes-enchymal transition,EMT)及其相应的信号转导机制。方法在体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型细胞(RLE-6TN)中加入TGF-β1后,于不同时间段收取细胞,分别采用Real-time PCR及Western blot检测上皮及间质细胞标志物表达的改变;Western blot检测TGF-β1对RLE-6TN细胞p-Smad2/3表达的影响;TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞形态学的改变采用倒置相差显微镜观察,超微结构的改变采用透射电子显微镜观察。结果加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其间质细胞标志物表达上调,上皮细胞标志物的表达下调;加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其p-Smad2/3的表达明显上调;形态学上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞向成肌纤维细胞样细胞转变;超微结构上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞特有的嗜锇性板层小体发生变性、肿胀并随TGF-β1作用时间延长最终完全消失。结论TGF-β1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关。

上皮细胞-间质细胞转变在肝纤维化中的作用

上皮细胞-间质细胞转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指在一定条件下上皮细胞失去上皮细胞的特征而获得成纤维细胞典型特点的变化过程。EMT在肾纤维化、肺纤维化研究较多,也有可能在肝纤维化时发生重要作用。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)被认为是肝脏中成纤维细胞的主要来源,而肝实质上皮细胞的肝细胞在肝纤维化过程中的病理生理作用一直被忽略。在肝纤维化过程中,很可能也伴随有肝细胞的间质变,即有EMT的发生。因此,如果从肝纤维化时可能发生EMT的多个环节探索其阻断措施及其对肝纤维化的影响,将有助于了解肝纤维化的发病机制以及EMT在肝纤维化诊断中的价值,为肝纤维化的病因研究和建立有效的预防控制措施提供依据。

辣椒素对前列腺癌细胞活性及上皮-间质转变进程的影响

目的探讨辣椒素对前列腺癌细胞活性及上皮-间质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程的影响。方法 MTT法检测辣椒素对前列腺癌细胞活力的影响;Hoechst法检测辣椒素对前列腺癌细胞凋亡的影响;无血清悬浮培养法富集前列腺癌干细胞样细胞球;显微镜下观察辣椒素对前列腺癌干细胞样细胞球大小和数量的影响;实时定量PCR法检测前列腺癌干细胞样细胞干细胞标志物、EMT相关标志物表达水平、辣椒素对前列腺癌干细胞样细胞EMT相关标志物表达水平的影响。结果 MTT法检测结果显示,辣椒素干预前列腺癌细胞72h,在1-10μmol/L范围,随着辣椒素浓度的升高,前列腺癌细胞活力显著下降,并具有一定的剂量依赖效应(P<0.05);Hoechst染色法检测结果显示,与对照组相比,辣椒素可诱导前列腺癌细胞凋亡的发生;无血清悬浮培养可有效富集前列腺癌干细胞样细胞球,细胞球干性标志物CD44、CD133与OCT-4 mRNA的表达显著上调,且E-cadherin mRNA表达显著下调,N-cadherin、Vimentin mRNA的表达上调(P<0.05);不同剂量辣椒素干预可显著抑制无血清悬浮培养形成的干细胞样细胞球的大小和数量,且辣椒素可显著上调E-cadherin mRNA的表达,下调N-cadherin、Vimentin mRNA的表达(P<0.05)。结论辣椒素可抑制前列腺癌细胞及其干细胞样细胞活性,且可能通过调控E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达抑制前列腺癌干细胞样细胞EMT进程。[营养学报,2020,42 (5):497-504]

胆汁淤积致肝内胆管上皮细胞间质表型转变的病理学分析

目的探讨胆汁性肝纤维化时胆管上皮细胞发生间质表型转变的特点。方法制作胆管结扎所致大鼠肝纤维化模型,利用HE染色、免疫组化和免疫荧光等方法,检测术后1周和2周时肝内胆管细胞的上皮和间质标志物的表达情况。结果大鼠胆管结扎后胆汁淤积,引起肝内汇管区胆管细胞显著增生以及围胆管成纤维细胞和纤维基质增加。免疫组化结果显示,假手术组和胆管结扎组大鼠胆管细胞均表达上皮细胞标志蛋白CK19,但胆管结扎组肝内胆管细胞也表达间质细胞标志物Vimentin和FSP1/S100A4。胆管结扎1周时,汇管区内新生小胆管呈Vimentin强阳性,2周时增生胆管周围许多细胞也呈Vimentin阳性。但两组大鼠胆管细胞均不表达肌成纤维细胞标志物α-SMA,α-SMA阳性细胞主要分布于汇管区胆管细胞周围。结论在胆汁性肝纤维化进程中胆管细胞增生并发生一定程度的上皮-间质表型转变,可能促进了肝纤维化的发生。

低氧微环境通过TGFBI调控Wnt/β-catenin通路介导胰腺癌化疗耐药及机制研究

目的:研究低氧微环境通过TGFBI调控胰腺癌耐药的作用及分子机制。方法:以CCK-8方法检测细胞增殖;以Western blotting技术检测蛋白表达水平;以ImageJ软件分析蛋白灰度值;RNAi技术用于敲减TGFBI基因。结果:TGFBI在Panc-1细胞中表达比正常细胞增强;低氧促进胰腺癌细胞Panc-1增殖并减弱顺铂对Panc-1的抑制作用,而高氧抑制Panc-1细胞增殖并加强顺铂的杀伤作用;低氧促进TGFBI表达及EMT行为;低氧通过TGFBI调控Panc-1细胞增殖及顺铂的杀伤作用;低氧通过TGFBI调控Wnt/β-catenin信号,进而促进EMT行为。结论:低氧微环境通过增强TGFBI表达促进胰腺癌细胞增殖及耐药;低氧微环境通过TGFBI激活Wnt/β-catenin信号通路,促进EMT标志分子表达。

