Percoll不连续密度梯度离心法分离红螯光壳螯虾血细胞

建立了利用Percoll不连续密度梯度离心分离红螯光壳螯虾血细胞的方法,并对配制分离体系的缓冲液以及分离体系的密度组成进行了优化。结果显示,由20%、65%和100%的Percoll组成的分离体系分离效果最优。在转速为1 810 r/min的条件下离心20 min之后,可将红螯光壳螯虾血细胞分为SGC与GC 2个细胞层。经流式细胞术分析,发现细胞层纯度均在95%以上,细胞死亡比率低于1.5%,可用于后续的细胞功能分析。此方法简单有效,为后续研究螯虾的免疫防御机制及病害防治方法奠定了基础。

黄鳍棘鲷重组IL-1β的表达及生物学活性检测

将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达。采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性。经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β(Recombinant Interleukin 1β,rIL-1β)。采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1.080g/ml的界面上可以有效富集白细胞。用不同终浓度的rIL-1β和5μg/ml脂多糖(LPS)刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20ng/ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5μg/mlLPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性。

比较两种精子处理技术对体外受精胚胎质量的影响

目的 比较经两种精液处理技术处理的精液对成熟卵的体外受精、卵裂及胚胎质量的影响。方法 将 1999年 12月～ 2 0 0 0年 4月在重庆妇产科医院生殖与遗传中心进行体外受精胚胎移植 (IVF ET)治疗的 6 0例患者以采卵日时间随机分为两组 ,将其精液分别用上游法和两层不连续 percoll密度梯度离心法处理。结果 2 5例上游法组受精率、卵裂率、优质胚胎率分别为94 5 0 %、98 75 %、6 0 34% ;35例两层不连续percoll密度梯度离心技术组受精率、卵裂率、优质胚胎率分别为 94 2 1%、96 91%、6 8 75 %。结论 两种精液处理技术处理的精子在成熟卵的受精率、卵裂率上无差别 ,而两层不连续

从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究

目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。

恶性胸水淋巴细胞对自体肿瘤细胞杀伤活性的研究

兰州医学院第一附属医院郭胤仕等采用不连续密度梯度离心法,分离恶性胸水淋巴细胞(MPEL)及肿瘤细胞,比较了MPEL与外周血淋巴细胞(PBL)对自体肿瘤细胞(ATC)的杀伤活性。