食管黏膜上皮癌变过程中与细胞骨架蛋白tensin同源的磷酸酯酶基因的表达及意义

目的探讨与细胞骨架蛋白tensin同源的磷酸酯酶基因(PTEN)在食管黏膜上皮癌变过程中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测20例正常食管黏膜、20例食管上皮非典型增生、24例原位癌、44例食管鳞癌组织中PTEN表达情况,并探讨PTEN与食管鳞癌病理分级的关系。结果正常食管黏膜、非典型增生、原位癌及食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率分别为100%、85.00%、70.83%和45.45%,原位癌、食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性率低于正常食管黏膜(P<0.05),食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性率低于原位癌和食管上皮非典型增生组织(P<0.05)。高分化、中分化及低分化食管鳞癌组织中在患者中PTEN蛋白阳性表达率分别为75.00%(15/20)、21.43%(3/14)、20.00%(2/10),高分化食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著高于中分化和低分化食管鳞癌组织中(P<0.05),中分化和低分化食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率无明显差异(P>0.05)。结论PTEN表达降低可能与食管鳞状上皮癌变有关,并可能在食管癌早期形成与发展中起有重要的作用。

集落刺激因子1、肺癌食管癌缺失基因1、磷酸酯酶与张力蛋白同源物在骨肉瘤中的表达及对患者预后的预测价值

目的探讨集落刺激因子1(CSF1)、肺癌食管癌缺失基因1(DLEC1)、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)在骨肉瘤组织中的表达及对患者预后的预测价值。方法取62例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和43例软骨瘤患者的软骨瘤组织,免疫组化法检测CSF1、DLEC1、PTEN蛋白的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CSF1、DLEC1、PTEN单独及联合检测对骨肉瘤患者预后的预测价值。结果骨肉瘤组织中CSF1蛋白的阳性表达率明显高于软骨瘤组织,DLEC1、PTEN蛋白的阳性表达率均明显低于软骨瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访2年,62例骨肉瘤患者死亡23例,生存39例,总生存率为62.90%(39/62)。CSF1+DLEC1+PTEN检测预测骨肉瘤患者预后的AUC为0.886(95%CI:0.802~0.970),高于三者单独检测。结论骨肉瘤组织中CSF1阳性表达率较高,DLEC1、PTEN阳性表达率较低,CSF1、DLEC1、PTEN联合检测对骨肉瘤患者的预后有一定的评估价值。

脊髓小脑共济失调症相关蛋白-3、转移抑制基因23和磷酸酯酶与张力蛋白同源物在胶质瘤术后组织中的表达及意义

目的检测脊髓小脑共济失调兆(Ataxin)-3、转移抑制基因(nm23)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)在胶质瘤中的表达及其临床价值。方法 89例胶质瘤并进行手术治疗的患者作为观察组,70例正常脑组织作为对照组,应用免疫组化检测两组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达。结果观察组Ataxin-3、nm23和PTEN表达的阳性率明显低于对照组。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达与肿瘤的体积、有无坏死及分级密切相关。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达无相关性。结论胶质瘤中Ataxin-3、nm23和PTEN均低表达,三者起到的抑制肿瘤生长的作用。联合检测Ataxin-3、nm23和PTEN的表达可能是判断肿瘤生物学行为的重要指标。

