小鼠的下丘脑室旁核向前包钦格复合体直接投射参与调控呼吸

目的 探究小鼠全脑呼吸相关核团的空间分布,以及下丘脑室旁核(paraventricular hypothalamic nucleus, PVN)与前包钦格复合体(preB9tzinger complex, preB9tC)之间的环路连接及投射关系。方法 运用从外周到中枢逆行示踪的研究策略,在小鼠的膈肌微量注射伪狂犬病毒(pseudorabies virus, PRV),逆行标记脊髓呼吸膈运动神经元的上游输入脑区。在PVN微量注射顺行不跨突触病毒(AAV2/9-EGFP),标记PVN下游脑区;并利用Cre/loxP基因表达策略,在PVN及preB9tC分别注射Dio-EGFP及Retro-Cre病毒,验证PVN-preB9tC环路及二者之间的投射关系。结果 PRV介导的逆行示踪结果显示:被PRV-EGFP标记的阳性神经元分布在PVN、preB9tC、孤束核(nucleus tractus solitarii, NTS)、蓝斑(locus coeruleus, LC)和中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray, PAG)等多个脑区,除延髓区域外,PVN脑区的PRV-EGFP阳性神经元占比最高(P<0.000 1)。在PVN注射AAV2/9-EGFP,经病毒感染后在preB9tC脑区可见绿色神经纤维。在PVN和preB9tC分别注射Dio-EGFP及Retro-Cre病毒,经病毒感染后PVN脑区可见绿色神经元胞体。结论 PVN是脊髓呼吸膈运动神经元上游重要的输入核团,并有可能通过PVN-preB9tC环路的直接投射调控呼吸。

下丘脑室旁核微量注射谷氨酸对心力衰竭大鼠心功能的影响及机制

目的 探讨下丘脑室旁核(PVN)微量注射谷氨酸(Glu)对心力衰竭(HF)大鼠心功能的影响及机制研究。方法 清洁级SD大鼠随机分为假手术(Sham)+人工脑脊液(ACSF)组、HF+ACSF组、HF+Glu组,麻醉状态下用细线结扎左冠状动脉前降支成功建立HF动物模型后下丘脑PVN微量灌注Glu,灌流4 w检测心功能、血浆利钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和下丘脑PVN miR-132的表达。结果 HF+Glu组、HF+ACSF组心功能各项指标除心率(HR)外,心肌肥厚指标与Sham+ACSF组相比差异明显(均P<0.05),HF+Glu组HR与HF+ACSF组比较有显著差异(P<0.05)。结论 下丘脑PVN Glu可通过影响下丘脑PVN miR-132的表达加速心功能损害和HF进程。

下丘脑室旁核调控心血管活动的研究进展

随着中国步入老龄化社会的进程逐渐加快,各种心血管疾病(包括慢性心力衰竭、心肌梗死和高血压等)的发病率逐年上升,目前还缺乏有效的预防手段。越来越多的研究发现,中枢神经系统与心血管生理机能的调控有密不可分的交互作用,其中下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)中神经元和多种细胞因子参与调控心血管活动,是心血管活动的关键性调节中枢。本文旨在归纳和总结近年来PVN在调控心血管活动中作用及机制的研究进展。

下丘脑室旁核miR-132对心力衰竭大鼠外周交感神经兴奋性的影响

目的观察下丘脑室旁核(PVN)灌注miR-132特异抑制剂对心力衰竭(HF)大鼠外周交感神经兴奋性、下丘脑谷氨酸(Glu)含量及心脏功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照(Ctrl)+人工脑脊液(ACSF)组、HF+ACSF组、HF+miR-132抑制剂组。结扎心脏左冠状动脉前降支制造HF动物模型,HF+miR-132抑制剂组侧脑室插管向PVN内灌注miR-132特异抑制剂,Ctrl+ACSF组和HF+ACSF组灌注等量ACSF,灌注后4 w进行心脏功能指标检测;镜下观察心肌结构变化;检测肾脏交感神经放电(RSNA)、HF标志物脑钠肽(BNP)和外周交感神经兴奋标志物去甲肾上腺素(NE)在血浆中的含量;检测Glu在下丘脑PVN的含量。结果与Ctrl+ACSF组相比,HF+ACSF组心功能指标恶化、外周交感神经兴奋性增强、下丘脑PVN Glu含量升高、心肌组织病理改变明显(P<0.05);HF+miR-132抑制剂组与HF+ACSF组比较,HF大鼠上述检测指标均显著改善(P<0.05)。结论下丘脑PVN miR-132可影响HF大鼠的外周交感神经兴奋性和心脏功能。

