苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。

酸枣叶片不定梢形成及玻璃化的影响因素

以酸枣无菌苗叶片为外植体,研究了培养条件对不定梢再生及不定梢玻璃化的影响.结果表明,叶片在加有细胞分裂素TDZ的诱导培养基(培养基Ⅰ)上连续培养,可诱导不定芽形成,但不能进一步发育成不定梢;而在诱导培养基Ⅰ上培养2周后转移到不加TDZ的培养基Ⅱ上,可获得不定芽伸长的不定梢.培养基Ⅱ的基本培养基组成影响不定芽(梢)的玻璃化症状:MS培养基产生玻璃化的不定芽(梢),而WPM培养基产生正常不定芽梢;光培养条件的变化对玻璃化症状的发生没有影响.不定芽(梢)玻璃化的发生可能与培养基中铵或硝酸铵的浓度有关,在不定芽伸长发育阶段,培养基中高浓度的铵导致了玻璃化苗的发生.

梨多倍体化对离体叶片不定梢再生能力的影响

以源于二倍体梨品种Fertility(Pyrus communis L.)通过秋水仙碱离体诱变体细胞染色体加倍获得的不同同源多倍体无性系为试材,以离体叶片为外植体,观察研究了不同倍性无性系叶片的不定梢再生能力。结果表明,多倍体的不定梢再生率显著低于二倍体的再生率。不同多倍体无性系的不定梢再生能力也存在显著差异。三倍体无性系3x-3和四倍体无性系4x-4不能诱导产生不定梢。表明器官发生能力下降或植物细胞全能性的丧失与细胞染色体多倍体化有关。

γ-射线对苹果和梨离体叶片不定梢再生及芽生长的影响

用γ-射线照射苹果和梨的无根无菌苗,研究其对叶片不定梢再生及芽生长的影响。对照射最敏感的器官是叶片,其次是未萌发的侧芽,第三是正在生长的顶芽。叶片不定梢再生的半致死剂量为20-30 Gy,苹果侧芽萌发的半致死剂量为30 Gy,梨为30 Gy以上。照射剂量在10-30 Gy时,抑制顶芽的伸长生长,但不引起致死或其他不良生长症状。

金花梨子叶不定梢再生研究

以金花梨花后65 d的成熟胚子叶为外植体,研究了不同培养基、BA浓度、暗培养条件及AgNO3浓度对子叶不定梢再生的影响.结果表明:梨成熟胚子叶在适宜培养条件下能发生大量不定梢,培养15 d为初发生期,25～30d为高峰期,40 d后结束发生.暗培养预处理有利于提高子叶再生频率、再生不定梢数和不定梢质量.在NN69+BA3.0mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上,暗培养3周后转光下培养获得了85.2%不定梢再生率,平均再生不定梢44个.培养基中加入0～4mg/LAgNO3对梨子叶不定梢再生有促进作用,但浓度大于4mg/L时抑制子叶不定梢再生.

几种抗生素对梨叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响

研究了氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)和卡那霉素(Km)对梨叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响。结果表明,Amp对巴梨叶片分化影响较小,当浓度达500mg/L时,其出愈率和不定梢再生率分别为96.48%和56.17%,与对照差异不显著;Cef浓度在50-300mg/L时对巴梨和身不知叶片再生均无显著影响,只有当Cef浓度高于400mg/L时,巴梨的不定梢再生率才受到显著抑制;巴梨和身不知叶片对Carb的反应不相同,低浓度(≤200mg/L)的Carb对巴梨的出愈率和不定梢再生率影响较小,却显著抑制身不知的不定梢再生率,高浓度(≥300mg/L)的Carb不仅极显著抑制巴梨和身不知的出愈率,而且完全抑制了2者的不定梢再生;Km浓度大于10mg/L时,明显抑制愈伤组织的生长,且随着浓度的增加,死亡率逐渐增大,当Km浓度达100mg/L时,巴梨和身不知叶片死亡率达100%和96.30%。

培养条件对酸枣叶片不定梢再生率的影响

以酸枣无菌苗叶片为外植体,选用基本培养基NN69和wPM.外源激素包括TDZ、IAA、IBA和NAA.暗培养时间为2、3、4周.采用正交实验设计方法,研究了基本培养基、外源激素及暗培养时间对叶片不定梢再生的影响.结果表明在附加TDZ 1～3 mg/L的WPM和NN69上都可诱导不定梢再生,但WPM比NN69更有效.暗培养时间对不定梢再生也有影响,暗培养3周比2、4周更有利于提高叶片的不定梢再生率.在附加TDZ 1 mg/L、IAA0.1 mg/L的WPM培养基上,暗培养3周后转到光下培养.获得的不定梢再生率达87.5%.

