微生物酶不对称水解合成S(+)-布洛芬的研究 Ⅱ.反应条件和产物提取

皮状丝孢酵母具有较强不对称水解底物专一性.在试验的五种布洛芬消旋酯中,水解甲酯和异丙酯生成s(+)-布洛芬ee可达97%,乙酯为93%以上;而水解活性以乙酯最强,转化率高于30%.不对称水解最适pH6.5—7.0;温度在28—37℃范围内拆分能力无明显差别.该酵母的水解酶为胞内酶,将酵母细胞制成两酮干粉进行水解可提高立体专一性.产物S(+)-布洛芬可借助于酸碱反应和有机溶剂提取得到,同时回收未水解的酯.

微生物酶不对称水解合成S(+)-布洛芬的研究 Ⅰ.高度立体选择性菌株的筛选

从361株细菌和酵母菌中分别筛选到12株可不对称水解布洛芬乙酯生成R(-)-布洛芬的细菌(5株菌对映体过量(ee)可达85%)和15株具有不对称水解布洛芬乙酯活性的酵母菌,其中皮状丝孢酵母T158生成S(+)-布洛芬,ee可超过92%.该酵母菌最适碳源为葡萄糖,浓度以1.0—1.5%适宜,蛋白胨浓度低于0.3%或高于0.5%对水解拆分均不利.酵母膏的加入显著提高水解活性,最适浓度0.3%.在培养基中添加表面活性剂吐温80(0.2%)既可提高拆分专一性,又能增强水解能力.

脂肪酶产生菌的筛选及不对称水解合成S-(+)-萘普生

从 1 6个土样中分离获得一株脂肪酶产生菌E 5 3# ,该菌可优先水解S ( +) 萘普生甲酯为S ( +) 萘普生 ,ee值可超过 87%。该菌经初步鉴定为芽孢杆菌。最佳产酶培养基为葡萄糖 0 .5 %、蛋白胨 0 .5 %、酵母膏 0 .2 %。 0 .5 %的橄榄油 ,能诱导脂肪酶的大量产生。

微生物酶催化布洛芬乙酯的不对称水解

从７００余株微生物中筛选到一株红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｓｐ．）ＬＹ－９５，具有高度选择性水解布洛芬乙酯的能力。该酵母菌ＬＹ－９５在最适摇瓶发酵的培养条件下，（Ｓ）－（＋）－布洛芬产率最高达５．１６ｇ／Ｌ，ｅｅ％为９０％。

有机相酶法不对称水解乳酸乙酯

探讨了在有机介质中酶催化外消旋乳酸乙酯不对称水解制备L-乳酸的可行性。研究了反应介质、不同来源的酶、摇床转速、水含量、乳酸乙酯浓度及温度等因素对反应的影响。结果表明,N435的活性和选择性较高,叔丁醇和异辛烷的混合溶剂(体积比为1∶1)为最合适的反应介质,其余最适条件为:摇床转数200r·min-1、水含量(水与底物的质量比)1∶5、乳酸乙酯浓度0·27g·ml-1、酶浓0·8g·mol-1、反应温度60℃,在此条件下反应16h得产物ee值为90·02%,产率为28·69%。最后研究了乳酸乙酯不对称水解的动力学,结果表明反应符合米氏方程,属于双底物抑制的双乒乓机制,并考察了D-乳酸乙酯和D-乳酸在建立反应动力学模型时的影响。

盐对酶促对羟基苯甘氨酸酯不对称水解的影响

本文探讨了以盐为添加剂时,盐的种类、酶的种类及底物结构对酶促外消旋对羟基苯甘氨酸酯不对称水解的影响。结果表明,在所研究的17种盐中,盐酸盐及草酸盐对Novozym 435催化对羟基苯甘氨酸甲酯水解无影响,磷酸钾仅可加快反应速度,碳酸氢盐、铵盐磷酸钠、醋酸钠均既能增加反应速度又能提高对映体选择性;其中碳酸氢铵为最适添加剂,可使产物对映体选择率E值达78。添加碳酸氢铵可分别提高蛋白酶Alcalase催化该反应的反应初速度及E值1.30倍和3倍;却使蛋白酶Papain催化同一反应的反应初速度和E值下降35%及60%。以碳酸氢铵为添加剂,Novozym 435催化对羟基苯甘氨酸乙酯和丙酯的E值可由5、23分别提高至25、28。

