不可分型流感嗜血杆菌诱导慢性阻塞性肺疾病急性加重的相关性研究分析

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Diseas,COPD)是一种呼吸系统常见病,严重危害人类生命安全,慢性阻塞性肺疾病急性加重(Acute Exacerbation Chronic Obstructive Pulmonary Diseas,AECOPD)则是导致死亡的重要原因。AECOPD发生时细菌感染是一种常见现象,而不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)则是最常见的细菌。本文将通过探讨NTHi与AECOPD之间的相关性,以此评估NTHi在AECOPD期的重要性,以期获得有效的治疗方案来降低AECOPD的发生率,减轻该病所带来的沉重医疗负担,从而提高患者生活质量。

儿童侵袭性流感嗜血杆菌感染的临床特征及血清学分型

目的分析儿童侵袭性流感嗜血杆菌(Hin)感染的临床特征及血清分型特点。方法回顾性分析2015—2021年山西省儿童医院收治的34例侵袭性Hin感染患儿的病例资料。根据临床诊断分为脑膜炎感染组和非脑膜炎感染组。分析患儿的一般资料、症状、体征、实验室血清学指标、Hin血清分型特点及两组间炎症因子水平的差异。结果34例患儿中男22例,女12例,男女比例为1.83∶1,≤36个月患儿占82.35%。脑膜炎感染组患儿降钙素原(PCT)为[23.71(4.10,77.80)]ng/mL、C反应蛋白(CRP)为[200.00(164.55,200.00)]mg/L,均高于非脑膜炎组[分别为1.08(0.49,6.00)ng/mL、69.46(48.09,125.63)mg/L],差异均具有统计学意义(均P<0.05)。血小板计数(PLT)非脑膜炎组[(312.56±186.81)×10^(9)/L]高于脑膜炎组[(183.28±165.67)×10^(9)/L],差异有统计学意义(P<0.05)。白细胞计数(WBC)和中性粒细胞百分比(NEUT)两组间比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。分离的Hin菌株中,b型流感嗜血杆菌(Hib)27株,e型2株,f型2株,3株不可分型,未发现a、c、d血清型菌株。脑膜炎感染组与非脑膜炎感染组患儿可分型Hin菌株分布比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.25,P>0.05)。可分型Hin菌株在男、女患儿中的构成比(67.74%VS 32.26%)比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.42,P>0.05)。结论侵袭性Hin感染病例以3岁以内儿童居多,分离株以b型占优势,感染患儿CRP、PCT明显升高,PLT明显低于非感染患儿,对临床诊断有一定应用价值,可结合临床及其他检验项目为侵袭性感染疾病的早期分类诊断及抗感染治疗提供有效支持。

不可分型流感嗜血杆菌生物膜在儿童慢性肺部感染中的作用

目的探讨不可分型流感嗜血杆菌生物膜在儿童慢性肺部感染中的作用。方法从临床微生物室样本库中选取2019年2月至2021年10月从健康儿童(健康对照组)鼻咽部和肺部感染儿童(肺部感染组)肺泡灌洗液中分离培养的流感嗜血杆菌,比较健康儿童与急性和慢性肺部感染患儿分离菌株体外生物膜在不同时间点的生成情况。结果选取流感嗜血杆菌89株,其中健康对照组34株,慢性肺部感染组30株,急性肺部感染组25株。所有菌株通过聚合酶链反应对荚膜基因bexA的检测发现,均为不可分型流感嗜血杆菌。急性和慢性肺部感染组在不同时间点(第1、2、3、4、7天)之间的吸光度差异有统计学意义,慢性感染组在第4天的吸光度最高。第4天健康对照组、急性和慢性肺部感染组之间的吸光度差异有统计学意义(P<0.05),慢性肺部感染组吸光度高于健康对照组和急性肺部感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不可分型流感嗜血杆菌生物膜的生成需要较长时间,在慢性肺部感染患儿中生成能力高于急性肺部感染患儿和健康对照儿童。