下丘脑室旁核血管紧张素Ⅱ1型受体-Toll样受体4信号介导高血压的研究进展

高血压作为全球公共卫生的一大挑战,尽管其治疗和预防策略随着医学的深入探索而不断发展,但高血压的发病率仍呈上升趋势,且依然是全球范围内的医疗负担。近年来,人们逐渐将治疗措施转向对交感神经的干预。现聚焦于下丘脑室旁核血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_(1)R)-Toll样受体4(TLR4)信号介导高血压的新进展,将近来对下丘脑室旁核AT_(1)R-TLR4信号介导高血压形成的研究进行汇总和回顾分析,以期为日后高血压的研究和治疗方案提供新思路。

电针内关穴后下丘脑室旁核、β-内啡肽及白细胞介素1的变化

目的:观察电针刺内关穴后下丘脑室旁核及该区β-内啡肽、白细胞介素1的变化。方法:实验于2004-06于湖北中医学院针灸实验室完成。选取8～12月龄大耳白家兔56只,雌雄各半。随机分为急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血组、下丘脑室旁核损毁模型组、急性心肌缺血模型组、正常组,共7组,每组8只。采用左冠状动脉前降支结扎法制备家兔急性心肌缺血模型,观察电针内关穴对心电图ST段电位的影响;同时观察下丘脑室旁核电解损毁预处理对心电图ST段电位的影响;并且通过免疫组化方法观察室旁核内β-内啡肽、白细胞介素1表达变化。结果:①急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组ST段回复的时程及幅度显著快于下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血组(P<0.05)。急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组又优于下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组(P<0.05),下丘脑室旁核电解损毁导致家兔出现一过性轻度心肌缺血,下丘脑室旁核预先电解损毁显著降低电针内关穴抗急性心肌缺血损伤效应。②急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组、急性心肌缺血模型组β-内啡肽、白细胞介素1蛋白表达阳性率与正常组比较,差异显著(P<0.05～0.01)。结论:①电针内关穴能显著降低实验性急性心肌缺血家兔心电图ST电位,抗急性心肌缺血损伤。②下丘脑室旁核参与内关-心脏相关的中枢通路,损毁室旁核会在一定程度上显著降低电针内关穴抗急性心肌缺血的效应,室旁核内β-内啡肽、白细胞介素1可能参是电针内关作用的中枢效应物质。

杏仁中央核在下丘脑室旁核心血管反应中的作用

目的:阐明下丘脑室旁核(the paraventricu lar nucleus of hypothalam us,PVN)兴奋后的心血管反应及杏仁中央核(the central nucleus of am ygdala,CeA)在此心血管反应中的地位。方法:电刺激SD大鼠中枢核团PVN或CeA,或用核团内微量注射0.5 m o l/L L-谷氨酸(L-Sod iumG lutam ate,L-G lu)方法。同时记录大鼠股动脉血压、平均动脉压(m ean arterial pressure,MAP)、心电图及心率(heart rate,HR)。结果:电刺激一侧PVN后,MAP升高,HR变化不一,以下降为主。大鼠PVN电刺激或微量注射L-G lu均诱发升压反应,心率变化不一。待作用消失后,同侧CeA微量注射L-G lu100n l,注射后平均动脉压上升(10.27±1.80)mmHg,心率变化为(-10.66±8.11)次/m in。待作用消失后,在CeA微量注射0.02 m o l/L的红藻氨酸(KA)100 n l,10 m in后刺激PVN,血压升高(13.78±3.18)mmHg,较注射KA前削弱了(6.57±1.56)mmHg(P<0.05)。结论:PVN兴奋后引起以升压效应为主的心血管反应。杏仁中央核部分介导了其升压反应。

