上转发光技术快速检测尿液中氯胺酮

目的利用上转发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种可在现场快速定量检测尿液中氯胺酮（Ketamine,KET）的方法并对其进行系统评价。方法利用竞争法免疫层析原理,以上转发光材料（UCP）作为生物示踪物,建立快速检测尿液中KET含量的上转发光免疫层析定量检测方法（KET-UPT-LF）,并通过专用的便携UPT生物传感器分析进而计算出氯胺酮浓度。通过系列浓度标准品检测评价其敏感性、精密性及线性响应。收集经LC-MS鉴定的现场尿液样本,同时进行KET-UPT-LF及胶体金的检测,一方面通过与胶体金定性检测结果的比较来评价KET-UPT-LF对于实际尿液样本中KET的定性检测能力,另一方面通过与LC-MS的定量检测结果比较来评价KET-UPT-LF定量检测性能。结果通过对系列浓度标准品检测结果分析,KET-UPT-LF敏感性为93.75 ng/m L,线性范围为93.75~6 000 ng/m L（r=-0.99448,P〈0.0005）。在现场样品检测评价中,同一样本的KET-UPT-LF和胶体金结果在定性分析,其结果是一致的。KET-UPT-LF与定量确证方法 LC-MS的定量检测结果经t检验无显著差异。结论本研究建立的氯胺酮上转发光免疫层析定量检测方法（KET-UPT-LF）,在满足胶体金等快筛试剂快速简便的基础上,进一步实现了现场快速定量检测,且用户友好性优于LC-MS等定量确证方法,为现场快速定量检测尿液中的毒品提供了技术保障。

基于上转发光技术研发梅毒IgG抗体检测试剂的评价

目前梅毒仍是世界范围内的公共卫生问题[1],早期发现梅毒感染并给予及时治疗是控制梅毒传播的主要措施。目前梅毒的诊断主要依靠实验室检测,检测梅毒Ig G抗体的方法很多,如酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光（CLIA）法、梅毒Ig G抗体胶体金试纸、梅毒特异性抗体吸附实验（FTA-ABS）、梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）等。

基于上转发光技术的奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1快速定量检测方法研究

目的利用上转发光免疫层析技术（AFM1-UPT-LF）建立奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1的快速检测方法。方法以UCP颗粒作为标记物,无需样品前处理,采用竞争免疫反应建立AFM1-UPT-LF方法。以AFM1阴性的奶粉、牛奶配制系列浓度AFM1标准品,确定检测方法的灵敏度、特异性、标准曲线与定量范围、精密度、准确度及回收率,并对实际样品进行定性和定量检测评价。结果利用AFM1-UPT-LF可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量检测,20 min内即可完成。奶粉中检测下限可达0.1μg/kg,在0.1-0.7μg/kg间具有较好线性（r=-0.99359,P〈0.01）,牛奶中检测限为0.3μg/L,在0.3-0.7μg/L间具有较好线性（r=-0.99938,P〈0.05）。在定性检测中,对奶粉检测灵敏度为100%,特异性为85%,受试者工作特征（ROC）的曲线下面积（AUC）为0.978±0.036;牛奶检测中灵敏度为81%,特异性为88%,ROC的AUC为0.891±0.099;与LC-MS结果进行2检验,P值均大于0.05,两种方法差异无显著性意义。在定量检测评价中,AFM1-UPT-LF对于奶粉及牛奶中AFM1检测均具有较好回收率,与LC-MS比较差异无显著性意义（奶粉：t=0.66,P〉0.05;牛奶：t=1.01,P〉0.05）。结论利用UPT-LF所建立的AFM1-UPT-LF方法可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量快速检测,检出限满足国标限量标准要求;该法无需样品处理,操作简便,可满足食品安全中对现场快速检测的需求。

UPT-3A型上转发光免疫分析仪性能评价

目的通过肌钙蛋白I(c Tn I)、N末端脑利钠肽前体(NT-pro BNP)以及降钙素原(PCT)定量检测对UPT-3A型上转发光免疫分析仪进行性能评价。方法收集临床血清标本,通过测定c Tn I、NT-pro BNP、PCT三个项目,分别进行精密度、准确度、线性范围分析及对三个项目进行生物参考区间验证。结果该分析仪的精密度、准确度、线性范围、参考区间均在仪器的允许范围之内。结论 UPT-3A型上转发光免疫分析仪检测结果准确可靠,精密度好,线性良好,符合相应的参考区间。主要性能基本符合质量目标要求,能够满足现有临床需要。