肿瘤抑制基因PTEN对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的影响

目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达变化对体外活化肝星状细胞(HSC)纽蛋白(vinculin)的影响。方法分别将含有野生型PTEN基因及含有靶向PTEN的RNA干扰序列短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,构建体外活化大鼠肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型;应用免疫荧光法并结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测活化HSC的vinculin分布及表达。实验分组:(1)Control组:以无血清无抗生素的DMEM培养液代替腺病毒液转染体外活化HSC;(2)Ad-GFP组:以仅带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的载体空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC;(3)Ad-PTEN组:以带有GFP基因并携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad-PTEN转染体外活化HSC;(4)Ad-shRNA/PTEN组:以带有GFP基因并携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC。结果外源性野生型PTEN基因及靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,并成功构建体外活化肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型。HSC的vinculin蛋白主要表达于胞浆,4组HSC的vinculin亚细胞分布未发生明显变化。Ad-PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(251.78±12.68)明显低于Control组(381.13±9.12)及Ad-GFP组(383.87±12.15),P<0.05;而Ad-shRNA/PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(770.77±20.12)显著高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组之间HSC的vinculin蛋白荧光强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PTEN表达变化对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的亚细胞分布无明显影响,但PTEN过表达可下调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达,而PTEN低表达则可上调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达。

第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因人脑胶质瘤SHG44细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白下调表达

目的 观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）对人脑胶质瘤SHG44细胞凋亡及凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）表达的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法 将SHG44细胞常规条件下培养于含10％小牛血清的RPMI 1640培养基中.脂质体介导法将pBP-PTEN和pBP载体分别转染对数生长期的SHG44细胞,筛选阳性细胞克隆,将分别成功转染pBP-PTEN和pBP载体的SHG44细胞设为SHG44-pBP-PTEN和SHG44-pBP细胞.利用原位杂交方法分别检测SHG44-pBP-PTEN、SHG44-pBP和SHC-44细胞.通过免疫组织化学方法检测PTEN基因在3种细胞中的表达,采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达.结果 PTEN基因转染的SHG44细胞有PTEN基因和蛋白的表达.透射电镜下可见SHC-44-pBP-PTEN细胞核染色质浓缩、边集,细胞核碎裂,胞质浓缩;并检测到明显的凋亡小体,为典型的肿瘤细胞凋亡表现.SHG44和SHG44-pBP细胞超微结构未见异常.流式细胞仪示细胞周期从G1期到S期发生抑制,并且在G1期峰前出现明显的凋亡峰,SHG44细胞G1期、S期、G2期和凋亡（AP）期所占比例分别为61.2％、28.2％、8.3％和2.3％,SHG44-pBP细胞分别为64.1％、24.6％、8.9％和2.4％,SHG44-pBP-PTEN细胞分别为75.3％、9.6％、2.2％和12.9％.SHG44-pBP-PTEN细胞的生长速度较另两组细胞明显降低.细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带;bcl-2的表达也显著下调.SHG44-pBP细胞的平均荧光强度（MIF）为对照细胞的100.4％（P＞0.05）,而SHG44-pBP-PTEN细胞的MIF为对照细胞的40.2％,两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 PTEN基因可诱导SHG44细胞凋亡,并下调bcl-2蛋白的表达,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一.

第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因表达下调促进肝细胞癌血管生成拟态形成

目的探讨磷酸酶第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）表达与肝癌血管生成拟态（VM）形成的关系。方法收集85例肝细胞癌患者的组织标本及临床资料，过碘酸希夫（PAS）／CD31双重染色及免疫组织化学法观察肝癌组织中VM的存在和PTEN的表达，分析VM存在与临床预后指标及PTEN表达的相关性；三维细胞培养观察肝癌细胞株SMMC-7221及HepG2的VM形成，实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测PTENmRNA表达。结果85例肝癌标本中17例存在VM结构，VM阳性组门脉癌栓阳性率（52．9％）高于阴性组（17．6％），生存时间为（29．9±3．6）个月低于阴性组的（42．2±5．5）个月，差异有统计学意义（P〈0．05）；PTEN表达VM阳性组（35．3％）低于VM阴性组（63．2％），差异有统计学意义（P〈0．05）；三维培养体系中肝癌细胞株SMMC-7221能够形成VM结构，而HepG2不能；SMMC-7221中PTEN的表达低于HepG2，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肝细胞癌中PTEN表达与VM的形成及患者临床预后相关。

