神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的观察神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平。MLN4924 0.5μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76μmol·L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少（P〈0.01）,表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少。MLN4924 0.5,1.0和2.0μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的（61.3±1.3）%分别升高到（64.5±1.5）%（P〈0.05）,（69.5±2.3）%（P〈0.01）和（72.8±1.7）%（P〈0.01）,细胞凋亡率由正常对照组的（1.5±0.3）%分别升高到（2.3±0.5）%,（4.3±0.9）%（P〈0.05）和（7.5±0.8）%（P〈0.01）。结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡。

抑制神经前体细胞表达下调因子8对前列腺癌细胞生物学行为及其雄激素受体表达的影响

目的 慢病毒介导短发卡RNA（shRNA）靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP 细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）的表达,观察其对雄激素受体（AR）、前列腺特异性抗原（PSA）的表达以及细胞生物学行为的影响.方法 构建NEDD8短发夹RNA（NEDD8-shRNA）稳定转染的LnCaP、VCaP 细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达.细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、TranswellTM 实验检测细胞侵袭能力.结果 NEDD8-shRNA慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的（0.11±0.03）、（0.16±0.04）倍,AR mRNA表达量分别为（0.52±0.04）、（0.42±0.05）倍,PSA mRNA的表达量分别为（0.49±0.04）、（0.59±0.06）倍.慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为（11.26±2.65）%、（6.26±2.04）%,AR蛋白相对表达量分别为（30.36±4.35）%、（15.36±3.37）%,PSA蛋白相对表达量分别为（13.37±2.70）%、（11.36±2.67）%.与对照组比较,NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降（P=0.000）.慢病毒转染后,与对照组比较,LnCaP、VCaP 细胞增殖显著抑制;转染后 LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为（15.08±1.23）%、（20.37±1.76）%,与对照组比较显著增加（P=0.001、0.000）;穿膜细胞数显著减少（P=0.000、0.004）,分别为（55.5±12.5）、（60.8±11.3） 个.结论 NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控,通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.

叉头蛋白和下调因子在幽门螺杆菌相关胃癌中的表达研究

目的研究叉头蛋白(Fox M1)和下调因子(GDDR)在幽门螺杆菌相关胃癌中的表达。方法收集和选取2012年1月-2015年12月本院胃镜活检和手术后胃组织标本150份,其中包含正常胃黏膜组织30份,幽门螺杆菌相关慢性胃炎、肠化生、异物增生、胃癌组织各30份,利用TriZol提取试剂提取RNA并进行逆转录,采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测FoxM1基因及FoxM1和GDDR在各疾病阶段表达的情况。结果实时荧光定量PCR检测正常胃组织,慢性胃炎、肠化生、异物增生和胃癌组织FoxM1的mRNA表达水平分别为15.51±2.65、32.68±3.81、41.32±4.09、59.88±6.21和88.65±7.92,免疫组织化学法检测FoxM1相对表达量分别为7.62±1.72、23.21±3.11、33.67±3.91、51.35±5.01和79.56±7.05。GDDR表达评分分别为:正常组织>6分,由幽门螺杆菌引起的胃癌评分<4分,其中<2分(27份)占90%。在由正常组织受到幽门螺杆菌感染向胃癌转化过程中,GDDR表达呈下降趋势。讨论幽门螺杆菌是消化性溃疡和慢性胃炎的主要致病菌,也是引发胃癌的一个重要危险因素。FoxM1和GDDR在正常胃组织,幽门螺杆菌引发的胃炎以及胃癌中组织表达存在差异,检测FoxM1和GDDR可作为幽门螺杆菌引发胃癌的重要依据。

活血、破血药对动脉粥样硬化大鼠血清MMP-9、TIMP-1的影响

目的观察活血药(川芎、当归)、破血药(三棱、莪术)对SD大鼠动脉粥样硬化(AS)模型血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织下调因子-1(TIMP-1)的影响。方法将60只8周龄SD大鼠适应性饲养1周后按随机数字表法随机分为5组:即空白对照组、模型对照组、阿托伐他汀钙组、活血药组、破血药组。空白组大鼠每日给予普通饲料饲喂,其他各组大鼠采用高脂饲料喂饲结合腹腔注射维生素D3法复制AS大鼠模型。造模成功后,空白组、模型组灌服等体积蒸馏水,其他各组大鼠分别灌胃给药,每日1次,连续4周,处理动物,免疫组化法观察血清MMP-9、TIMP-1表达水平。结果 1)活血药、破血药均能明显下调MMP-9表达水平(P<0.01),且破血药作用更明显(P<0.01);2)活血药、破血药均能明显上调TIMP-1表达水平(P<0.01),但活血药、破血药作用相当(P>0.05)。结论活血药(当归、川芎)、破血药(三棱、莪术)能起到抗AS的作用,其作用机制可能与调控血清MMP-9和TIMP-1表达水平有关。

