不吸水链霉菌辽宁变种基因转移系统的建立

以嘧肽霉素生物合成阻断突变株UV2136为研究对象,建立了不吸水链霉菌辽宁变种的基因转移系统。UV2136对硫链丝菌素高度敏感,选择含有该抗生素标记的质粒pIJ702和pWHM3,探索其转化UV2136的可能性。结果表明:UV2136含有较强的限制修饰系统,采取热衰减法获得原生质体、原生质体热处理、冷处理、EDTA处理、质粒DNA变性等,均不能实现质粒pIJ702向UV2136的转化。来自非甲基化宿主E.coli ET12567的pWHM3也无法实现转化,而源于E.coli DH5α的甲基化pWHM3,可以低频转化菌株UV2136,转化效率分别为4转化子.μg-1 pWHM3,经自身修饰的pWHM3可实现高效转化,达到104转化子.μg-1pWHM3。

吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体的构建和酶学性质表征

根据茂源链霉菌谷氨酰胺转氨酶点突变的结果,用重叠延伸PCR法构建了3个吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe、Tyr360Ala,在巴斯德毕赤酵母GS115中表达并对其酶学特性进行了表征。结果表明,野生型和3个突变体的最适温度为40℃,最适pH 7;除了甘油外,其他有机试剂都降低了TGase的酶活力;与野生型相比,突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe和Tyr360Ala的比活力分别提高了9%、85%和30%;3个突变体与野生型相比,K_(m)、K_(cat)和K_(cat)/K_(m)值有所升高,表明突变可能降低了TGase与底物的亲和力,却加速了其催化效率。上述结果为通过点突变提高吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶酶活力提供了试验依据和途径。

吸水链霉菌应城变种的四个内源质粒及其逐个消除的研究

在改良质粒DNA提取方法的基础上,从三种农用抗生素的同一产生菌——吸水链霉菌应城变种中同时发现四个内源质粒,用双向电泳技术确定了它们均为CCC构型,根据分子量从大到小的顺序将它们分别命名为pHZ1、pHZ2、pHZ3和pHZ4,与已知分子量的CCC质粒分子同步电泳估计它们的分子量依次分别为61kb、4.7kb、4.1kb和3.3kb,基于这四个内源质粒中至少部分个体可能为接合性质粒,可在没有某个质粒的衍生菌株的菌坪上形成“麻点”的假设,我们分离和鉴定了三个质粒逐个消除的10-22衍生菌株,并在光学显微镜下确证了二种类型的麻点。

不吸水链霉菌公主岭变种诱导大豆抗病性与根际土壤微环境的变化

不吸水链霉菌公主岭变种(农抗"769")是一株来源于土壤中对多种植物病原真菌具有较强拮抗作用的农用链霉菌,为明确农抗"769"对大豆抗疫霉根腐病的免疫诱抗作用及对大豆生长土壤微环境的影响,对盆栽种植不同大豆品种植株进行下胚轴创伤接种,鉴定大豆幼苗对疫霉根腐病的抗性,接种7 d后测定幼苗叶片PAL、PPO、MDA、SOD、CAT、POD、GLU的活性及Chl的含量。小区试验采取随机区组设计,在大豆播种后以农抗"769"菌液浇灌,采用稀释平板法测定不同生育期土壤中可培养细菌、真菌、放线菌菌群数量,并测定土壤中过氧化氢酶、碱性磷酸酶、脲酶和蔗糖酶等生物酶的活性。试验结果表明:农抗"769"菌液浇灌后不同品种的大豆幼苗在抵御疫霉根腐病侵染时发病率均有不同程度的降低。4个品种在农抗"769"诱导下抗性顺序为:Williams 82>沈农9号>九农21>Jack,分别比对照提高74.74%、68.82%、14.32%和8.30%。农抗"769"诱导可增强大豆幼苗的诱导抗性,且在病原菌侵入时具有更强的系统抗性。在病原菌与农抗"769"的双重诱导下,PAL、PPO、SOD、CAT、GLU表达量分别比对照提高95.22%、34.55%、9.46%,73.01%和10.71%,Chl的含量比对照高18.19%;MDA比对照降低了33.47%,POD活性比对照降低0.69%,差异不显著。农抗"769"菌液浇灌对根际土壤微生物群落结构优化及土壤酶活性升高具有促进作用。农抗"769"菌液浇灌后大豆植株根际土壤中可培养细菌、放线菌菌群数量增加,真菌菌群数量降低,根际土壤中蔗糖酶、脲酶和磷酸酶活性与对照相比最高分别提高342.59%、73.98%和150.27%,过氧化氢酶活性变化不显著。农抗"769"诱导可提升大豆对疫霉根腐病的抗性,并对其生长的土壤微环境的改良具有积极的作用。