清肺消炎丸对不可分型流感嗜血杆菌诱导肺部炎症小鼠的影响

目的探讨清肺消炎丸对不可分型流感嗜血杆菌诱导肺部炎症小鼠的影响。方法 50只小鼠随机分为空白组、模型组、氨苄西林组(0.288 mg/kg)、麻杏石甘汤组(6.05 g/kg)、清肺消炎丸组(2.16 g/kg),每组10只。给药7 d后,测定一般情况(体质量及肺、脾、胸腺指数),HE染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、GCSF、TNF-α)水平,Western blot及RT-PCR法分别检测肺组织TLR4、MyD88、TRAF6蛋白及mRNA表达。结果与模型组比较,清肺消炎丸组一般情况显著改善(P<0.01),炎性细胞因子水平,TLR4、MyD88、TRAF6蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论清肺消炎丸可缓解不可分型流感嗜血杆菌诱导肺部炎症小鼠肺损伤和炎症,其机制可能与调控被激活的TLR4-MYD88-TRAF6信号通路、抑制炎性细胞因子分泌有关。

IL-2联合不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白对小鼠免疫功能的影响

目的观察IL-2联合不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白免疫小鼠的免疫效果,探讨IL-2的佐剂效应。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组:P6重组蛋白组、P6重组蛋白+IL-2组、IL-2组、P6重组蛋白+弗氏佐剂组及PBS对照组,分别于第0、14、28天经腹腔进行3次免疫,末次免疫后14 d,取小鼠血、脾标本,ELISA法检测血清中抗体IgG水平,并分析其脾淋巴细胞IL-4、IL-10、IL-2和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测各组脾淋巴细胞增殖活性。结果 P6重组蛋白联合IL-2组通过腹腔免疫刺激小鼠产生的血清IgG水平,高于PBS对照组、P6重组蛋白组及IL-2组(P<0.05)。P6重组蛋白联合IL-2组小鼠特异性脾淋巴细胞刺激指数及其所产生的IFN-γ、IL-2水平均高于PBS对照组、P6重组蛋白组及IL-2组(P<0.05),而IL-4、IL-10水平各组无差异。各项检测中P6重组蛋白联合IL-2组与P6重组蛋白联合弗氏佐剂组无显著性差异(P>0.05)。结论 IL-2联合P6重组蛋白诱导小鼠的免疫应答优于P6重组蛋白单独免疫,IL-2可以作为不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的佐剂。

不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析

目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。

不可分型流感嗜血杆菌诱导NCI-H292细胞产生MUC5AC的分子机制

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)诱导气道上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养NCI-H292细胞,用NTHi感染后,采用ELISA检测MUC5AC和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的水平;明胶酶谱实验分析MMP-9的酶活性;同时分别采用表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、NADPH氧化酶、活性氧簇(ROS)、和MMP-9特异性抑制剂AG1478、LY294002、DPI、NAC和GM6001预处理NCI-H292细胞,检测MUC5AC以及MMP-9的水平。结果:NTHi能以时间依赖性方式诱导NCI-H292细胞产生MMP-9,并上调其酶活性,同时增加Rac1的活性并诱导ROS生成;采用AG1478和LY294002处理后,Rac1活性显著降低;采用DPI或Rac1抑制剂NSC23766处理后,ROS含量明显减少;当NCI-H292细胞用NAC或NSC23766预处理后,可显著下调MMP-9的表达与活性。此外,采用GM6001处理后,MUC5AC的分泌明显降低。结论:NTHi经EGFR/PI3K/Rac1/NADPH氧化酶/ROS/MMP-9通路诱导NCIH292细胞产生MUC5AC。