联合靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭的机制

目的 观察LY294002联合重组腺病毒Ad-第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）对胶质瘤LN229细胞株增殖和侵袭的影响.方法 应用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术、划痕实验和Transwell细胞侵袭实验评价LY294002联合Ad-PTEN对LN229细胞增殖、侵袭的抑制作用;Western blot检测PTEN/磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路中蛋白表达的变化.结果 与二甲基亚砜（DMSO）组、空载组和LY294002组比较,联合组细胞生长明显受到抑制,第6天细胞增殖率仅为38.68％;细胞周期分析结果表明,联合组细胞G0/G1期比例为75.49％,高于DMSO组、空载组和LY294002组的51.62％、50.31％、66.35％,差异有统计学意义（P＜0.05）;Transwell法分析结果显示,联合组穿过小室的细胞数明显减少,仅为（15.58±1.45）个,低于DMSO组、空载组和LY294002组的（27.63±4.36）、（46.67 ±3.61）、（49.28±5.37）个,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测DMSO组、空载组、LY294002组和联合组PTEN蛋白相对表达量分别为0.13 ±0.04、0.26±0.03、0.52±0.07和0.83±0.16,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白相对表达量分别为1.30±0.07、1.73±0.07、0.87 ±0.17和0.35±0.08,增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白相对表达量为2.72±0.02、3.13±0.06、0.63 ±0.13和0.38±0.09,细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白相对表达量为1.72±0.09、1.18 ±0.15、0.49±0.11和0.18 ±0.14,磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）蛋白相对表达量为0.95±0.14、1.09 ±0.16、1.29±0.08和0.65 ±0.11,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白相对表达量为0.73 ±0.19、0.87±0.12、0.61±0.10和0.23±0.08,表明联合组PTEN蛋白表达显著上调,p-Akt、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、p-FAK表达显著下调,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 LY294002联合Ad-PTEN通过调控PI3K/Akt信号通路对胶质瘤LN229细胞株的增殖和侵袭具有联合抑制作用。

第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因抑制剂对神经干细胞增殖分化的影响

目的观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)抑制剂牛细小病毒bpV(pic)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法取胚胎16d SD大鼠的大脑皮层,制成干细胞悬液,细胞分组为:A组(对照组):不做任何处理;B组(实验组):bpV处理组(培养液中含bpV)。于第5天用免疫荧光染色观察两组干细胞球的数量,行细胞计数试剂盒(CCK-8)试验检测NSCs增殖,免疫荧光染色检测NSCs分化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组细胞在第5天时PTEN和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达。结果实验组的每个低倍视野(×50)干细胞数量为60±5,明显多于对照组(40±3,P<0.01)。CCK-8试验证实实验组在425 nm处的吸光度值为0.997±0.085,高于对照组(0.788±0.083,P<0.01)。实验组NSCs分化为神经元的百分率为(27.860±1.927)%,明显多于对照组[(13.120±1.130)%,P<0.01];而分化为胶质细胞的百分率为(61.900±1.840)%,明显少于对照组[(77.520±1.035)%,P<0.01];分化为少突胶质细胞的百分率实验组为(5.320±0.975)%,对照组为(4.460±0.586)%(P<0.05);分化为其他细胞的百分率实验组为(4.780±0.572)%,对照组为(4.900±1.208)%(P>0.05)。实验组NSCs中PTEN的表达量是照组NSCs中PTEN表达量的2.13倍(P<0.01),而实验组NSCs中mTOR的表达量是照组NSCs中mTOR表达量的3.62倍(P<0.01)。结论PTEN抑制剂bpV(pic)可促进神经干细胞增殖,并在一定程度上促进神经干细胞向神经元分化。