不吸水链霉菌公主岭变种769原生质体制备条件初探

为获得较高的不吸水链霉菌公主岭变种769(简称链霉菌769)原生质体产率,采用酶解法制备原生质体,通过单因素试验法探索链霉菌769原生质体制备的最佳条件,包括溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂。试验结果表明,链霉菌769孢子在溶菌酶浓度为3.5mg/mL,酶解温度为36℃,酶解时间3h,以P缓冲液为渗透压稳定剂的条件下原生质体形成效果最好,原生质体再生率达到62.5%。链霉菌769原生质体的获得为以原生质体为基础的基因转移系统的建立奠定了基础。

吸水链霉菌井冈变种JG5008转化系统的初建

吸水链霉菌井冈变种JG5 0 0 8的最佳转化条件是 :JG5 0 0 8在添加MgCl2 (cf=0 .0 0 5mol/L)和甘氨酸 (ρf=0 .5g/L)的含 10 %蔗糖的YEME培养基中接种浓度n≈ 10 8mL-1的JG5 0 0 8孢子悬液 ,37℃摇床培养 12h ,收获菌丝体 .在 32℃、溶菌酶浓度 ρ =2mg/mL的条件下溶菌 1h后制备原生质体 ,用T缓冲液在R2 YE培养基上进行转化 .本文初步建立了JG5 0 0 8的质粒载体系统 ,包括不同来源的pIJ70 2、pIJ92 2、pCZA16 8、pHZ132等质粒载体 .感染实验证实 ,JG5 0 0 8对外源DNA具有较强的限制性 .图 1表 5参

不吸水链霉菌公主岭新变种对大豆生长和产量的影响

[目的]明确农抗769作为免疫诱抗剂在大豆不同生育期和生长环境下对其产生的影响。[方法]以农用生防菌不吸水链霉菌公主岭新变种(农抗769)为试验材料,采用盆栽、田间种植等方法研究了该链霉菌对大豆生长的促生作用。[结果]不同品种的大豆对农抗769菌液的敏感性不同,其中农抗769菌液浇灌处理的大豆出苗率可提高1.2%~16.9%。不同生育期和种植环境大豆株高、茎粗、叶面积及根系等生长势指标的变化略有不同,各项指标的增长最多分别可达19.63%、37.35%、23.22%和19.92%,不吸水链霉菌公主岭新变种菌液对大豆生长的促生效果明显。菌液浇灌可提高大豆产量,其贡献在于促进大豆结荚数的增加。[结论]农抗769菌液对大豆出苗、生长及产量均具有促进作用。

吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生

目的研究井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件。方法使用溶菌酶水解菌体细胞壁法,分别考察影响吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生的各种因素。结果在R2YE液体培养基中,一级菌丝体的最佳培养时间为24 h,二级菌丝体的最佳培养时间为16 h,最佳甘氨酸质量浓度为5 g.L-1,最佳溶菌酶质量浓度为2 g.L-1,最佳酶解时间为60 min,最佳再生培养基为R2YE,原生质体的再生率最高可达到15.79%。结论本实验确定了吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件,能够得到较高的再生率。

响应面优化法提高吸水链霉菌株5-4拮抗香蕉枯萎病菌活性

为提高吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus菌株5-4的抑菌活性,以拮抗香蕉枯萎病菌(Foc TR4)的抑菌率为响应值,采用响应面三步法对菌株5-4的发酵条件进行优化,并测定观察其对Foc TR4病菌分生孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明,发酵条件优化后,吸水链霉菌株5-4的最优发酵培养条件为可溶性淀粉21.51 g/L,NaCl 4.73 g/L,接种量3.22%。该条件下菌株5-4发酵提取物500μg/mL处理对Foc TR4病菌的抑菌率大幅提高,抑菌率达到88.36%,比优化前的抑菌率54.96%提高60.77%;校正孢子萌发抑制率达到100%,比优化前的63.62%提高57.18%,且提取物处理的Foc TR4病菌的菌丝出现明显分叉、增生、肿大等现象。