泰利霉素经AP-1途径抑制不可分型流感嗜血杆菌诱导的MUC5AC表达

目的：研究大环内酯类抗生素泰利霉素（telithromycin，TEL）对不可分型流感嗜血杆菌（nontypeable haemophilus influenzae，NTHi）诱导气道上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的影响，并探讨其可能的分子机制。方法：体外培养NCI-H292细胞，用10mg／LTEL孵育6h预处理细胞，随后加入不同浓度NTHi孵育3～9h，分别采用ELISA和实时定量PCR检测MUC5AC蛋白和mRNA的表达情况，ELISA检测NCI-H292细胞内NF-KB和活化蛋白（Activa-torprotein-1，AP-1）DNA结合活性。结果：NT-Hi能明显诱导NCI-H292细胞产生和表达MUC5AC，并能激活NF-IcB和AP-1。而TEL处理后，能明显抑制NTHi诱导的MUC5AC蛋白和mRNA表达，并有效抑制AP-1的DNA结合活性，但对N1a-KB活性无明显影响。结论：TEL能抑制NTHi诱导的黏蛋白表达，其机制可能与抑制AP-1DNA结合活性有关。

不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的原核表达及其黏膜免疫效应

目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Western blot分析;纯化的重组蛋白经滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾细胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:成功构建了重组表达载体PGEX-6P2/P6,并表达GST-P6融合蛋白。Western blot证明GST-P6蛋白能与菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验表明重组P6蛋白通过滴鼻途径既能刺激小鼠产生血清IgG,又能诱导肺黏膜产生较高的特异性IgA抗体。重组蛋白+IL-2组小鼠脾淋巴细胞所产生的IL-17和IFN-γ的含量高于对照组(P<0.05)。结论:P6蛋白的原核表达载体PGEX-6P2/P6在大肠杆菌XL1-Blue中大量表达,重组P6蛋白经黏膜免疫可以同时诱导产生体液免疫和细胞免疫。此实验为P6蛋白疫苗的研发提供了理论基础。

不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的构建及表达

目的:构建不可分型流感嗜血杆菌(nontypeableHaemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outermembrane protein P6,P6)真核表达的重组质粒,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法:以NTHi基因组为模板,扩增编码P6蛋白的基因片段,酶切、纯化P6基因与真核载体pcDNA3.1/HisA后进行连接,之后转化并筛选含有目的基因的重组质粒pcDNA3.1/HisA-P6;将重组子转染至HeLa细胞,荧光蛋白法检测其表达产物。结果:经质粒PCR、酶切、测序证实插入的基因片段为NTHi-P6蛋白编码基因;荧光显微镜下显示,该重组质粒能够在HeLa细胞中表达目的蛋白。结论:成功地构建了真核重组质粒pcD-NA3.1/HisA-P6,并在HeLa细胞中表达。

小鼠巨噬细胞源性趋化因子作为佐剂增强不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗的免疫保护作用

目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组、PBS对照组。分别于0、14、28 d经腹腔免疫,末次免疫后14 d,每组取12只小鼠取血,ELISA检测血清中IgG抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。用10×LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。结果 P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组均能诱导小鼠产生IgG抗体,其滴度分别为1∶1 140.25、1∶3 044.38,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠抗体滴度和IFN-γ水平明显高于P6蛋白联合Freund佐剂组(P<0.05),但IL-4水平2组间差异无统计学意义(P>0.05)。经NTHi攻击后,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠的生存率达80%,与PBS组相比差异有统计学意义(P<0.05),但与P6蛋白联合Freund佐剂组相比无显著性差异。结论 MDC作为蛋白佐剂,在一定程度上增强了NTHi-P6蛋白疫苗的免疫保护作用。

不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势T-B联合抗原表位及其免疫原性研究

目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA分别检测重组噬菌体PIII蛋白(rPIII)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。结果 35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%~100%和99.3%~100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126三个预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和74.2%(46/62)NTHi感染患儿血清标本OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126抗原表位肽抗体阳性。结论 OMP6是分布广泛且序列保守的NTHi跨膜蛋白,OMP6-2-25为OMP6优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。