米曲霉3042细胞催化N-乙酰-D,L-3-三甲基硅丙氨酸不对称水解的研究

研究了米曲霉3042细胞催化N-乙酰-D,L-3-三甲基硅丙氨酸不对称水解反应,系统探讨了振荡速度、缓冲液浓度、反应温度和pH值对反应速度和反应选择性的影响。结果表明,上述因素对N-乙酰-D,L-3-三甲基硅丙氨酸不对称水解反应速率和反应选择性均有较显著的影响。振荡速度以170r?min?1为宜,适宜的磷酸盐缓冲液浓度为0.10mol?L?1,合适pH值为7.0,合适反应温度为50℃。在该优化反应条件下,以1g游离的米曲霉3042菌丝体催化10mmol?L?1N-乙酰-D,L-3-三甲基硅丙氨酸不对称水解,反应初速度为0.42mmol?L?1·h?1,反应79h,底物转化率为49.5%,产物L-三甲基硅丙氨酸的e.e.为92.7%。

有机介质中酶促对羟基苯甘氨酸酯不对称水解的研究

为了进一步探讨利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸酯不对称水解反应制备对映体纯对羟基苯甘氨酸的可能,优化反应条件,研究了不同来源的酶、有机介质及底物结构等因素对该反应的影响。结果表明,脂肪酶Novozym 435为最适催化剂;在所研究的四种有机溶剂中叔丁醇为最适有机介质;最适底物为对羟基苯甘氨酸甲酯。同时在该反应体系中,脂肪酶Novozym 435表现出较好的热稳定性和操作稳定性。

有机溶剂/缓冲液双相体系中绿豆环氧化物水解酶催化环氧苯乙烯不对称水解反应

研究了有机溶剂/缓冲液双相体系中绿豆环氧化物水解酶高立体选择性地催化外消旋环氧苯乙烯水解生成(R)-苯基乙二醇反应.结果表明,与单水相反应体系相比,有机溶剂/缓冲液双相反应体系不仅有效地抑制环氧苯乙烯的非酶水解反应,而且明显提高底物的浓度,产物的收率和ee值更高.在所考察的不同有机溶剂中,正己烷不仅能较好地溶解底物,而且对酶的毒性较小,从而导致反应的初速率较快,产物的收率和ee值较高,是最适宜有机相.在两相体积比(正己烷/缓冲液)为1:1,底物浓度为20mmol/L,缓冲液pH=6.5以及35oC的最适反应条件下,反应的初速率、产物的收率和ee值分别为5.42mmol/(L·h),49.2%和94.3%.

脂肪酶不对称水解兽药中间体对甲砜基苯丝氨酸乙酯的初步研究

对脂肪酶不对称水解对甲砜基苯丝氨酸乙酯进行研究,确立了对甲砜基苯丝氨酸乙酯酶促不对称水解的最适条件。微水有机溶剂体系为叔丁醇,脂肪酶为Novzyme 435。并以此为基础确定了最适的催化拆分条件:底物浓度为2.5 mg·mL-1,酶添加量为2.0 mg·mL-1,摇床转速为160 r·min-1,反应介质水含量为0.2%,微水相pH值为8.0,反应温度为30℃。Zn2+的加入能加快底物的转化率,但同时严重影响E值。在最适条件下反应192 h,DL-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯的底物对映体过量百分数由最初的35.13%上升到了92.54%,所对应的底物转化率为68.62%。

Novozym435催化不对称水解3-(4-氟苯基)-戊二酸二甲酯的动力学研究

对Novozym 435在以甲基叔丁基醚(MTBE)为助溶剂的水相体系中不对称水解3-(4-氟苯基)-戊二酸二甲酯(3-DFG)的动力学进行了研究。考察了摇床转速、酶浓度、底物浓度、产物浓度等因素对该水解反应的影响。结果表明该水解反应的最佳转速为200 r?min?1,内扩散的影响可忽略。底物3-(4-氟苯基)-戊二酸二甲酯和产物3-(4-氟苯基)-戊二酸单甲酯(3-MFG)对Novozym 435的催化水解活性不存在抑制作用。此外,该反应受副产物甲醇的竞争性抑制,通过非线性回归求得该体系相应的动力学参数值:米氏常数Km值为0.24 mol?L?1,抑制常数Ki值为0.39 mol?L?1,最大反应速度Vmax值为2.39 mmol?L?1?h?1。

有机溶剂-水双液相体系脂肪酶不对称水解合成S-(+)-萘普生

采用有机溶剂－水双液相体系作为反应介质，并用键合有—Ｃ６Ｈ５的无定型多孔硅胶作为分散剂增大两相间的接触面，用圆柱状假丝酵母脂肪酶对萘普生甲酯进行不对称水解．考察了酶浓度、体系ｐＨ值、温度、分散剂对反应的影响．当转化率为２４．３％时，产品萘普生的对映体过量值（ｅｅ）为９４．９％，剩余底物萘普生甲酯的对映体过量值（ｅｅ）为３０．５％，当以异辛烷作为有机相时，该体系酶催化水解的对映体比率（Ｅ）约为５０．

