应用上转磷光免疫层析技术快速定量检测炭疽芽孢

目的建立上转磷光免疫层析技术快速定量检测炭疽芽孢。方法利用上转磷光检测技术和免疫层析技术(双抗体夹心法),建立检测炭疽芽孢的快速检测方法,对该方法的特异性、敏感性进行评价,在面粉、淀粉等材料中掺入炭疽芽孢模拟“白色粉末”,评价该法检测炭疽芽孢生物恐怖和环境样品的可行性,拟合检测曲线进行定量研究。结果该法可在30 min内完成定性检测,多种芽孢菌及其他病原菌评价显示该法特异性良好,检测灵敏性为104芽孢,模拟“白色粉末”的样品检测敏感性也相同,盲法考核,该法定性、定量结果较好。结论建立的检测炭疽芽孢杆菌的上转磷光免疫层析方法,能快速、特异、灵敏地检测炭疽芽孢,适用于现场快速检测。

基于上转磷光颗粒的AFP免疫层析定量检测

目的:建立了上转磷光免疫层析快速定量检测AFP的方法,用于原发性肝癌的诊断。方法:利用上转磷光标记的双抗夹心免疫层析技术检测血清中AFP的含量。将AFP单克隆抗体分别标记上转磷光颗粒并包被硝酸纤维膜,制成免疫层析检测试纸。评价该试纸的灵敏度、特异性和精密度。并通过临床50例血清样本,探讨上转磷光技术与化学发光检测方法的一致性。结果:该方法能在20min内完成,检测灵敏度达5ng/ml。浓度范围从5-1000ng/ml作标准曲线,呈现较好的线性。通过三组平行实验探讨其精密度,变异系数都在10%以内。应用于其它肿瘤标志物如CEA、CA199、AFU和NSE的检测,无交叉反应。与化学发光相比,决定系数R2=0.9692,一致性较好。结论:该方法简便、快速、廉价,可以实现定量,尤其适合基层门诊和体检现场使用。

2种免疫层析技术用于4种传染病及其病原体检测的研究

[目的]寻求能够快速定性／定量检测4种传染病及其病原体的试验方法。[方法]应用双抗体夹心法，建立胶体金免疫层析法、上转磷光（UCP）免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢（以下简称炭疽芽孢）、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157：H7（以下简称EHEC O157），评价方法的灵敏性、特异性。通过分别检测模拟掺入3种菌／芽孢的“白色粉末”和检测3种细菌的强毒株，评价在实际环境样品检测中的应用。应用双抗原夹心法，建立胶体金免疫层析法、上转磷光（UCP）免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体，检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1236份新疆鼠疫疫源地鼠血清，检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清，以及206份出入境健康人员血清，考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用。通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O157以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法，比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力。[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测，炭疽芽孢检测掺入“白色粉末”的样品灵敏性为1×10^4cfu／test，炭疽芽孢最低检测限为1×10^5cfu／ml（原溶液芽孢浓度），多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好，仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应，特异性为97％；鼠疫杆菌检测灵敏性为5×10^4cfu／ml，最低检测菌数为5×10^3cfu／test，在10^7cfu／ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应，包括最近缘假结核耶尔森菌；EHEC O157检测灵敏性为1×10^3cfu／ml，仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应，特异性为98％。胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测，炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157检测灵敏度分别为1×10^6cfu／ml、1×10^5cfu／ml、1×10^5cfu／ml，“白色粉末”等环境样品最低可检测敏感性为1×10^5cfu，1×10^4cfu，1×10^4cfu／test。胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测，检测限为5×10^4cfu／test和7×10^4cfu／test。在实际血清样品检测中，与间接血凝方法对比，鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性。血清样品检测显示，SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性。[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点：上转磷光免疫层析方法可实现定量检测，敏感性优于胶体金免疫层析法；炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当；胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点。2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查。

5种方法筛查入境旱獭皮携带鼠疫菌的对比分析

目的采用5种检测方法筛查入境旱獭皮携带鼠疫情况,通过阳性检出率比较5种方法在旱獭皮携带鼠疫菌检测中的的敏感性,从而找出适合口岸入境旱獭皮鼠疫菌快速检测的方法,并根据检测结果对入境旱獭皮进行评估,提出检疫建议。方法细菌学培养、反向间接血球凝集试验(RIHA)、胶体金快速试验、上转磷光免疫层析试验(UPT)和聚合酶链反应(PCR)。结果细菌学培养和胶体金试验阳性率均为0,RIHA阳性率为0.74%,UPT阳性率为0.56%,PCR阳性率为0.87%;PCR、RIHA检测方法检出率较高,UPT检出率较低。结论在部分陈旧性旱獭皮中携带有鼠疫菌抗原成分,目前尚不能排除新鲜旱獭皮携带鼠疫菌的可能性,因此对入境旱獭皮需要实施必要的消毒、熏蒸等卫生检疫处理措施。