响应面法优化吸水链霉菌产雷帕霉素发酵培养基

目的优化吸水链霉菌产雷帕霉素发酵培养基,提高雷帕霉素产量。方法利用Plackett-Burman试验设计筛选出培养基中影响雷帕霉素发酵产量的显著因素,爬坡试验确定主要因素的最适范围,响应面法确定各显著因素的最优水平。结果获得最优发酵培养基配方为:葡萄糖37.60 g/L、甘露醇30 g/L、黄豆粉28.37 g/L、硫酸铵1.25 g/L、磷酸氢二钾5 g/L、磷酸二氢钾5 g/L、L-赖氨酸1.5 g/L、复合氨基酸1.83 g/L。结论在最优发酵培养基培养下,雷帕霉素发酵水平由初始182.23 mg/L提高到279.56 mg/L,提高了53.41%。

以吸水链霉菌应城变种为宿主的一系列基因克隆体系的发展

对链霉菌分子生物学的兴趣有一个十分突出的特点,就是人们感兴趣的菌种非常广泛,这个特点出自对不同的抗生素和细胞外酶生物合成遗传调控研究的需要。吸水链霉菌应城变种就是这类有趣菌种中的一员。 吸水链霉菌应城变种具有下述有趣的特征:(一)它产生三种不同结构的农用抗生素,一种为氨基糖苷类抗生素,与有效霉素A(Validamycin)的结构相类似,对水稻病原菌中的丝核菌类(如纹枯病,小核菌核病),具有良好防效;一种为多肽类抗生素。

吸水链霉菌桂林新变种的分类研究

从广西桂林的土壤中分离到一株链霉菌（编号为２３４５），它的发酵产物对线虫、菜青虫、松毛虫等畜禽寄生虫及作物害虫等的防治效果显著，它对一些格兰氏阳性菌也有明显的抑制作用，对其进行分类学研究的结果如下：按照链霉菌的分类法，该菌细胞成份属于细胞壁Ｉ型，糖Ｃ型。该菌在高氏培养基、ＩＳＰ－４等培养基上产生丰富的孢子，在斜面上则呈现一片褐色斑。该菌在培养特征、碳源利用以及形态特征等方面均近似于淡紫灰吸水链霉菌，但对淀粉利用能力很强。另外，它对枯草杆菌、藤黄八叠球菌等阳性菌的抗菌作用强，尤其是它的发酵产物可以杀死禽畜体内的线虫，故属淡紫灰吸水链霉菌桂林变种Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｖｅｎｄｕｌｏｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓｖａｒ．ｇｕｉｌｉｎｎ．Ｘｉａ．

吸水链霉菌应城变种质粒的分离研究

采用蔗糖浓度为13％的YEME培养基培养吸水链霉菌应城变种10-22菌株,能获得生长量较高且分散状况良好的菌丝体。在探索链霉菌质粒DNA的分离方法时,以T.Kieser的方法为基础,提高国产溶菌酶的用量和延长酶解时间,首次从吸水链霉菌应城变种中分离到一种质粒DNA分子,将它命名为pSH_(47)。同时,通过pock形成能力的检测。进一步证实这个质粒的存在。吸水链霉菌应城变种10-22菌株经吖啶橙处理后获得的部分或全部丧失5102抗生素生物合成能力的几个阻遏突变株的质粒检测结果表明,它们都有与10-22菌株相同的质粒带。

吸水链霉菌应城变种10-22中一个复制子的克隆和基本复制区的定位

利用由pBR322衍生的链霉菌复制子探针载体pIJ2703,从吸水链霉菌应城变种菌株10-22中克隆了一段13kb的可以自主复制的DNA,制作了携带这段DNA的杂合质粒pHZ54的限制酶图谱。利用缺失、次级克隆等方法将基本复制区确定在2.86kb的范围内。用外切酶Ⅲ顺序缺失法不仅进一步确证了基本复制区的位置,而且将其缩小到2kb的范围内。同时,在上述试验过程中、还组建了一系列既可在大肠杆菌、又可在变铅青链霉菌中复制的双功能质粒,其中有些质粒是有用的穿梭载体。

吸水链霉菌应城变种种内融合子FR－008产生的新抗生素灭蚊幼的研究

本文报道吸水链霉菌应城变种种内融合子ＦＲ－００８产生的新抗生素（简称ＦＲ－００８抗生素）对３种蚊虫幼虫的灭蚊活性以及蚊龄、温度、紫外线对ＦＲ－００８抗生素灭蚊活性的影响。实验证明：ＦＲ－００８抗生素对３种蚊虫幼虫均有较强的致死作用。对３龄致倦库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的２４ｈＬＤ＿（５０）分别为１．３３０９μｇ／ｍｌ、２．０１１３μｇ／ｍｌ和２．８３１７μｇ／ｍｌ。不同虫龄对ＦＲ－００８抗生素的敏感性不同，１龄至２龄幼虫比４龄初幼虫敏感。ＦＲ－００８抗生素，在１９℃～３１℃之间，随温度升高灭蚊效果更好。紫外线照射可显著降低ＦＲ－００８抗生素的灭蚊活性。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌——吸水链霉菌应城变种的研究

