载脂蛋白E基因缺失促进不成熟髓系细胞的增殖和向单核细胞的极化

目的研究载脂蛋白E（ApoE）对小鼠骨髓来源的CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞增殖和分化的影响,阐述ApoE基因敲除小鼠（ApoE-/-）致动脉粥样硬化敏感的炎症相关新机制。方法 6-8周龄的ApoE-/-小鼠和C57/B6野生型小鼠,采用流式细胞术分析骨髓、脾脏和外周血中CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞、CD11b＋Gr-1-单核细胞和CD11b-Gr-1＋粒细胞的百分比的变化。应用定量RT-PCR和免疫荧光染色,鉴定ApoE基因和蛋白在CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞的表达。从骨髓分选CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞,体外培养24 h,流式细胞术分析ApoE基因缺失对髓系细胞周期改变的作用。结果 （1）ApoE基因缺失显著增加ApoE-/-小鼠外周血CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞和CD11b＋Gr-1-单核细胞;（2）ApoE基因缺失促进ApoE-/-小鼠脾脏和骨髓中CD11b^＋Gr-1^＋不成熟髓系细胞的增殖;（3）定量RT-PCR和免疫荧光染色证实ApoE在CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞有较高水平的表达;（4）ApoE基因缺失可以促进CD11b^＋Gr-1^＋细胞周期自G1期进入S期。结论ApoE基因缺失显著增加ApoE-/-小鼠脾脏和骨髓中CD11b^＋Gr-1^＋不成熟髓系细胞的增殖、巨噬细胞分化和动员。ApoE基因缺失促进CD11b^＋Gr-1^＋髓系细胞增殖与其促进细胞周期进入S期有关。

LDLR缺失促进CD11b^+ Ly6C^+单核细胞的分化和CD11c^+树突状细胞的成熟

目的研究低密度脂蛋白受体敲除(LDLR^(-/-))对小鼠CD11b^+髓系免疫细胞增殖和分化的影响,探索异常免疫细胞反应在动脉粥样硬化发生中的炎症相关新机制。方法 6~8周龄的LDLR^(-/-)小鼠和对照野生型(WT)C57小鼠分别给予普通饮食和高脂饲养12周。采用流式细胞术分析外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞亚群,尤其是CD11b^+Gr-1^+髓系免疫细胞、CD11b^+Ly6C+单核巨噬细胞和CD11b^+CD11c^+树突状细胞表达情况,同时检测Lin^-Sca-1^-CD34^+c Kit^+共同髓系祖细胞(CMP)在LDLR^(-/-)小鼠骨髓内表达情况。最后应用^(125)I标记anti-CD11b作为分子探针,在体无创监测LDLR^(-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块的炎症微环境。结果 (1)在普通饮食和高脂饲养状态下,LDLR缺失均可显著增加LDLR^(-/-)小鼠外周血和脾脏内CD11b^+和CD11b^+Gr-1^+髓系细胞的表达。(2)LDLR^(-/-)小鼠外周血和肝脏中CD11b^+Ly6C^+单核巨噬细胞的表达增加;CD11b^+CD11c^+树突状细胞在LDLR^(-/-)小鼠脾脏中的表达增加。(3)普通饮食状态下,CMP的百分比在LDLR^(-/-)小鼠骨髓中较WT小鼠增加,但在高脂饲养时减少。(4)以CD11b为炎症分子靶标,可用SPECT/CT实时监测LDLR^(-/-)小鼠动脉粥样斑块。结论 LDLR缺失显著增加CD11b^+Gr-1^+髓系免疫细胞的增殖和动员,促进LDLR^(-/-)小鼠单核巨噬细胞的分化和树突状细胞的成熟。以CD11b^+髓系细胞为靶标,可以在体监测动脉粥样斑块的炎症微环境。