砂梨叶片再生不定梢的研究

研究了3个砂梨栽培品种翠冠、)青、西子绿离体叶片不定梢再生能力。翠冠再生能力最强,)青其次,而西子绿未能再生。一定时期的暗培养是翠冠叶片再生的必要条件。对翠冠再生过程不同时期的叶片样品进行扫描电子显微镜观察表明,在试验开始的10d后就出现了类分生组织结构,在2个月后观察到充分发育的梢,且最终形成的梢的数量远少于所形成的分生组织数量。

影响梨叶片高频不定梢再生因素的研究

研究了基因型、基本培养基、植物生长物质、叶片接种方法及光、暗培养条件等因素对梨叶片不定梢再生的影响。基因型对叶片不定梢再生影响最大,安久和丰水的再生率最高,可达100%,其次为鸭梨,为80%,黄金梨的再生率最低,仅为27.3%。不同基因型其获得最高不定梢再生率所需附加的植物生长物质不同。TDZ比BA更有利于鸭梨叶片的高频不定梢再生,而BA更有利于西洋梨和砂梨叶片的不定梢再生。暗培养3周后再转光下培养比直接光培养有利于不定梢的再生,叶片接种方法对再生率无明显影响。

‘孔府酥脆’枣试管苗离体叶片不定梢诱导和再生

Using in vitro leaves of Zizyphus jujuba ‘Kongfusucui’ plantlet as explants,effects of culture method,phytohormone proportion and culture time on induction rate of adventitious shoot from leaves and effects of sucrose concentrations in rooting media on rooting of adventitious shoot were studied.The results show that induction rate of adventitious shoot by two-step culture method(firstly cultured on medium Ⅰ for four weeks then cultured on medium Ⅱ for three weeks) is significantly higher than that by one-step culture method(cultured continuously on medium Ⅰ for seven weeks).Phytohormone proportion in medium Ⅰ has an obviously influence on induction rate of adventitious shoot,which gradually increases with increasing of TDZ concentration in medium Ⅰ.And adding 1.0 mg·L-1 TDZ in medium Ⅰ leads to induction rate with above 80%.With culture time prolonging(cultured for 1,2,3 or 4 weeks on medium Ⅰ,respectively),induction rate increases gradually.Sucrose concentration has a significant effect on rooting of adventitious shoot,sucrose with higher concentration(30 g·L-1) is beneficial to rooting.According to induction rate and growth status of adventitious shoot,it is determined that optimal culture method of adventitious shoot induction from Z.jujuba 'Kongfusucui' leaves is two-step culture method,that is,leaves firstly cultured on WPM medium containing 1.0 mg·L-1 TDZ and 0.5 mg·L-1 IAA for four weeks,and then cultured on WPM medium containing 0.5 mg·L-1 IAA and 1.0 mg·L-1 GA3 till adventitious shoot produced.

大鸭梨叶片高频率不定梢再生诱导研究

以白梨 (PyrusbretschneideriRehd )鸭梨的芽变大鸭梨试管苗为试材 ,试管苗幼叶为外植体 ,研究了培养基的基本元素组成、外源激素及接种叶片的放置方向对叶片不定梢再生的影响。结果表明 ,培养基的基本元素组成是影响叶片能否获得再生不定梢成功的关键因素 ;外源激素直接影响叶片的不定梢再生频率 ;叶片的接种放置方向影响单位叶片的再生不定梢数。诱导大鸭梨叶片获得高频率不定梢再生的最佳培养基为基本培养基NN6 9附加激素TDZ和IBA。叶片远轴面接触培养基 ,平均单位叶片产生的不定梢数量最多。

九月菊桃成熟胚诱导不定梢的研究

以晚熟优良品种九月菊桃为试材，设7种不同培养基，8种不同外植体及2种光因子，共计24个处理，进行试验。结果表明，基本培养基以MS最好，其次为改良K和WPM，AP无效。不同外植体的不定消发生率，以全胚最高，其次为去子叶胚，对子叶进行切块比切伤再生率高，切4块比8块再生率高，先暗处理比不暗处理再生率高。