大鼠室旁核大细胞电生理学特征的衰老性变化——逆向鉴定指标的改变

目的 研究下丘脑室旁核 (PVT)大细胞逆向动作电位 (AP) 3指标的增龄性变化 ,为中枢神经系统的衰老性变化提供电生理学依据。方法 应用神经垂体逆向电刺激 ,于 PVN内进行玻璃微电极细胞外记录逆向 AP的方法 ,观察青、中、老 3组大鼠逆向 AP的阈值、潜伏期及跟随率的变化。结果 在中年及老年组大鼠上诱发逆向 AP的阈值高于青年组大鼠 (P<0 .0 5) ;老年大鼠逆向 AP阈值<0 .5 m A的神经元比例少于青年组大鼠 (P<0 .0 5) ;老年大鼠逆向 AP潜伏期较青年鼠延长 (P<0 .0 1 ) ;老年大鼠与青年大鼠逆向 AP对高频刺激的跟随能力存在差别。结论 老年大鼠 PVN大细胞兴奋性降低 ,纤维传导速度减慢 ,兴奋后不应期延长 。

糖尿病诱导的小鼠室旁核催产素和加压素阳性神经元FOS表达

目的:探索糖尿病(DM)不同状态下小鼠下丘脑室旁核(PVN)催产素和加压素阳性神经元的FOS表达变化。方法:腹腔注射溶媒或链脲佐菌素(STZ)制备对照组或糖尿病小鼠模型,根据机械痛测试区分糖尿病痛(DNP组)与非痛组(DWP组)。采用免疫组化和免疫荧光染色技术检测PVN内FOS、催产素(OXT)和加压素(VP)阳性神经元的分布及双标情况,并进行计数和比较。结果:7 d时三组(Control组、DNP组和DWP组)小鼠PVN内均有较多的FOS表达,而28 d时DWP和DNP组FOS的表达几近于无,与7 d组相比差异显著(P<0.05或0.001)。与对照组相比,DNP组和DWP组动物的VP和OXT荧光染色同样存在随着造模时间延长染色强度减弱的趋势(P<0.05)。VP、OXT与FOS的双标染色计数结果显示,在DWP 7 d组,VP/FOS双标细胞数为74.33±22.10,占VP阳性细胞数的(56.64±7.52)%,而OXT/FOS的双标率则仅为(10.44±3.14)%。在DNP 7 d组,OXT/FOS双标细胞数为51.00±31.80,占OXT阳性细胞数的(18.50±9.51)%,而VP/FOS的双标率仅为(9.34±3.27)%。与此相对,28 d组FOS的表达锐减,几乎无双标细胞。结论:下丘脑PVN内的VP和OXT阳性神经元在糖尿病痛与非痛,疾病发展的不同阶段存在明显不同的可塑性变化特点,理解这些变化对于揭示糖尿病及其并发症的神经机制具有重要意义。

针刺胃扩张模型大鼠内关、足三里等穴位下丘脑室旁核相关神经元的反应

背景:既往有关针刺对胃功能调节的神经机制研究多以外周神经为主,涉及中枢,尤其是高位中枢的研究较少。目的:探讨针刺"内关"、"足三里"等穴位对下丘脑室旁核胃相关神经元作用的影响。方法:运用微电极细胞外记录技术,在大鼠胃扩张的基础上,找出室旁核胃相关神经元,予以手针刺激"内关"、"足三里"等穴位各30 s,观察其对室旁核胃相关神经元的影响。结果与结论:60只大鼠共记录到109个下丘脑室旁核神经元放电,109个下丘脑室旁核神经元中与胃扩张相关的神经元有56个,56个胃扩张相关神经元中,对针刺足三里、内关、脾俞、胃俞有反应的神经元个数分别是44,47,29,33,有反应的神经元出现的比例分别是78.57%,83.47%,51.79%,58.93%。结果表明下丘脑室旁核中存在同时对胃扩张刺激和针刺刺激起反应的躯体内脏汇聚神经元,且参与针刺对胃功能的调节作用。

针刺大鼠“肾俞”穴诱导c-fos原癌基因在下丘脑室旁核中的表达

采用免疫细胞化学 ＡＢＣ法，探讨了手针和电针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的 ｃ－ｆｏｓ在ＰＶＮ中的表达，为探讨ＰＶＮ与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学证据。结果表明：ＰＶＮ中ＦＬＮ密度值组间、组内差异显著（ Ｐ＜ ０． ０１），电针组＞手针组＞对照组＞空白组；电针组同侧＞对侧，手针组对侧＞同侧；电针组同侧＞电针组对叙侧＞手针组对侧＞手针组同侧。提示：① ＰＶＮ参与了“肾俞”穴的针刺效应过程；②其参与作用程度因刺激方法和量的不同而不同；③ＰＶＮ对不同或相同方法刺激“肾俞”穴的这种反应上的差异，可能是导致其针刺效应方法间差异和同一方法同、对侧差异的重要环节之一。

