腺体组织损伤后体外分离下颌下腺干/祖细胞后的克隆化培养

背景:体外构建组织工程化人工涎腺需获得分化增殖良好、数量充足的种子细胞,但正常下颌下腺中很难分离出成体干细胞。目的:利用腺体组织损伤动物模型体外分离下颌下腺干/祖细胞,并进行克隆化培养。设计、时间和地点:细胞学体外观察,于2006-03/2007-01在遵义医学院贵州省细胞工程实验室完成。材料:8周龄雄性SD大鼠10只,由解放军第三军医大学动物中心提供。方法:10只大鼠采用结扎下颌下腺主导管、抑制腺体分泌来建立组织损伤模型,1周后切取腺体组织,酶消化法体外分离下颌下腺干/祖细胞,原代培养10～14d后,挑取培养皿中形成的小的类圆形、类上皮细胞集落予以纯化,传代后进行单克隆培养。主要观察指标:下颌下腺干/祖细胞免疫细胞化学染色及免疫荧光染色结果,通过绘制生长曲线分析下颌下腺干/祖细胞体外增殖能力。结果:实验获得表达层粘蛋白的细胞具有干细胞特征,CD29呈阳性表达表明其具有高黏附、高增殖等组织干细胞特性,角蛋白19的阳性表达提示下颌下腺干/祖细胞呈上皮源性。其生长曲线近似"S"形,体外培养增殖活跃。结论:实验结果显示,下颌下腺干/祖细胞具有组织干细胞的特征,有望成为组织工程化人工涎腺构建的一类种子细胞来源。

热环境及主导管结扎后SD大鼠下颌下腺内Integrinα_6 β_1 及CD90.1阳性细胞增殖的比较

目的:比较热环境与主导管结扎后SD大鼠下颌下腺内Integrinα6β1、CD90.1阳性细胞的增殖能力。方法:15只SD大鼠平均随机分为3组(n=5)。加热组大鼠在(34.5±1)℃环境饲养48 h;结扎组下颌下腺主导管结扎6 d;正常组予正常环境饲养。实验终点时摘除双侧下颌下腺腺体行组织学观察;流式细胞术分析腺体中Integrinα6β1、c-Kit、CD90.1阳性细胞百分比。结果:加热组下颌下腺体积重量最大,结扎组最小。流式细胞检测加热组、结扎组、正常组腺体内Integrinα6β1阳性细胞数分别为(26.2±2.4)%、(16.9±2.6)%、(10.6±0.7)%(P<0.05),CD90.1阳性细胞分别为(33.0±5.4)%、(25.0±4.1)%、(18.1±3.4)%(P<0.05),c-Kit阳性细胞分别为(13.4±3.4)%、(13.8±3.0)%、(8.5±3.1)%,加热组与结扎组无明显差异(P>0.05),但均明显高于正常组(P<0.05)。结论:热环境比主导管结扎更能有效刺激下颌下腺内Integrinα6β1和CD90.1阳性细胞的增殖,但对刺激c-Kit阳性细胞增殖没有明显差异。