抑癌基因第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞株生物学行为的影响

目的观察抑癌基因第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)表达对人甲状腺乳头状癌细胞株(TPC-1)生物学行为的影响。方法在人TPC-1细胞株中转染PTEN过表达载体(pBP-PTEN),同时转染空载体(pBP)作为对照组,采用Western blot方法检测PTEN在人TPC-1细胞株中的表达,噻唑蓝比色法(MTT)实验通过检测吸光度(A)值来观察PTEN对TPC-1细胞株细胞增殖能力影响,通过Transwell小室检测细胞数目来观察PTEN对TPC-1细胞株细胞侵袭和迁移能力的影响,采集数据以均值±标准差(Mean±SD)表示,应用t检验。结果Western blot结果显示过表达载体组的TPC-1细胞中PTEN表达水平明显高于空载体对照组,过表达载体组的TPC-1细胞增殖能力、细胞侵袭及迁移能力[A值:0.40±0.02,侵袭细胞数目:(45.76±4.11)个,迁移细胞数目:(25.62±2.89)个]明显低于空载体对照组[A值:0.75±0.03,侵袭细胞数目:(95.32±5.41)个,迁移细胞数目:(53.47±4.42)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论PTEN过表达能显著抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭、迁移能力。

第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因／雷帕霉素靶蛋白调节细胞骨架构建在神经细胞分化过程中的变化及意义

目的观察在体外诱导成人骨髓基质干细胞向神经细胞分化过程中，第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）／雷帕霉素靶蛋白（roTOR）调节细胞骨架构建的变化特征，并探讨其意义。方法从成人骨髓中分离基质干细胞，在体外经细胞因子诱导分化2周后成为神经样细胞；应用PTEN抑制剂BPV作用于该细胞，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法研究PTEN下游信号分子mTOR的表达变化；应用结合有荧光剂的鬼笔环肽染色细胞骨架，在荧光显微镜下观察细胞突起内细胞骨架的变化特征及测量细胞突起长度。结果成人骨髓来源的基质干细胞经诱导分化后，神经细胞特征性标志分子神经元特异性烯醇化酶（NSE）和B-Ⅲ微管蛋白（tubulin）表达水平增加，而神经干细胞的标志物巢蛋白表达先增加后减少（P〈0．05）；经BPV作用后mTOR的表达水平高于作用前（P〈0．05）；细胞突起生长的长度从（4．58±1．21）μm增加到（9．09±2．68）μm（P〈0．05）。结论BMSCs来源的神经细胞分化成熟时，PTEN／mTOR具有调节神经细胞突起内细胞骨架构建的能力。

微小RNA-130b通过靶向调控磷酸酯酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B通路对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡的影响

目的探讨微小RNA-130b(miR-130b)对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-130b在38例胃癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达;瞬时转染miR-130b模拟物/抑制剂、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)小干扰RNA(siRNA)进入胃癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡以及凋亡相关蛋白变化情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-130b靶向调控PTEN,Western blot检测PTEN/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达变化。结果miR-130b在胃癌肿瘤组织中表达水平显著高于癌旁组织(8.048±0.508比2.689±0.243,P<0.01);过表达miR-130b促进肿瘤细胞增殖(1.722±0.122比0.910±0.095,P<0.01),下调miR-130b抑制肿瘤细胞增殖(0.369±0.032比1.023±0.072,P<0.01),下调PTEN逆转miR-130b抑制剂的细胞增殖抑制作用(0.781±0.032比0.369±0.032,P<0.01);下调miR-130b增加肿瘤细胞凋亡率[(20.54±1.56)%比(12.86±1.35)%,P<0.05]和细胞周期G1期细胞数量[(50.50±0.78)%比(35.50±0.64)%,P<0.01],并且降低凋亡相关蛋白表达;miR-130b+PTEN-3’端非编码区(3’UTR)-wt荧光素酶活性较对照组显著降低(0.469±0.099,P<0.01),而miR-130b+PTEN-3’UTR-mut荧光素酶活性较对照组无明显变化(0.920±0.045,P>0.05),miR-130b+3’UTR-wt与miR-130b+3’UTR-mut之间荧光素酶活性差异有统计学意义(0.469±0.099比0.920±0.045,P<0.01);抑制miR-130b上调PTEN表达(2.067±0.120,P<0.01),下调磷酸化Akt(p-Akt)表达(0.501±0.115,P<0.05),过表达miR-130b下调PTEN表达(0.526±0.157,P<0.05),上调p-Akt表达(1.860±0.222,P<0.05),总的Akt表达水平无明显变化。结论miR-130b通过靶向调控PTEN/Akt通路,影响胃癌细胞BGC-823的增殖和凋亡。

