大鼠胚胎上胚层干细胞的分离培养研究

目的获取SD大鼠胚胎中附植后的胚胎上胚层干细胞(Epi SCs),并就影响SD大鼠Epi SCs(SDEpi SCs)分离与培养的组织来源、胎龄、细胞因子等条件进行探讨,从而探索适宜SD大鼠Epi SCs分离培养的实验体系,为下一步SD大鼠Epi SCs的建系提供实验研究基础。方法以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,分别取5.5日胎龄的囊胚和7.5日胎龄囊胚上胚层(Epiblast),用添加白血病抑制因子(LIF)或活化素(activin)的基础培养基进行原代培养,分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代培养。最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并检测其体外分化能力。结果培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化。培养于LIF培养基中的Epiblast也发生了严重的自发分化,而在activin培养基中,Epiblast形成SDEpi SCs原代集落。经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SDEpi SCs。结论利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.5日胎龄SD大鼠胚胎中获得SDEpi SCs。

SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

目的从SD大鼠胚胎中获取附植后胚胎上胚层干细胞(post-implantation epiblast stem cells,Episc),并探讨组织来源、胎龄、细胞因子、传代方法等条件对SD大鼠Episc(SD Episc)分离与培养的影响。方法分别取5.5d和7.75d胎龄囊胚上胚层(epiblast),以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养。分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代。最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并对其体外分化能力进行检测。结果培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化。培养于LIF的培养基中的epiblast也发生了严重的自发分化。而在activin培养基中,epiblast形成SD Episc原代集落。经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SD Episc。结论利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75d胎龄SD大鼠胚胎中获得SD Episc。

离体鸡胚胚盘外胚层对肿瘤组织的反应

胚胎诱导是胚胎发育与细胞分化过程中的一种复杂的生命现象,它涉及诱导者与被诱导者之间复杂的相互反应。反应者对于诱导者无种属或组织特异性。例如在两栖类,原肠胚外胚层除了对同期原肠盖前端有反应外[1],对于异源诱导,甚至对于某些肿瘤组织多少也有反应[2~7]。

鸡胚胚盘外胚层对诱导的反应能力的实验分析

将4期原结或原条小块(平均为0.3—0.4平方毫米)分别作卵内移植至5、6、7、8期胚盘的原结前区(预定头区),原结区及原条区(预定躯干区)等不同平面的左侧或右侧外胚层下,在手术后6—30小时内的不同间隔时间取材观察,分析外胚层反应能力的区域性差异及其与胚龄的关系。所得结果简述如下:1.鸡胚5、6、7、8期胚盘外胚层对原结或原条移植块的诱导呈现不同的反应状态。5—6期胚盘均有神经反应能力,形成分化程度不同的神经组织。7期胚盘除个别标本外,几乎完全丧失神经反应能力,8期胚盘已完全丧失神经反应能力,只出现外胚层板状增厚反应。表明随宿主胚龄的增高,外胚层的反应能力相应下降以至于全部丧失。2.神经反应能力终止于第6期末期或第6—7期之间。6期胚盘的前后区均仍有不同程度的神经反应能力,7期胚盘除原结前区(预定头区)外胚层似仍有微弱的反应外,已基本丧失神经反应能力。到8期早期,外胚层板状增厚反应能力亦告消失。3.胚盘外胚层对诱导的神经反应能力,随胚龄的增高而逐渐出现了区域性差异,5—6期胚盘预定头区外胚层的神经反应能力较高,向后有沿头—尾轴逐渐成梯度递减的趋向。胚盘左右侧外胚层的反应能力无显著差别。4.本文还就胚壁内胚层对原结诱导的可能反应予以讨论。