5-羟色胺对大鼠下丘脑脑薄片室旁核神经元自发电活动的作用

在20个下丘脑脑片上,用玻璃微电极细胞外记录了46个室旁核神经元的自发放电单位,观察了5-羟色胺对它们的作用。当薄片用含5-羟色胺(10^(-6)mol/L)的人工脑脊液灌流后,有16个单位放电频率明显增加,反应的潜伏期为1.21±1.21 min。这种反应可被5-羟色胺的阻断剂噻庚啶所阻断。3个单位放电频率明显减少,27个单位无明显反应。实验结果表明约1/3的下丘脑室旁核神经元能被5-羟色胺所激活。

帕罗西汀对心理应激大鼠下丘脑室旁核c-fos表达的影响

目的:观察帕罗西汀对心理应激大鼠下丘脑c fos表达的影响,以揭示帕罗西汀治疗心理应激引起焦虑的分子作用机制。方法:建立大鼠心理应激模型,观察抗焦虑药物帕罗西汀用药组大鼠血浆皮质醇和下丘脑c fos的表达。结果:与正常对照组比较,各应激组大鼠血浆皮质醇含量明显升高,下丘脑室旁核c fos表达显著增加,而帕罗西汀单次、连续给药能减少应激大鼠血浆皮质醇含量和下丘脑室旁核c fos表达。结论:帕罗西汀通过抑制c fos基因表达,下调下丘脑垂体肾上腺轴(HPA轴)水平,从而发挥中枢应激调节作用。

电刺激大鼠下丘脑室旁核对胃缺血-再灌注损伤的影响

采用夹闭大鼠腹腔动脉 30min ,松开动脉夹血流复灌 1h的胃缺血 再灌注损伤模型 ,观察了电刺激和电损毁下丘脑室旁核 (paraventricularnucleus,PVN)对大鼠胃缺血 再灌注损伤 (gastricischemia reperfusioninjury ,GI RI)的影响 ,并对其作用机制进行了初步探讨。结果表明 :电刺激PVN后GI RI显著减轻 ,且有强度 效应依赖关系 ;PVN内注射胞体兴奋剂L 谷氨酸后 ,与电刺激PVN的效应相同 ;电解损毁双侧PVN则能加重GI RI;电刺激PVN能显著降低GI RI大鼠的胃粘膜丙二醛 (MDA)含量及胃液酸度和胃蛋白酶活性 ,但对其超氧化物歧化酶 (SOD)的活性及胃液量、总酸排出量、胃壁结合粘液量无显著影响。提示PVN对GI RI具有保护作用 ,其作用机制可能与降低GI RI大鼠的胃粘膜MDA含量、胃蛋白酶活性、胃液酸度有关 ,而与胃液量、总酸排出量、胃壁结合粘液量等因素无明显关系。

下丘脑室旁核神经元多重神经支配的电镜研究

为了探讨下丘脑神经内分泌的突触调控机制，本文用电镜细胞化学与免疫电镜双标技术相结合的方法，研究了大鼠下丘脑室旁核神经元的多重神经支配。即先用６－ＯＨＤＡ损毁ＣＡ能神经末梢，再于振动切片上用包埋前免疫电镜法，分别以ＤＡＢ和ＴＡＢ为呈色剂先后对肽能（ＯＴ或ＳＰ）神经元和ＧＡＢＡ神经元进行双重标记。电镜观察结果表明：在下丘脑室旁核内存在肽能（ＯＴ、ＳＰ）和氨基酸（ＧＡＢＡ）能神经元及ＣＡ神经末梢；ＯＴ神经元通过轴一树突触接受ＧＡＢＡ和ＣＡ神经支配；ＳＰ神经元通过轴－树突触接受ＣＡ和ＳＰ神经支配；ＧＡＢＡ神经元则可通过轴－树突触接受ＯＴ、ＳＰ、ＣＡ和ＧＡＢＡ等神经支配。本研究首次得到了下丘脑神经元接受多重神经支配的超微结构证据，其意义在于为同时研究下丘脑神经内分泌活动的多种突触调控提供形态学依据。