基于上转发光免疫层析技术的鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌快速检测方法研究与对比评价

目的研制基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）检测鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸，与BioThreatAlert免疫层析（BTA）试纸的检测和操作性能进行对比。方法以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物，采用双抗体夹心模式分别研制检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的uPT．LF试纸。分别配制10^10、10^9、10^8、10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌标准品以及10^9CFU／ml系列浓度的27种特异性评价菌株菌液，采用UPT-LF试纸对其进行检测，对3种UPT-LF试纸的敏感性、精密性、线性和特异性进行分析评价。配制模拟阳性样品，分别采用uPT-LF和BTA试纸对10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的标准品以及模拟阳性样品进行检测，比较UPT-LF和BTA试纸的检测时间、敏感性以及鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的检出率。结果鼠疫菌UPT—LF、炭疽杆菌芽孢uPrr—LF、布鲁菌UPT-LF试纸的敏感性均达到10^5CFU／ml，各系列浓度检测带信号／质控带信号（T／C）值的变异系数均≤15％，lg[T／C值-临界值（cut—off值）]与lg（标准品浓度）的相关系数分别为0．996、0．998、0．999（F=1647．57、743．51、1822．17，P值均〈0．001）。鼠疫菌UPT-LF和布鲁菌UPT-LF试纸检测特异性评价菌株时，均无非特异性交叉反应，炭疽杆菌芽孢UPT—LF试纸检测枯草芽孢杆菌分离株2#芽孢、蜡样芽孢杆菌分离株1#芽孢存在非特异交叉反应，检测其他特异性评价菌株均无非特异性交叉反应。UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌样品的时间分别为33、36、37min，BTA为115、115、111min；UPT-LF和BTA试纸检测0CFU／ml标准品的阴性率均为5／5；UPT-LF试纸检测炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的敏感性均达到10^5CFU／ml，BTA试纸分别为10^6、10^6、10^5CFU／ml；模拟样品检测中，UPT-LF试纸炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的检出率均为16／16，BTA试纸分别为7／16、16／16、16／16。结论UPT—LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的敏感性较高，特异性、线性和精密性较佳，检测和操作性能较BTA试纸更为优良。

基于上转发光免疫层析技术快速定量检测类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立

目的建立能够对类鼻疽伯克霍尔德菌（类鼻疽菌）进行现场快速定量检测的上转发光免疫层析（Bps—UPT-LF）方法。方法以上转发光材料（UCP）作为标记物，采用双抗体夹心法制备用于类鼻疽菌检测的Bps—UPT—LF试纸。采用分别由类鼻疽菌及与其近缘或传播途径类似的菌株配制的系列浓度标准菌悬液，评价Bps—UPT—LF试纸条的敏感度、准确度、精密度及特异度等检测性能后，采用纯生物化学试剂和模拟样本分别对其进行单因素干扰因子和实际样品的耐受性评价，通过调整该方法的液体量取体积评价其对操作误差的耐受性。结果整个检测流程20min内可完成，Bps-UPT—LF试纸的敏感度达10^4CFU／ml，定量范围为10^4～10^7CFU／ml，跨越了4个数量级。浓度为10^7和10^8CFU／ml高浓度的类鼻疽菌近缘或传播途径近似菌株对检测特异度均无影响。Bps—UPT—LF试纸除能在高浓度的酸碱物质（pH 1～12）、盐（≤2mol／L的NaCl和KCl的混合物）、黏性物质（≤50g／L的聚乙二醇20000、≤20％的甘油）、生物基质（≥400g／L的牛血清白蛋白、≥80g/L的干酪素）等单因素样本的干扰下保证检测特异度及敏感度外，还能对浓度≥400g／L的奶粉、面粉、果珍、新鲜和腐败脏器以及浓度≤200g／L的腻子粉、蔗糖、味精和土壤等各种动物、环境、粉末之类的实际样本进行直接检测。-50％～200％的样品体积偏差、-22％-44％样品处理液体积偏差、-30％～30％的上样混合物体积偏差等操作误差对检测特异度和敏感度无影响。结论本研究建立的基于Bps—UPT—LF技术检测类鼻疽菌的方法从检测性能、耐受性等方面均可满足自然疫源地监测和生物反恐对类鼻疽菌进行现场快速定量检测的需求。