抗生素对‘考密斯’梨叶片不定梢诱导的影响

研究了氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)、卡那霉素(Km)和新霉素(Nm)对‘考密斯’叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响。结果表明,Cef对‘考密斯’叶片分化影响较小,当浓度达500mg/L时,出愈率和不定梢再生率分别为93.33%的51.48%,与对照差异不显著;Amp浓度在50～100mg/L时,对‘考密斯’叶片再生无显著影响,只有当Amp浓度高于100mg/L时,‘考密斯’的不定梢再生率才受到显著抑制;‘考密斯’对Carb的发应较为敏感,其浓度为50mg/L时,出愈率和不定梢再生率已降低到85.56%和25.00%,与对照差异极显著,浓度为200mg/L时,完全抑制了‘考密斯‘的不定梢再生;Km浓度为10mg/L时,已完全抑制了不定梢的再生,当Km浓度增加到60mg/L时,‘考密斯’叶片全部白化死亡;Nm浓度为10mg/L时,极显著的抑制了‘考密斯’叶片再生,当浓度达40mg/L时,已无不定梢发生。

西洋梨品种‘红考密斯’的组织培养及离体叶片不定梢再生

以西洋梨(Pyrus communis L.)品种‘红考密斯’新生长的半木质化嫩枝茎段为外植体,促使腋芽萌发获得无菌试管苗;以试管苗为试材,研究基本培养基、外源植物生长物质对增殖和生根的影响;以试管苗的离体叶片为外植体,研究植物生长物质的种类和浓度对叶片不定梢再生的影响。结果表明,试管苗适宜的增殖培养基为MS+0. 5 mg·L^(-1)6-BA+0. 1 mg·L^(-1)TDZ+0. 3 mg·L^(-1)IBA;适宜的壮苗培养基为MS+0. 1mg·L^(-1)TDZ+0. 3 mg·L^(-1)IBA;适宜的生根培养基为1/2MS(仅MS大量元素减半)+0. 3 mg·L^(-1)NAA+20 g·L^(-1)蔗糖,生根率为82. 2%,平均单株根数为3. 3条;叶片不定梢再生的最佳培养基为:NN69+2 mg·L^(-1)6-BA+0. 3 mg·L^(-1)IBA,不定梢再生率为76. 8%,平均每叶不定梢数为1. 2个。

梨成熟胚子叶不定梢诱导

获得了白梨（PyrusbretschneideriRehd．）中鸭梨和砂梨中晚三吉梨成熟胚子叶的再生不定梢。2个品种达到最高不定梢再生率的培养基都是1／4MS大量元素，附加生长调节剂5mg·L-1BA和0．5mg·L-1NAA，再生率分别达到93．3％和100％。

乙烯抑制剂AgNO_3对梨叶片再生不定梢的促进作用

该实验研究了乙烯抑制剂ＡｇＮＯ３对梨叶片再生不定梢的促进作用。ＡｇＮＯ３浓度在０．１～８ｍｇ／Ｌ范围内对叶片再生不定梢都有明显的促进作用。添加ＡｇＮＯ３２ｍｇ／Ｌ的培养基上，叶片不定梢再生率最高，达７５％，而不加ＡｇＮＯ３的对照培养基上，再生率仅为１５％。

甜樱桃品种吉列玛叶片再生不定梢的研究

在基本培养基NN69或WPM上附加BA和低浓度的NAA ,IAA ,IBA作培养基 ,诱导甜樱桃品种吉列玛试管苗的叶片产生了不定梢。以WPM附加BA 3mg/L和IAA 0 .3mg/L的处理 ,不定梢再生率最高 ,为 33.3%。

西洋梨“丰产”叶片不定梢再生

以西洋梨品种“丰产”试管苗叶片为外植体，研究了不同培养基及乙烯抑制剂ＡｇＮＯ３ 对叶片不定梢再生的影响。在ＮＮ６９ ＋ ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ ＩＡＡ０ ．３ｍｇ／Ｌ 培养基上，暗培养３ 周转光下培养，获得了最高不定梢再生率，达１００ ％ 。ＡｇＮＯ３ 对叶片不定梢再生也表现出促进作用。在不加ＡｇＮＯ３ 的ＭＳ＋ ＢＡ５ ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０ ．３ ｍｇ／Ｌ 培养基上暗培养３ 周，再生率仅为２０ ％ ，附加ＡｇＮＯ３ ０ ．１ｍｇ／Ｌ，再生率可达６０ ％

金花梨叶片不定梢诱导研究

以金花梨 (PyruspyrifoliaNak .cv .Jinhua)试管苗叶片为试材获得了再生不定梢。在培养基NN69+BA 3mg/L +IAA 0 .3mg/L +蔗糖 3 %上 ,先暗培养 3周后转光下培养 ,不定梢再生率最高 ,达 1 0 0 %。