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上西早生柿ETR5基因RNAi植物表达载体构建及遗传转化研究
被引量:
6
1
作者
于丛丛
马俊莲
+1 位作者
宋春丽
陈佳
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010年第1期84-87,共4页
据已测序的上西早生柿ETR5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase基因片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载...
据已测序的上西早生柿ETR5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase基因片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体pSMAK321的35S启动子和NOS终止子之间,构建成Uenishiwase-ETR5基因的RNA干扰植物表达载体。载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌EHA101中。以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200μmol/L的AS及Spc梯度筛选能有效提高转化率。转化植株经PCR检测得到7株阳性植株。
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关键词
上西早生柿
ETR5
RNAI
植物表达载体
转基因
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职称材料
上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究
被引量:
2
2
作者
刘艺
马俊莲
+2 位作者
张子德
唐霞
宋春丽
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期66-70,共5页
为了得到耐贮藏的转基因柿,以上西早生柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC氧化酶的RNAi遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的...
为了得到耐贮藏的转基因柿,以上西早生柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC氧化酶的RNAi遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的壮观霉素浓度为30 mg/L,预培养时间为3 d,用OD600值为0.3的菌液侵染10 min、AS浓度100 mg/L、共培养4 d有利于提高转化频率。经PCR分子检测与GUS组织化学染色,初步确定ACC氧化酶基因已转入上西早生柿组培苗中。
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关键词
上西早生柿
根癌农杆菌
ACC氧化酶基因(ACO)
遗传转化
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职称材料
题名
上西早生柿ETR5基因RNAi植物表达载体构建及遗传转化研究
被引量:
6
1
作者
于丛丛
马俊莲
宋春丽
陈佳
机构
河北农业大学食品科技学院
河北农业大学中兽医学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010年第1期84-87,共4页
基金
河北省自然科学基金项目(C2006000465)
文摘
据已测序的上西早生柿ETR5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase基因片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体pSMAK321的35S启动子和NOS终止子之间,构建成Uenishiwase-ETR5基因的RNA干扰植物表达载体。载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌EHA101中。以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200μmol/L的AS及Spc梯度筛选能有效提高转化率。转化植株经PCR检测得到7株阳性植株。
关键词
上西早生柿
ETR5
RNAI
植物表达载体
转基因
Keywords
Uenishiwase persimmon ETR5 RNA interference(RNAi) Plant expression vector Transformation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究
被引量:
2
2
作者
刘艺
马俊莲
张子德
唐霞
宋春丽
机构
河北农业大学食品科技学院
河北农业大学中兽医学院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期66-70,共5页
基金
河北省国际科技合作攻关项目(04395501D-3)
文摘
为了得到耐贮藏的转基因柿,以上西早生柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC氧化酶的RNAi遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的壮观霉素浓度为30 mg/L,预培养时间为3 d,用OD600值为0.3的菌液侵染10 min、AS浓度100 mg/L、共培养4 d有利于提高转化频率。经PCR分子检测与GUS组织化学染色,初步确定ACC氧化酶基因已转入上西早生柿组培苗中。
关键词
上西早生柿
根癌农杆菌
ACC氧化酶基因(ACO)
遗传转化
Keywords
Uenishiwase
Agrobacterium tumefaciens
ACC oxidase gene (ACO)
genetic trans-formation
分类号
S665.2 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
上西早生柿ETR5基因RNAi植物表达载体构建及遗传转化研究
于丛丛
马俊莲
宋春丽
陈佳
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010
6
下载PDF
职称材料
2
上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究
刘艺
马俊莲
张子德
唐霞
宋春丽
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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职称材料
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