上转发光免疫层析技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体方法的建立

基于上转发光免疫层析(UPT-LF)技术,旨在建立UPT-LF快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法。采用间接法制备UPT-LF试纸条,通过共价偶联使二抗山羊抗猪IgG和上转发光纳米颗粒(UCP)结合,并加入样品垫和被检血清结合,以旋毛虫肌幼虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因(WM5)表达的蛋白WM5为猪抗旋毛虫IgG特异性结合抗原,WM5(2 g/L)与兔抗山羊IgG(0.5 g/L)喷点于分析膜上作为UPT-LF试纸条检测带(T)与质控带(C),该试纸条命名为Tsp-UPT-LF。Tsp-UPT-LF通过对95份阴性血清检测,确定Tsp-UPT-LF的Cutoff值为0.099。Tsp-UPT-LF和ELISA分别对273份旋毛虫感染猪血清样本进行检测,总符合率为92.31%,一致性系数Kappa(K)值为0.837,表明两种方法具有高度一致性。Tsp-UPT-LF检测旋毛虫、猪囊虫、华支睾吸虫感染的猪血清Tsp-UPT-LF呈现对旋毛虫良好的特异性。Tsp-UPT-LF检测感染50 000条旋毛虫肌幼虫28 d猪血清为阳性,T/C值0.109,122 d阳性最强,T/C值为0.207,至425 d时阳性值有所下降,抗旋毛虫IgG阳性率为71.4%。本研究建立了基于UPT-LF技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法,为猪旋毛虫即时感染检测、确保食品安全提供了一种可参考的检测方法。

基于上转发光免疫层析技术快速检测单核细胞增生李斯特菌

目的建立可快速检测单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）的上转发光免疫层析技术（up-converting phosphor technology based lateral flow assay,UPT-LF）,即LM-UPT-LF。方法针对LM特异的p60蛋白制备单克隆抗体,并与上转发光纳米颗粒（up-converting phosphor nanoparticles,UCP-NPs）共价偶联作为结合物,采用双抗体夹心免疫层析模式建立LM-UPT-LF,并对其敏感性与特异性进行评价。结果建立了可快速检测LM的LM-UPT-LF平台,在样本〈10 cfu、10~99 cfu、100~1000 cfu绝对LM污染量条件下可分别在培养20、18、16 h检出阳性。其他13种食源性致病菌在高浓度（109cfu/ml）时无非特异性交叉。结论所建立的LM-UPT-LF操作简便快速,具有良好的敏感性和特异性,适用于一线病原调查与检测。

上转发光层析技术及其在生物医学检测领域中的应用进展

上转发光层析技术是近年来研究较多的一种较新型的临床诊断与检测技术,可满足多种环境条件下的检测要求。独特的上转发光特性使该技术具备稳定性更强、敏感度更高等多种优势。目前,上转发光层析技术已在临床检测领域具有部分应用,随着此技术的不断发展与成熟,具备走向家庭及资源有限环境应用的趋势。本文综述了上转发光技术的原理及在生物医学检测领域的应用现状。

上转发光免疫层析法定量检测乙型肝炎病毒外膜大蛋白的临床价值研究

目的评价上转发光免疫层析法定量检测乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV—LP）在乙型肝炎患者中的应用价值。方法利用一种新的基于上转发光法的免疫层析检测技术（UPT）检测500份乙肝病毒感染患者血清样品HBV．LP含量，并采用实时荧光定量PCR法检测HBVDNA；化学发光法检测乙肝五项指标。结果500例乙肝病毒感染患者HBV-LP与HBVDNA阳性率分别为58．0％和42．2％，两者间差异有统计学意义（P〈0．01），其中215份HBeAg阴性患者血清中，HBVDNA与HBV—LP的阳性率分别为29．3％和37．2％，两者差异无统计学意义（P〉0．05）；HBeAg阳性检出率为57．0％，与HBVDNA阳性检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论上转发光免疫层析法检测乙肝病毒外膜大蛋白对HBeAg阴性和HBVDNA低拷贝患者体内病毒复制及预后评价有重要价值，联合检测HBVDNA、HBV—LP和HBeAg有利于乙肝病毒复制水平的判断和抗病毒治疗终点的确定。

一例腺鼠疫患者血清F1抗体谱的检测分析

鼠疫具有发病急、传染快、病死率高等特点,呈世界性分布。对鼠疫感染患者的抗体时间谱进行分析,一方面可以为基于血清型的快速检测提供检测介入点的时间参考,另一方面为疫苗免疫效果的评价提供参照。1974年,WHO将基于鼠疫F1抗原的间接血凝试验（IHA）作为鼠疫诊断的常规方法,随着血清学技术的不断更新,尤其是标记技术的发展,如胶体金、ELISA等方法已逐步用于鼠疫辅助诊断。