外泌体中微小RNA-19a靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴介导乳腺癌耐药性的机制

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-19a通过乳腺癌阿霉素（ADM）耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体，投射电镜及Nanosight对外泌体进行观察鉴定。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的乳腺癌敏感细胞株GFP-MCF-7/S，通过细胞-细胞及细胞-外泌体共培养实验观察耐药性传递现象。实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Western blot及细胞转染技术检测miR-19a及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53（PTEN/Akt/p53）轴在耐药性发生过程中的作用。结果与MCF-7/S比较，MCF-7/A细胞中miR-19a的表达（1.03±0.16比3.56±0.58，P=0.002）显著增加，miR-19a抑制剂处理后MCF-7/A细胞对化疗药物ADM的敏感性[（41.17±10.65）%比（23.45±8.89）%，P=0.011]显著增加。电镜下观察两种乳腺癌细胞分泌的外泌体均呈圆形或椭圆形，直径为40～100 nm。荧光显微镜下对GFP的观察及细胞计数试剂盒（CCK-8）法对细胞增殖抑制率的检测结果显示ADM对MCF-7/S ＋MCF-7/A及MCF-7/S＋ MCF-7/A exos组细胞的增殖抑制率显著低于MCF-7/S＋MCF-7/S[（31.50±6.68）%比（51.20±12.44）%，P=0.006]及MCF-7/S＋ MCF-7/S exos[（27.67±6.02）%比（49.65±10.52）%，P=0.000]组细胞，且伴随着细胞miR-19a表达的增加（1.01±0.13比2.67±0.62，P=0.000）。Western blot检测结果显示外泌体中miR-19a能够通过显著抑制PTEN（1.15±0.18比0.67±0.13，P=0.000）及p53（0.99±0.18比0.49±0.11，P=0.005）蛋白的表达，增加Akt的磷酸化水平（1.15±0.18比0.67±0.13，P=0.000）促进受体细胞耐药的发生。结论miR-19a可通过外泌体包裹的形式传递乳腺癌细胞间的耐药性，进而通过对PTEN/Akt/p53轴的调控促进受体细胞耐药的发生。

第10号染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在大鼠脊髓发育过程中的表达

目的 观察第10号染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在大鼠脊髓发育过程中的表达模式.方法 选取不同发育阶段（孕15 d子鼠记为A组,出生当天大鼠记为B组,出生后7d大鼠记为C组,出生后56 d大鼠记为D组）的SD大鼠,取出其脊髓,采用Western blot法检测该通路上关键蛋白的表达水平;同时,采用免疫荧光法检测各相应蛋白在大鼠脊髓的细胞定位.结果 Western blot结果显示,A、B、C、D组PTEN与内参肌动蛋白（actin）的灰度值比分别为0.281±0.086、0.462 ±0.002、0.591±0.022、0.392±0.001,A组与其他3组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,D组与B、C组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;A、B、C、D组S6与actin的灰度值比分别为0.646 ±0.116、0.450±0.129、0.824±0.082、0.174±0.038,D组与A、C组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色结果显示脊髓神经元有丰富的PTEN与S6表达.结论 这些结果提示PTEN/mTOR信号通路可能与发育相关的表达模式,从而为中枢神经系统再生能力随着发育过程而降低这一现象提供依据.

