人类不脱钙骨组织的免疫组化与原位杂交

目的探讨在人类不脱钙骨组织切片上行免疫组化和原位杂交技术的可行性。方法采用Erben报道的改进的甲基丙稀酸甲酯低温塑料包埋方法包埋人类髂骨活检组织,制备不脱钙骨组织切片。切片行Goldners三色法及甲苯胺蓝染色观察骨组织的形态结构;采用免疫组化SP法和原位杂交技术检测骨组织中碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)蛋白和mRNA的表达。结果组织形态学上,两种染色法均示骨组织中成骨细胞、破骨细胞及骨细胞清晰可辨,钙化的骨基质与类骨质分界清楚。免疫组化和原位杂交示FGF2蛋白和mRNA表达于骨髓腔中一些单个核细胞及少许成骨细胞的胞浆中。此外,骨髓基质亦可见FGF2蛋白和mRNA的阳性表达。结论低温塑料包埋方法制备的人类不脱钙骨组织切片可同时进行免疫组化和原位杂交的检测观察。

含植入物不脱钙骨组织病理切片技术在骨组织形态学研究中的应用

进行脱钙处理的常规石蜡包埋组织切片,会对骨缺损修复过程中矿化程度的研究造成一定的影响,可能导致骨修复关键信息的丢失。在与骨整合相关的骨修复材料的实验研究中,采用不脱钙骨组织病理切片技术可能具有独特的优势,其已被广泛应用于骨修复材料的临床前动物实验研究中。该研究就含植入物不脱钙骨组织病理切片技术及该技术在骨修复材料的骨组织工程研究中的应用情况作简要概述。

冰冻切片法观察不脱钙骨组织的荧光分布

目的介绍一种不脱钙骨组织的冰冻切片法,通过观察骨和软骨内的荧光分布,探讨该方法的可行性。方法取健康成年雄性绿色荧光蛋白转基因SD大鼠膝关节,经包埋剂包埋,置于冰冻切片机中,将表面涂有合成橡胶的薄膜黏附于包埋块表面,行膝关节组织切片。荧光显微镜及光镜下观察切片组织内荧光表达及结构;并行Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫荧光染色和HE、甲苯胺蓝、茜素红染色,观察软骨及骨的结构及荧光分布特征。结果制备的大鼠膝关节冰冻切片厚度均为6μm,大体观察示关节各结构均完整切割,光镜下能清晰分辨切片软骨各层细胞形态以及软骨下骨、骨小梁排列走行。荧光显微镜下观察,可见关节周围软组织、软骨及骨组织呈绿色荧光,Ⅰ型胶原在骨组织表达,Ⅱ型胶原在软骨组织表达。HE染色及甲苯胺蓝染色能清晰分辨软骨层形态结构。茜素红染色示软骨下骨板、半月板内部组织结构完整,而且胫骨近端的皮质骨连续性存在。结论采用冰冻切片法制备不脱钙骨组织切片,可直接观察骨、软骨组织内荧光物质的分布,缩短骨组织切片的制备周期。