小白鼠胚胎肢芽尖端增厚外胚层及其邻近普通外胚层的电子显微镜观察

用小白鼠胚胎阴栓日龄11—13天的前肢芽和后肢芽,锇酸固定,甲基丙烯酸甲酯及甲基丙烯酸丁酯包埋,在SEMⅢ型电子显微镜观察了肢芽尖端增厚外胚层、邻近普通外胚层及间充质细胞。部分材料用过锰酸钾固定或锇酸固定后氢氧化铅染色。各种细胞相互比较的结果如下:1.两种外胚层的高尔基体极相似,均由小泡及小管组成,无大泡,横切时成为成群的小泡。普通外胚层细胞的高尔基体呈S形,增厚外胚层的马蹄形。2.线粒体在普通外胚层卵圆形或圆形,嵴不整齐。增厚外胚层的线粒体在浅层细胞少,结构与普通外胚层相似,但愈至深层则细长的线粒体愈多。细长线粒体的嵴较密,亦较整齐,与表面垂直,基貭亦较致密。在尖端增厚外层细胞见到由胞质新形成的小泡过渡到小圆的线粒体。3.无论在普通外胚层下或在尖端增厚外胚层下的间充质细胞,其线粒体的形状和结构相同,都是圆或卵圆,嵴少而靠近表面作半月状,内室大,基貭密度低,属比较原始的胚胎型。4.嗜碱质在两种外胚层及间充貭细胞均以弥散的核朊粒为主,由5—10余粒组成小群落。这些群落在尖端增厚外胚层较大、较密,粒亦较多。普通外胚层细胞的有粒内貭网或动貭较间充貭为多,二者均系胚胎型,是分散的小泡或小管。尖端增厚外胚层的动貭有独特形态,即池的一端扩张成大泡,内含网状致密物,显然含有较多的,要不是特异的蛋白貭。这种扩张动貭对于胚胎分化及诱导的关系曾加讨论。5.动质的形成有证据表明是先从核朊粒群落出现膜成为动貭小泡或小管,再并合成较大的小泡和较长的小管。6.增厚外胚层细胞的另一特点是比较普逼的存在着形状、大小及密度不同的致密体。有的完全致密,有的泡状,有的是二者的混合体,有的界限清楚,有的处于分散状态。在形态上类似溶酶体和卵子的多泡体。内含类似核朊粒的致密粒、退化线粒体及动质膜。这些致密体和细胞膜、核膜及高尔基体未显有何关系。基膜及细胞膜完好。未见增厚外胚层细胞有排出、吞食或饮液现象,亦未见致密体排至中胚层,故认为这些致密体起于胞貭。对于分化诱导关系曾提出讨论。7.细胞核及核膜在三种细胞未见有显著不同。核膜有孔,其外膜可与动貭膜相连,核仁小,紧靠核膜,未见有排出现象。氢氧化铅染色的标本有时显示染色貭有微丝,这在胞貭核朊粒群落亦可出现。8.细胞膜完整,比较直,膜的内侧有一层致密物貭,无桥粒。

多能干细胞制备方法的研究进展及问题

多能干细胞为研究疾病的分子机制、药物筛选及再生医学应用提供理想的细胞来源,然而,当前多能干细胞的来源或制备方法面临众多瓶颈和挑战,本文回顾了多能干细胞制备方法的最新研究进展,为多能干细胞的后续研究提供思路。

先天性部分痛觉缺失症1例报告

患者女,15岁。1983年11月9日因右踝关节慢性骨炎入院。患者于1978年5月7日右踝关节扭伤,畸形、肿胀但无疼痛。某医院拍片诊断“右踝关节骨折”。未经任何处理和固定,仍能行走,毫无疼痛。

成纤维细胞生长因子及其受体信号调节器官发生(一)

成纤维细胞生长因子(FGFs)的家族成员可能至少有23种(图1)。它通过结合受体(FGFR)将信号传递到靶细胞内。FGFRs 在细胞内有2个酪氨酸激酶(PTK)区域,通过细胞内的信号传导子的磷酸化来传递信息(图2)。FGFs 是多能信号分子,参与细胞增殖、分化和游走等功能,在胚胎器官发生中扮演十分重要的角色。本文就 FGFs 在胚胎或器官形成过程中新近解码的功能作用进行介绍。

Helq对干细胞多能性影响的研究

目的探讨Helq缺失是否影响干细胞的多能性。方法利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得Helq敲除的胚胎干细胞。结果免疫荧光染色结果显示敲除Helq后,Oct4及Nanog的表达与对照组相比无明显差异,通过四倍体补偿实验证明胚胎干细胞的多能性不受影响。同时我们利用Helq敲除的胚胎干细胞继续进行体外分化,最终可以得到Day2的上胚层样细胞。通过免疫染色及real-time PCR分析,结果表明Helq敲除的胚胎干细胞分化为上胚层细胞液无明显异常。结论 Helq缺失不影响多能性干细胞的多能性。