在肿瘤治疗中靶向肿瘤干细胞:间充质干细胞的应用前景

骨髓间充质干细胞是人体干细胞的亚群,有多向分化的潜能。新的研究证据证明,变化内外微环境可以使骨髓间充质干细胞向肿瘤干细胞方向重编程导致肿瘤发生。肿瘤干细胞由于参与细胞迁移、侵袭,转移,抗药等。因此,靶向肿瘤干细胞对肿瘤的治疗提供一个新的方向。但是肿瘤干细胞的起源和它的分子连接还不是很清楚。在缺氧和炎症下,新研究的证据表明肿瘤干细胞和上皮-间质转变(EMT)的细胞表型之间的内在联系与miRNAs有同样的潜在机制。我们研究了肿瘤干细胞在EMT、炎症、缺氧时的特征可能对肿瘤干细胞的消除提供一个很好的治疗途径。

人视网膜色素上皮细胞脱分化模型的建立

目的建立人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞脱分化的模型,体外模拟增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)中RPE的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程。方法将ARPE-19细胞培养在无血清、含N2和NEAA的petri dish中,建立RPE的EMT模型,采用倒置荧光显微镜观察细胞形态的转变,采用基因芯片和定量PCR来检测EMT相关基因的表达,采用Western blotting和ELISA来检测相关蛋白的表达。结果 ARPE-19细胞在建模后形态明显发生了改变,基因芯片和Q-PCR检测显示一些与EM T相关的因子(如TGF-β1,Vimentin,CD46)及炎症因子(IL-15)和细胞因子(EGF)的表达上调,ELISA在蛋白水平上显示建模后细胞表达的TGF-β1,IL-15,和EGF蛋白明显增多,Western blotting显示Vimentin蛋白的表达也显著上调。结论 ARPE-19在N2和NEAA的petri dish中培养可以诱导EMT的发生。

Twist的研究进展

Tw ist蛋白是属于碱性的螺旋-环-螺旋蛋白家族中的高度保守的转录因子,在胚胎的发生发展中发挥重要作用。Tw ist被认为是癌基因蛋白,影响肿瘤细胞的凋亡。Tw ist作为上皮-间质转变(ep ithelial-m esenchym altransition,EMT)过程中的关键调控因子,对肿瘤的侵袭和转移有重要影响。

Twist基因在恶性肿瘤中的研究与进展

研究表明,人类恶性肿瘤的发生发展是细胞调控的癌基因、抑癌基因相互作用的结果,多基因变化导致细胞周期紊乱,从而引起细胞失控性生长。因此,近年来对于癌基因和抑癌基因的研究成为讨论肿瘤发生发展的热点。Twist就是近年来倍受关注的癌基因之一,因其参与肿瘤细胞的上皮-间质转变（epithelial-mesenchymal transition,EMT）过程,使肿瘤细胞能通过适应周围基质环境从而获得新的上皮特性,形成转移病灶,

Twist与肿瘤的关系研究进展

肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病,同时也是生命科学研究的热点。近年来的研究发现,Twist作为一种肿瘤基因,通过在许多肿瘤细胞中的过度表达,在抗细胞凋亡、肿瘤的多药耐药性、上皮-间质转变(EMT)、血管的发生和肿瘤的侵袭方面起到了非常重要的作用。此外,大量的研究证实,Twist在肿瘤的不同分期中表达有着明显差异。这些研究成果对肿瘤的诊断和治疗等具有重要的意义,本文就Twist与肿瘤的相关性作一综述。

胚胎发育基因Twist在宫颈癌中的研究进展

Twist基因是具有高度保守的转录因子，属于螺-环-螺（basichelix-loop—helix，bHLH）转录家族。已有研究发现，许多上皮性肿瘤细胞中Twist基因通常呈过度表达，在抗细胞凋亡、耐药性、上皮一间质转变（epithelial—mesenchymal transition，EMT）、肿瘤新生血管形成、肿瘤侵袭、转移起到了非常重要的作用。目前，国内外对宫颈癌中Twist的作用研究较少，其在宫颈癌发生、浸润、转移中的作用及其机制有待继续研究。现就Twist基因在宫颈癌的研究进展作一综述。

uPAR与肿瘤的研究新进展

尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase plasminogen activator receptor,uPAR)是一个糖基磷脂酰肌醇锚定的蛋白质,高亲和力结合并激活尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator,uPA),由此调节细胞表面蛋白水解活性。uPAR在几乎所有人类肿瘤中高表达,其高表达与增强肿瘤增殖、迁移、侵袭有关。本文对uPAR增强肿瘤趋向性、诱导上皮-间质转变与促进胞葬作用等新功能以及靶向uPAR治疗进展进行综述。