不可分型流感嗜血杆菌对气管黏膜上皮细胞的作用

目的 :探讨不可分型流感嗜血杆菌 (NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管黏膜上皮细胞的相互作用。 方法 :利用低温酶消化法分离兔气管黏膜上皮细胞 ,无血清培养液及胶原覆盖膜形成的气液界面培养 ,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞 ,然后加入 NTHi感染上皮细胞 ,通过扫描电镜 (SEM)和透射电镜 (TEM)观察其形态结构变化。 结果 :NTHi感染 2 4h后 ,SEM示气管黏膜上皮细胞表面结构破坏 ,90 %细胞凋亡或死亡 ,纤毛倒伏、断裂 ,细菌与非纤毛上皮细胞连接 ;TEM示细菌黏附在细胞表面 ,细胞表面有较多微绒毛 ,伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌 ,将其吞噬胞内。结论 :NTHi黏附在上皮细胞表面 ,上皮细胞通过伪足形成和微绒毛延伸包绕细菌 ,将细菌吞噬在胞内 ;NTHi对上皮细胞有毒性作用 。

不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的保护性研究

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平;CCK-8法分析脾淋巴细胞增殖情况,并建立小鼠NTHi感染模型,检测小鼠鼻咽部灌洗液NTHi数目变化;HE染色法分析鼻黏膜病理变化。结果:pcDNA3.1/HisA-P6在HeLa细胞中有目的蛋白的表达,免疫后pcDNA3.1/HisA-P6组小鼠脾淋巴细胞产生的IFN-γ及刺激指数均高于pcDNA3.1/HisA、PBS对照组(P<0.05),而IL-4的表达无差异;P6组鼻咽部NTHi清除率也显著高于对照组(P<0.01);病理显示P6组小鼠鼻黏膜组织结构基本正常,而对照组鼻黏膜紊乱、脱落。讨论:P6核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗NTHi保护效应,其可能的保护机制包括细胞免疫、体液免疫及黏膜免疫。

不可分型流感嗜血杆菌脂肽P4诱导气道上皮细胞分泌黏蛋白的机制

目的研究不可分型流感嗜血杆菌脂肽P4诱导气道上皮细胞分泌黏蛋白MUC5AC的作用及机制。方法培养人气道上皮细胞NCI-H292,用不同浓度的P4孵育细胞,检测粘蛋白5AC(MUC5AC)的分泌及mRNA表达、ROS的产生及肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)的活性;分析Duox1 p47phox和P67phox亚基亚细胞转位和表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化。结果 0、30、50和100 ng/m L P4作用NCI-H292细胞24 h后,可诱导其分泌MUC5AC并表达其mRNA,并促进p47phox和P67phox亚基转位至细胞膜、增高细胞内ROS的含量,同时可上调TACE的酶活性及诱导EGFR磷酸化。NADPH氧化酶抑制剂可抑制ROS产生;而ROS抑制剂处理则可降低TACE的酶活性;沉默TACE表达后可抑制EGFR磷酸化,而EGFR抑制剂处理可降低MUC5AC分泌。结论 P4经Duox1/ROS/TACE/EGFR诱导人NCI-H292细胞分泌MUC5AC。

不同佐剂对不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗免疫效果的影响

不可分型流感嗜血杆菌（ nontypeable Haemophilus influenzae, NTHi）是一种在人群中携带率很高的病原菌，常引起呼吸道反复感染及中耳炎和鼻窦炎等严重感染性疾病.