鸡胚表皮细胞连接的电镜观察

本文利用电镜观察了12～72小时及4～10天不同阶段的鸡胚表皮细胞连接的发生发育。孵育12～16小时的鸡胚外胚层细胞间不易见到细胞连接,偶可见短小的紧密连接和初期的桥粒。冷冻复型证实,20、24和36小时鸡胚表皮细胞间有密集的紧密连接和明显的缝隙连接。48小时以后桥粒明显发育,而紧密连接和缝隙连接逐渐缩小而后消失。72小时以后的鸡胚表皮细胞连接主要是桥粒,并可见到不同程度发育的桥粒。

Bilateral Ureteral Fibroepithelial Polyps:a Case Report

DRIMARY benign ureteral tumors are rare and they arise from the mesodermal tissue of the ureteral wall. Less than 200 cases have been docu- mented in published reports.1 Bilateral ureteralfibroepithelial polyps are extremely rare and commonly occur in the proximal ureter, causing complete ureteral obstruction. Pyeloplasty is an effective treatment for im- proving renal function. Here we report a case with se- quential bilateral ureteral fibroepithelial polyps causing obstructive hydronephrosis.

4.3毫米人胚的观察

本文记载一4.3毫米的人胚。绒毛膜囊为22×16毫米。体成C字形,尾弯曲,肢芽呈圆形。有四对咽囊,第四对十分小。奇结节于第一与第二鳃弓间的咽底部隆起。耳囊已闭合,呈椭圆形,与外胚层间的连接已完全消失。视囊尚未凹陷为视杯,晶体板未内凹。喉气管沟刚刚出现。心脏发育较为幼小,仍处于S形阶段,心房只有一个,居于动脉球的左方,静脉窦尚未完全脱离横隔。心房在近静脉窦部分,心内膜与心肌心外膜紧密相依。动脉弓共有四对,第一对在下颌内裂为毛细血管丛,其他三对在咽的背外侧通往背主动脉。左右二背主动脉大小不等,右大左小,二者并行向后,于胆囊区合为一主干。前大静脉,后大静脉,总大静脉及卵黄静脉均成对,对称排列。根据以上所描述的特征,该胚应属于Streeter horizon XIII胚龄组。

鸡胚胚盘不同区域对原结诱导的区域性反应

一、绪言Spemann[1]曾将蝾螈胚的躯干诱导者(晚期原口背唇)移植至宿主(早原肠胚)的预定头区诱导出头部结构。庄孝僡[2]利用新鲜的成体蝾螈肝和小鼠肾组织作为诱导物,移植至蝾螈原肠胚的不同平面区域(头区、心区、前躯干区和后躯干区)的腹侧面,并与离体外胚层诱导的外植实验进行对照比较,发现脑、眼、鼻等头部结构的出现率沿宿主的头尾轴方向递减,而前肾、肌肉等躯干结构则逐渐增加。

关于线粒体及动质来源的一些电子显微镜观察

在11天小白鼠胚胎肢芽尖端增厚外胚层细胞,经过1%锇酸Veronal缓冲液,pH7.6,固定,1%氢氧化铅染色的电子显微镜照相中显示在细胞貭基貭中,在核朊粒群落之间出现0.013—0.07μ的致密微体,中有纵纹,过渡到0.07—0.1μ的卵圆微体时已明显的呈綫粒体结构,中有嵴数条,长大0.13—0.20μ时和这一时期这种细胞的綫粒体完全相同了。用1.2%过锰酸钾固定的小白鼠19天胚胎的小肠绒毛上皮,有0.09μ的小泡过渡到显然是綫粒体结构,0.3—0.5μ的小体。成长的绒毛上皮綫粒体直径约为1μ。动貭的形成过程是弥散的核朊粒排成环状或双行的群落,就地出现膜而成有粒小泡和有粒小管,再扩大合并成为有粒内貭网或动貭。

干细胞多能性信号调控机制研究进展

多能性干细胞是一类具有体外无限自我复制和分化为体内多种细胞类型能力的多潜能细胞,是研究基因功能、建立疾病模型和促进再生医学领域发展的一种重要工具。自1981年小鼠胚胎干细胞建立以来,科学家们已经先后成功地建立了灵长类、人、大鼠的胚胎干细胞和小鼠、大鼠的上胚层干细胞等。但是,目前研究表明,维持人、灵长类胚胎干细胞的多能性信号通路与维持小鼠、大鼠胚胎干细胞的截然不同,而与维持小鼠、大鼠上胚层干细胞的信号通路比较类似。因此,该文对目前研究较多的维持小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞和小鼠上胚层干细胞的多能性信号通路进行了综述,希望能够对其它物种的多能性干细胞研究提供有益的借鉴。