DPP-4抑制剂LGT-6在不同种属血浆中蛋白结合率的比较

目的:建立二肽基肽酶4抑制剂LGT-6在不同种属血浆中蛋白结合率的测定方法并比较差异。方法:采用平衡透析法,以磷酸盐缓冲液为透析外液,将3、30、300、3000 nmol/L的LGT-6分别在大鼠、猴、人血浆(即透析内液)中平衡48 h。以甲苯磺丁脲为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定透析内、外液中LGT-6的浓度,计算血浆蛋白结合率。以ACQUITY UPLCHSS T3为色谱柱,以水(含0.01%甲酸)-乙腈(含0.01%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;离子源为电喷雾离子源,监测模式为多反应监测模式,采集模式为正离子模式,定量分析用离子对分别为m/z 487.0→434.3(LGT-6)、m/z 271.1→172.0(内标)。结果:在3、30、300、3000 nmol/L浓度下,LGT-6在大鼠血浆中的蛋白结合率分别为(96.25±0.97)%、(84.16±1.24)%、(78.25±0.61)%、(66.63±0.95)%,在猴血浆中的蛋白结合率分别为(98.54±0.58)%、(87.27±1.01)%、(79.35±0.86)%、(66.69±0.54)%,在人血浆中的蛋白结合率分别为(99.40±1.03)%、(84.48±1.15)%、(77.62±0.77)%、(66.93±0.48)%。在相同浓度下,LGT-6在大鼠、猴和人血浆中的蛋白结合率没有明显差异(P>0.05);在相同种属血浆中,不同浓度LGT-6的血浆蛋白结合率组间比较差异有统计学意义(P<0.05),且有随药物浓度的升高而降低的趋势。结论:成功建立了测定LGT-6血浆蛋白结合率的方法。在相同浓度下,LGT-6在大鼠、猴、人血浆中的蛋白结合率没有明显的种属差异,但有明显的浓度依赖趋势。