重组MBD2体内抗不可分型流感嗜血杆菌机制的初步研究

目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2(MBD2)后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)感染小鼠的治疗效果,并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检测小鼠肺组织中TLR2、IL-1β、TNF-α、MBD2和β-Actine mRNA的表达;重组MBD2治疗NTHi肺部感染小鼠,通过肺指数、肺组织病理切片及肺部荷菌数检测,对其治疗效果进行评价。结果体内注射重组MBD2可显著提高实验小鼠肺组织TLR2、IL-1β、TNF-α及MBD2等细胞因子的表达量;重组MBD2的应用能显著降低NTHi肺部感染小鼠的肺指数及肺组织内的NTHi荷菌数,并能减轻感染小鼠肺组织的炎性浸润程度,明显改善其肺部病变。结论重组MBD2在体内对NTHi感染有较好的治疗效果,其作用机制可能与重组MBD2对机体特异性免疫应答的诱导密切相关,为防御素抗感染机制的进一步完善奠定了良好的实验基础。

不可分型流感嗜血杆菌生物膜体外形成规律及其扫描电镜形态学

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)生物膜(BF)体外形成规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株,以铜绿假单胞菌(PA)标准菌株PAO1为阳性对照菌株,同时设空白对照组,分别培养1、2、3、4、5、6和7d时,使用平板计数法和结晶紫染色法检测BF形成情况,并于3d时采用SEM检测ATCC49247的BF结构。结果:平板计数法检测BF内菌落数,ATCC49247和PAO1培养3d时活菌数逐渐上升至最高,而后逐渐下降,至7d时分别降至(0.829 4±0.007 5)×107cfu·mL-1和(0.942 6±0.019 9)×107cfu·mL-1,培养3、4、5和6d时2组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌各不同时间点间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结晶紫染色检测BF致密程度,ATCC49247和PAO1培养3d时BF致密度逐渐上升至最高,波长570nm吸光度(A570)值分别为2.717 4±0.017 2和2.885 3±0.039 0,而后逐渐下降,至7d时分别降至0.151 7±0.074 5和1.196 9±1.108 5,各时间点2组细菌与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05),培养3、4和5d时2组细菌间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌不同时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。SEM观察,培养3d时ATCC49247形成了典型的BF结构。结论:ATCC49247可以在体外形成BF,结晶紫染色、平板计数和扫描电镜可作为检测BF的常规手段。

副猪嗜血杆菌14型的分离鉴定和药敏试验

为了明确河南省某规模化猪场断奶保育猪副猪嗜血杆菌感染情况,从濒死期病猪的肺脏、心血样品中分离获得1株细菌,通过对该株细菌分离鉴定、血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验等一系列试验,证实该株细菌为副猪嗜血杆菌14型,该菌株携带有capd、vta1、vta2、vta3、wza、hhdA、hhdB、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、cdtC、espP等13种主要毒力基因;该菌株对保育仔猪表现出较强的致病性,对头孢他啶、氟苯尼考、头孢噻呋、氨苄西林、强力霉素、土霉素、氧氟沙星敏感,对青霉素、阿米卡星、诺氟沙星、复方新诺明耐药。研究结果可为副猪嗜血杆菌血清14型流行病学研究提供参考。

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨不可分型流感嗜血杆菌诱导支气管上皮细胞炎症的机制

目的初步探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)对支气管上皮细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法体外培养人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B),采用感染复数MOI=1、5、10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,ELISA、qRT-PCR检测细胞上清中IL-1β和IL-6及其mRNA的表达水平,并检测细胞内TLR2、MyD88的活化情况以及IκB的磷酸化水平;随后采用siRNA以及MyD88、NF-κB抑制剂预处理细胞,并检测细胞中IL-1β和IL-6的表达水平。结果MOI=1、5、10的NTHi刺激BEAS-2B细胞后,细胞内IL-1β和IL-6及其mRNA水平均显著增高(P<0.05),且TLR2以及MyD88的表达水平也要显著高于未刺激组(P<0.05)。Western blot结果显示,NTHi处理后细胞内IκB的磷酸化水平较未刺激组明显上升;siRNA沉默TLR2及采用NF-κB抑制剂、MyD88抑制剂后细胞中IL-1β和IL-6分泌水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论NTHi能够通过激活TLR2/MyD88以及NF-κB信号通路诱导支气管上皮细胞BEAS-2B分泌促炎因子IL-1β以及IL-6。