电针刺激大鼠“肾俞”穴对下丘脑室旁核功能状态的影响

目的：为探讨ＰＶＮ 与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学证据。方法：以大鼠为对象，采用免疫细胞化学ＡＢＣ法，探讨电针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的ｃ－ｆｏｓ 在ＰＶＮ 中的表达。结果：ＰＶＮ中ＦＬＮ 密度值组间、组内差异显著（Ｐ＜ ０．０１），电针组＞ 对照组＞ 空白组；电针组同侧＞ 对侧。结论：电针刺激右“肾俞”穴，对ＰＶＮ神经元具有激活作用；ＰＶＮ神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的同、对侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应两侧差异的重要环节之一。

电针“内关”穴抗心肌缺血损伤中下丘脑室旁核内阿片肽的作用

目的探讨电针“内关”穴抗心肌缺血损伤的作用机理。方法取清洁级日本大耳白兔40只,按随机数字表法分为模型对照组10只;纳络酮对照组10只;电针加脑脊液组10只;电针加纳络酮组10只。观察下丘脑室旁核(PVN)微量注射纳络酮后电针“内关”穴对心肌缺血家兔心肌超微结构、Ⅱ导联心电图及心肌细胞跨膜电位的影响。结果PVN纳络酮微量注射对正常家兔心肌功能无影响,对缺血心肌功能影响轻微,在结扎(缺血)60min时发挥一定的保护作用(P<0·05);电针“内关”穴对缺血心肌有明显的保护作用,该作用可被PVN注射纳络酮所削弱(P<0·05),但不能完全阻断。结论(1)PVN在电针“内关”穴抗心肌缺血效应过程中发挥了重要作用;(2)PVN内阿片肽参与介导了“内关”穴抗心肌缺血的针刺效应;(3)除PVN及其内阿片肽外,PVN内的其他递质和中枢其他核团也可能在电针“内关”穴抗心肌缺血效应中发挥作用。

下丘脑室旁核加压素能神经元参与电针刺激对实验性内脏痛的抑制

本实验采用内脏痛的实验模型,探讨室旁核中的加压素在针刺抑制内脏痛中的作用。实验结果如下:(1)大鼠在在射酒石酸锑钾(0.1％,10ml/kg,i.p.)后,出现可定量的扭体反应,能作为观察内脏痛的客观指标。(2)电针对内脏痛有抑制效应,即具有镇痛作用。(3)电刺激室旁核,能加强电针对内脏痛的抑制效应,损毁室旁核,则此抑制效应基本消失。(4)脑室注射加压素抗血清(14μl)或加压素拮抗剂[d(CH_2)_5Tyr(Me)-AVP,500ng/5μl]都能明显减弱电针的抑制效应。(5)腹腔注射加压素拮抗剂(10μg/kg),不能翻转电针的抑制效应。上述实验结果表明,下丘脑室旁核的加压素能神经元参与了电针刺激对实验性内脏痛的抑制。

脊髓横断后下丘脑室旁核和视上核Fos表达的观察

目的:观察不同节段脊髓横断后引起下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)Fos表达,以初步探讨急性脊髓损伤引起脑内心血管调节核团反应的机制。方法:脊髓C4、T4、T12横断术后3h,用免疫组织化学方法观察PVN、SON内Fos表达。结果:PVN内Fos阳性神经元数目在C4组最高,T4组次之,T12组最低;SON内,各组间Fos阳性神经元数目差异无显著性。结论:急性脊髓损伤可引起PVN、SON神经元产生特异性反应,但两者发生反应的机制不同。

大鼠延髓至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

用ＨＲＰ注入下丘脑室旁核逆行追踪与抗Ｆｏｓ和抗酪氨酸羟化酶（ＴＨ）双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元对胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察，发现孤束核和延髓腹外侧区有７种不同的标记细胞：ＨＲＰ、Ｆｏｓ、ＴＨ单标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。上述７种标记细胞主要分布在延髓中、尾段孤束核的内侧亚核、连合亚核和延髓腹外侧区以及两者之间的网状结构。ＨＲＰ标记细胞以注射侧为主，对侧有少量分布。本文结果证明，大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核投射的部分儿茶酚胺能神经元可能参与胃伤害性刺激的传导和调控。