直肠癌中第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因和Survivin的表达对新辅助放化疗后肿瘤退缩及预后的预测价值

目的:观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)和凋亡抑制蛋白生存素(Survivin)在直肠癌组织中的表达,探讨其对直肠癌新辅助放化疗(nCRT)后肿瘤退缩效果的预测价值及与预后相关性。方法:收集华中科技大学同济医学院附属普爱医院2014年1月至2016年1月行nCRT+全直肠系膜切除术(TME)+辅助化疗(aCT)的直肠癌患者78例,应用免疫组织化学染色法检测直肠癌组织中PTEN、Survivin的表达,应用Spearman等级相关检验分析PTEN和Survivin表达的关系,应用美国肿瘤联合委员会(AJCC)-肿瘤病理评估(TRG)评分系统对放化疗后肿瘤退缩效果进行评价,分析PTEN和Survivin同肿瘤退缩效果之间的关系。采用Kaplan-Meier法分析PTEN、Survivin的表达与无病生存期(DFS)的相关性。结果:免疫组织化学显示PTEN和Survivin的阳性表达率分别为56.4%(44/78)、66.7%(52/78),且两者表达呈负相关(r s=-0.512,P<0.01)。PTEN和Survivin的表达与组织学分型、T分期、淋巴结转移及肿瘤退缩明显相关(χ2=11.031/12.326、8.045/6.205、6.617/5.246、11.204/8.357,P<0.05),而与患者年龄、性别无明显相关(χ2=0.018/0.632、0.143/0.696,P>0.05)。nCRT后肿瘤退缩总有效率为53.8%(42/78),其中PTEN(+)/Survivin(-)组有效率明显高于其他组(χ2=15.031,P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,PTEN阳性者的中位DFS(32.0个月)显著高于阴性者(25.0个月)(χ2=4.144,P<0.05)。Survivin阳性者的中位DFS(24.0个月)显著低于阴性者(32.0个月)(χ2=4.126,P<0.05)。结论:PTEN和Survivin在直肠癌组织中的表达呈负相关,两者的表达状态有助于预测nCRT后肿瘤退缩效果和判断预后。

PTEN调节神经样细胞微管相关蛋白tau的聚集及意义

目的观察体外诱导成人骨髓基质干细胞(BMSC)向神经细胞分化过程中,在第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)调节细胞骨架中轴突标志分子微管相关蛋白tau(MAPT)分布及聚集的特征,并探讨其意义。方法从成人骨髓中分离基质干细胞,在体外经细胞因子诱导分化2周后成为神经样细胞,将未分化的BMSC作为对照组;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法研究MAPT的表达变化;经PTEN抑制剂BPV作用于该细胞后,用结合有荧光剂的鬼笔环肽直接染色细胞微丝肌动蛋白,并联合用免疫荧光细胞化学方法染色MAPT,在激光共聚焦显微镜下观察MAPT和肌动蛋白的定位及关联性。结果成人骨髓来源的基质干细胞经诱导分化后,MAPT的m RNA在分化1周和2周时相对表达水平为0.24±0.04和0.52±0.04,高于对照组BMSC的0.04±0.02(P<0.05)。MAPT蛋白表达水平分别为0.18±0.03和0.44±0.05,高于对照组0.06±0.04(P<0.05)。细胞染色后,经BPV作用后MAPT由弥散状态变为聚集状态,并分布于细胞一侧,神经样细胞开始出现极性。结论 BMSC来源的神经细胞分化成熟时,PTEN参与调节细胞骨架中轴突标志分子MAPT的转运和聚集,为神经细胞的轴突进一步生长提供物质支持。