利用同源菌株融合改良农抗５１０２产生菌——吸水链霉菌应城变种的研究ＳＴＲＡＩＮＩＭＰＲＯＶＥＭＥＮＴＯＦＡＮＴＩＢＩＯＴＩＣ５１０２ＰＲＯＤＵＣＩＮＧＳＴＲＥＰＴＯＭＹＣＥＳＨＹＧＲＯＳＣＯＰＩＣＵＳＶＡＲ．ＹＩＮＧＣＨＥＮＧＥＮＳＩＳＢＹＰＲＯＴＯ...

转座子Tn5096对刺孢吸水链霉菌北京变种RF220转座的诱变

用大肠杆菌／ 链霉菌穿梭质粒ｐＣＺＡ１６８（ ｂｌａ，ｔｓｒ，Ｔｎ５０９６ ，ＣｏｌＥＩｒｅｐ ，Ｓｔｒｅｐ ｒｅｐｔｓ） 多次转化农抗１２０ 产生菌刺孢吸水链霉菌北京变种（ Ｓ．Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｐｉｎｏｃｕｓ ｖａｒ． ｂｅｉｊｉｎｇｅｎｓｉｓ）ＲＦ２２０ 的原生质体，均未得到转化子。来自吸水链霉菌应城变种（ Ｓ．Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｖａｒ．）１０ － ２２ 突变株的链霉菌质粒ｐＩＪ７０２（ｔｓｒ ｍｅｌ＋ ） 可以转化ＲＦ２２０ ，但转化频率只有数十个转化子／μｇＤＮＡ。用来自ＲＦ２２０ 本身的ｐＩＪ７０２ 对消除ｐＩＪ７０２ 后的ＲＦ２２０ 的原生质体进行了再转化，转化率没有明显的提高。用氨苄青霉素和甘氨酸协同处理ＲＦ２２０ 的菌丝体，并经－ ７０ ℃冷冻原生质体再转化，得到了４ 个ｐＣＺＡ１６８ 的转化子。质粒提取、酶切、抗性测定表明：４ 个转化子中ｐＣＺＡ１６８ 中大肠杆菌ＤＮＡ 部分均被切除，成为大小约５０ ～６０ｋｂ的小质粒，命名为ｐ ＷＺＨ１０２（ｔｓｒ，Ｔｎ５０９６ ，ｓｔｒｅｐ ｒｅｐｔｓ） 。用ｐ ＷＺＨ１０２ 上的转座子Ｔｎ５０９６ 对ＲＦ２２０ 进行转座实验。

阿扎霉素B产生菌吸水链霉菌NND-52的诱变筛选

用紫外线 ,紫外线加氯化锂 (Li Cl)、吖啶橙 3种诱变方式对阿扎霉素 (Azalomycin) B产生菌 Strepto-myces hygroscopicus NND- 52菌株进行诱变处理 ,确定了它们的最佳诱变剂量 ,获得了数株 Azalomycin B产量较出发菌株提高 3倍以上的高产菌株 ,编号 Al3的菌株摇瓶产量达 110 0 mg/ L,且传代稳定。经过对 3种诱变方式的比校 ,发现后两种诱变方式对产量的提高更为有效。

吸水链霉菌NND-52菌株胞内抗生素M1分离、纯化及结构确定

吸水链霉菌 NND- 5 2菌丝体 ,经溶媒浸提 ,粗结晶 ,梯度洗脱的硅胶柱层析分离 ,纯化 ,得到主要组分 M1,通过对其基本理化性质分析和 UV、IR、1 H- NMR、1 3C- NMR、DEPT等波谱分析 ,确定其结构与阿扎霉素 B相同 。

两株能利用甲烷的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的分离和鉴定

分别从杭州华家池黄松田稻田土和浙江金华老黄筋泥稻田土中分离得到能利用甲烷的Z5 6 菌株和J2 6 菌株,通过形态特征、生理生化实验鉴定,初步认为 2菌株属于链霉菌属(Streptomyces)吸水类群(Hygroscopicus)的能氧化甲烷的菌株,暂命名为吸水链霉菌甲烷氧化菌株S.hygroscopicusstrainmethane oxidizingZ5 6 和S.hygroscopicusstrainmethane oxidizingJ2 6 。