脂肪酶不对称水解含酯基的异核金属簇合物(英文)

对脂肪酶催化含酯基的异核金属簇合物的水解反应进行了初步研究 .发现脂肪酶对簇合物的酯基进行水解时确有不对称效应 ,同时簇骨架中的重金属使酶失活 .尽管不知道水解产物的 e.e.值 ,但从旋光结果可以看出 。

脂肪酶催化外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯水解制备对映体纯D-对羟基苯甘氨酸的新方法

基于在反应体系中添加碳酸氢铵可有效地促进酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解这一有趣现象的发现 ,探讨了利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解制备对映体纯 D 对羟基苯甘氨酸及其衍生物的可能性 ,研究了不同来源的酶、摇床转速、水含量、对羟基苯甘氨酸甲酯浓度、反应介质及温度等因素对该反应的影响 .结果表明 ,在所研究的 11种酶中脂肪酶Novozym 4 35对该反应的催化活性和对映体选择性较高 ,叔丁醇为最合适的反应介质 ,最适水含量为0 4 % (V/V) ,对羟基苯甘氨酸甲酯的适宜浓度为 2 0mmol/L ,最适摇床转速和反应温度分别为 130r/min和 30℃ .在此优化条件下反应 2 6h后 ,底物转化率和产物ee分别为 39 8%和 95 2 % .

(3aS,6aR)-1,3-二苄基-4-氢-4H-呋喃[3,4-d]咪唑-2,4(1H)-二酮在离子液体中的酶催化水解反应(英文)

D,L-(3 aS,6 aR)-1,3-二苄基-4氢-4H-呋喃[3,4-d]咪唑-2,4(1H)-二酮在BM ImBF4离子液体中,于45℃酶催化水解反应8 h得D-式异构体,收率45.0%,e.e.值90.4%。

水解酶在制备旋光性农药中的应用

介绍了可用于制备光学活性化合物的水解酶的基本特点及其催化反应的基本要求 ,并从该类酶所催化的立体选择性水解、酯化与酯交换反应方面分别列举了制备可作为旋光性农药或其中间体的醇、酸及羧酸酯的实例 ,同时对水解酶在旋光性农药制备中的应用前景进行了讨论。

猪肝酯酶在不对称合成中的应用

猪肝酯酸PLE(Pig Liver Esterase)对双酯具有特殊的不对称水解性,而且可获得高产率和高光学纯的不对称水解产物。本文简要介绍PLE作为一种有效的酶催化剂,在温和的条件下,对双酯的不对称水解反应和在不对称合成中应用的近况。

2-芳基丙酸类消炎药的酶催化拆分研究进展

介绍了 2 -芳基丙酸酯、2 -芳基丙腈和 2 -芳基丙酰胺的酶催化不对称水解 ;2 -芳基丙酸的酶催化不对称酯化反应拆分可得光学活性的 2

脂肪酶Novozyme 435选择性催化2,2-二甲基环丙烷甲酸乙酯合成S-(+)-2,2-二甲基环丙烷甲酸

采用脂肪酶催化外消旋2,2-二甲基环丙烷甲酸乙酯(DMCPE)不对称水解合成西司他丁关键手性中间体S-(+)-2,2-二甲基环丙烷甲酸(S-(+)-DMCPA).比较了5种不同来源的脂肪酶,从中优选出立体选择性较高和催化活性较高的脂肪酶Novozyme 435,系统考察了影响该酶催化不对称水解反应的关键因素,获得了优化的生物催化工艺条件.结果表明,当脂肪酶Novozyme 435用量为16g/L,底物DMCPE浓度为65mmol/L时,以pH值为7.2的磷酸缓冲液(1mol/L)为反应介质,30℃反应64h,产物的收率和光学纯度分别为45.6%和99.2%.脂肪酶Novozyme 435催化DMCPE不对称水解制备S-(+)-DMCPA工艺的产物光学纯度高,路线可行,并且酶可重复使用,具有良好的工业化应用前景.

磁性固定化青霉素酰化酶催化拆分(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯

将青霉素酰化酶(PGA)固定于饱和磁化率为6.5 emu/g、富含环氧基的大孔磁性聚合物微球(GM)上,所得磁性固定化酶PGA/GM用于在水相中催化(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯(2-CGM)发生不对称水解反应;在20℃下反应48 h,所得(S)-2-CGM和(R)-2-氯苯甘氨酸的对映体过量值分别为98.0%和58.8%,底物总转化率为62.5%。PGA经GM固定化后,催化(R,S)-2-CGM水解反应的活性和对映体选择性均有显著提高。PGA/GM具有较强的磁响应性,在外加磁场的作用下能进行快速分离和洗涤,机械损失小;经6次循环使用,其活性和对映体选择性未出现大幅衰减。