特异性核基质结合区结合蛋白1、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因在前列腺癌中的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌(PCa)中特异性核基质结合区结合蛋白1(SATB1)、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的蛋白表达水平及临床意义。方法收集徐州医科大学附属医院泌尿科2022年3月至8月间诊治的79例PCa患者的相关资料,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)染色法检测79例PCa中SATB1、PTEN蛋白表达水平,并分析其相关性。结果79例PCa患者年龄≤65岁者13例,>65岁者66例,中位年龄77岁。术前前列腺特异抗原(PSA)值0~10 ng/ml者13例,10~20 ng/ml者12例,>20 ng/ml者51例,另有3例PSA值不详。病理Gleason评分<7分者6例,评分=7分者11例,评分>7分者62例。免疫组织化学染色SATB1高表达者占57%,低表达者占43%;PTEN蛋白阳性者占73%,阴性者占27%。SATB1缺失与PTEN缺失、年龄呈正相关(r=-0.292、-0.235,P<0.05),与术前PSA值、Gleason评分无明显相关。结论分析PCa中SATB1、PTEN的表达有助于PCa的风险分层,为预测预后提供参考。

第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因通过减少上皮-间充质转化来抑制胆管癌细胞QBC939的迁移能力

目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因（PTEN）对胆管癌细胞株QBC939迁移能力的抑制作用及其机制.方法 取4μg PTEN质粒转染胆管癌细胞株QBC939,转染72 h后,采用Transwell迁移实验和Western blot检测上调PTEN对QBC939细胞迁移能力和上皮-间充质转化（EMT）中重要的分子标志物表达的影响.结果 人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后,其通过基质膜细胞数目比较对照组数目减半（P＜0.01）,迁移能力减弱,与EMT相关分子标志物Slug、Snail、波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平降低,磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路中的磷酸化Akt （p-Akt）蛋白表达也明显减少.结论 PTEN可以通过抑制EMT进而影响胆管癌细胞迁移,PTEN对EMT的抑制作用可能是由PI3K/Akt信号通路调节的.

人骨肉瘤中PTEN、EGFR的表达及其与细胞增殖的关系

[目的]探讨PTEN、EGFR、PCNA在人骨肉瘤中表达的生物学意义及其相互关系,为阐明骨肉瘤的发病分子机制提供一定依据。[方法]选取60例人骨肉瘤标本(所有标本均根据细胞和组织分化程度,将骨肉瘤分为3级:1级14例,Ⅱ级28例,Ⅲ级18例),以20例骨软骨瘤为对照,采用免疫组化S-P法,检测PTEN、EGFR、PCNA在人骨肉瘤中表达。[结果]PCNA在骨肉瘤与骨软骨瘤间,骨肉瘤各级间表达差异有统计学意义(P﹤0.05);EGFR在骨肉瘤与骨软骨瘤间,骨肉瘤各级间,PCNA弱阳性组、强阳性组间表达差异有统计学意义(P﹤0.05);PTEN染色强弱在骨软骨瘤与骨肉瘤间差异有统计学意义(P﹤0.05);PTEN在骨肉瘤各级间,PCNA弱阳性组、强阳性组间表达差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]PCNA可作为骨肉瘤定性、分级的指标;EGFR在骨肉瘤的发生及恶性增殖中起到一定的作用,可作为骨肉瘤定性、分级指标;PTEN在骨肉瘤的发生中起到重要的作用,但其不可作为骨肉瘤的分级、恶性增殖指标。

非受体酪氨酸激酶对细胞功能的影响及其研究进展

非受体酪氨酸激酶是一个多功能的蛋白质,它通过与一系列的底物相互作用参与多种细胞生命活动,与细胞骨架、细胞凋亡和细胞周期等均有密切关系。本文就非受体酪氨酸激酶对细胞功能调控作用及其机制作一综述,希望对非受体酪氨酸激酶的生理功能有一个更加深入全面的了解。

先天性白内障的基因定位

先天性白内障是儿童常见的致盲眼病 ,约有 1 /3与遗传有关。随着分子生物学技术的发展 ,对于先天性白内障的遗传方式、引起该疾病的相关基因及其突变的研究有很大进展。迄今为止已经发现 ,至少有五大类基因 ,几十个基因位点与遗传性先天性白内障的发生有关。本文通过复习文献 。