胶质瘤组织和胶质瘤干细胞miR-520f-3p表达及临床意义

目的探讨胶质瘤组织和胶质瘤干细胞(CSCs)miR-520f-3p表达及临床意义。方法采用qRT-PCR法检测miR-520f-3p在40例份胶质瘤组织和20例份脑组织中的表达,并分析胶质瘤组织中miR-520f-3p表达与患者临床病理特征的关系。磁珠分选胶质瘤细胞系U87中的CSCs。Western blotting法检测OCT4、Nanog、SOX2干性标志蛋白在CSCs中的表达;miR-520f-3p在CSCs中的表达;经脂质体分别转染对照NC和miR-520f-3p inhibitor,并分为NC组和miR-520f-3p inhibitor组,MTS法检测各组CSCs增殖能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。采用Targetscan 7.1预测软件预测miR-520f-3p的靶基因。qRT-PCR法检测miR-520f-3p对CSCs中癌症亮氨酸拉链下调因子1(LDOC1)mRNA表达的影响。结果qRT-PCR结果显示,miR-520f-3p在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织,其高表达与肿瘤直径及WHO分级有关(P均<0.05)。OCT4、Nanog、SOX2干细胞标志物在CSCs中表达显著上调;miR-520f-3p在CSCs中的表达高于胶质瘤细胞U87(P<0.05);转染miR-520f-3p inhibitor后,CSCs细胞增殖和转移能力均下降(P均<0.05)。TargetScan7.1预测软件和双荧光素酶报告基因试验证实LDOC1为miR-520f-3p的靶基因,miR-520f-3p inhibitor组LDOC1 mRNA表达增加(P<0.05)。结论miR-520f-3p在胶质瘤组织和CSCs中均呈高表达,且高表达与肿瘤直径及WHO分级有关;miR-520f-3p可能通过负调控LDOC1增加CSCs的干性。

NEDD4基因沉默对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨神经前体细胞表达下调因子4(NEDD4)基因沉默对膀胱癌细胞株T24和RT4增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用脂质体转染技术将合成的三对NEDD4小干扰RNA(NEDD4siRNA1、NEDD4siRNA2、NEDD4siRNA3)分别转染膀胱癌细胞T24和RT4,转染48h后应用RT-PCR法和Western blotting法检测NEDD4的mRNA和蛋白表达,筛选出干扰效率最高的siRNA,并进一步检测转染干扰效率最高的siRNA对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;取T24和RT4细胞,设立空白对照组、阴性对照组和实验组,空白对照组为野生型T24和RT4细胞,不予转染;阴性对照组细胞转染Negative Control siRNA,实验组细胞转染NEDD4siRNA-2。转染48h后提取蛋白质,Western blotting法检测NEDD4蛋白及其下游靶蛋白PTEN和p73表达。结果NEDD4的三对siRNA均可下调NEDD4表达,其中NEDD4siRNA2效率最高;与阴性对照相比,实验组T24和RT4细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P均<0.01)。与阴性对照组相比,实验组NEDD4蛋白及其下游靶蛋白PTEN和p73表达均增加(P均<0.001)。结论NEDD4基因沉默能抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于数据库探讨NEDD8在头颈鳞癌中的表达及其预后价值

目的通过数据库探讨神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)在头颈鳞癌中的表达及其预后价值。方法利用Oncomine和UALCAN数据库分析NEDD8在头颈鳞癌组织和正常组织中的表达差异;运用GEPIA数据库和Kaplan-Meier Plotter在线分析NEDD8表达与头颈鳞癌患者生存率的关系;采用cBioPortal数据库分析头颈鳞癌患者中NEDD8基因改变情况。进一步通过LinkedOmics数据库寻找NEDD8共表达基因,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果NEDD8 mRNA在头颈鳞癌中表达水平显著高于正常组织,且与患者临床肿瘤分期、病理肿瘤分级、淋巴转移分期等显著相关(均P<0.05)。生存曲线分析显示,NEDD8高表达组头颈鳞癌患者总生存率显著低于低表达组(P<0.05)。NEDD8突变与HNSCC患者生存率无明显关系。NEDD8基因可能参与翻译延伸和蛋白折叠等生物学过程,并在核糖体、蛋白运输和嘧啶代谢通路等方面富集。结论NEDD8基因在头颈鳞癌患者中高表达且提示患者预后较差。NEDD8基因可能是潜在的头颈鳞癌生物标志物和治疗新靶点。

迟发型阿尔茨海默病的基因研究进展

阿尔茨海默病(AD)是目前最常见的老年性疾病,是一种以记忆和认知方面逐渐退化为主的神经退行性变疾病。早发型AD多与遗传基因的改变相关,而迟发型AD多与易感基因、环境因素及感染等相关。目前发现与迟发型AD相关的较明确的易感基因只有载脂蛋白E,现对迟发型AD相关的易感基因和近期发现的可能与迟发型AD相关的基因予以综述。