菰物种专化DNA序列的克隆及其在检测菰DNA导入水稻中的应用(英文)

根据两个植物抗病基因N和RPS2中核酸结合位点 (NBS)和富亮氨酸重复区 (LRR)中的保守序列设计了一对特异引物 ,用PCR从具有水稻 (OryzasativaL .)改良所需要的许多优良性状的水稻近缘野生种菰 (Zizanialatifolia(Griseb .)Turcz.exStapf)的基因组DNA中扩增同源片段。PCR产物经克隆后 ,分别以菰和水稻的基因组DNA为探针 ,通过点杂交对所得克隆进行了分析。点杂交结果表明 ,在所分析的 6 0个克隆中有 2个克隆是菰专化的序列 ,即它们与水稻无杂交信号。基因组DNA的Southern杂交进一步证实了这 2个克隆的专化性。为了验证一些可能的“水稻_菰”渐渗杂交系是否确实含有源自供体菰的DNA ,以这 2个克隆为探针 ,与经EcoRⅠ酶切的 5个可能的渐渗杂交系进行了Southern杂交。结果表明 ,这 2个克隆均能检测出其中的一个系含有其同源序列。这一结果为曾经报道的经一种非常规有性杂交方法将菰DNA导入水稻提供了确凿的证据。

普通小麦 7B染色体两类低拷贝专化DNA序列的特性(英文)

研究表明 ,多倍体小麦基因组中存在一类低拷贝、染色体专化的DNA序列 ,其在多倍体形成时常表现出不稳定性。这类序列被认为在异源多倍体的建立和稳定中起着关键作用。为进一步研究这一问题 ,对通过染色体显微切割从普通小麦 (TriticumaestivumL .)中分离的 5个 7B染色体专化DNA序列的特性进行了研究。以这些序列为探针对大量的多倍体小麦和它们的二倍体祖先物种进行了Southern杂交分析。结果表明 ,这些序列可被分为两种类型 :其中的 4个序列与所有的多倍体物种均杂交 ,但是在二倍体水平上 ,它们却只与和多倍体小麦B基因组紧密相关的物种杂交 ,这说明这些序列是在二倍体物种分化以后产生的 ,然后垂直传递给多倍体 ;其中的 1个序列与所有的二倍体及多倍体物种均杂交 ,暗示在多倍体形成后这些序列从A和D基因组中消除了。用这一序列分别与一个人工合成的六倍体和四倍体小麦进行Southern杂交的结果表明 ,序列消除是一个迅速的事件而且很可能与这些序列的甲基化状态有关。认为这些低拷贝的染色体专化序列对于多倍体形成后部分同源染色体之间的进一步分化起着重要作用。

普通小麦7B染色体的显微分离和低拷贝专化DNA序列的克隆

以普通小麦“中国春”7B单体的花粉母细胞为材料 ,显微分离出 7B染色体 .经蛋白酶K和DNA拓扑异构酶Ⅰ处理后进行 1～ 3轮DOP PCR扩增 ,产生了 1 5 0～ 70 0bp的连续DNA片段 .基因组Southern杂交证实扩增的DNA源自小麦基因组 .将大于 2 0 0bp的第 3轮PCR扩增产物( 5 0 μL)克隆后 ,可产生 2 0 0 0 0个重组克隆 .对随机选取的 5 0个克隆分析表明 ,其中 2 1个克隆产生了大小为 2 40～ 6 0 0bp的清晰PCR产物 .点杂交结果表明 ,2 1个克隆中 1 1个 (～ 5 5 % )为低拷贝序列 ,1 0个 (～ 45 % )为重复序列 .对“中国春”全套“缺体 四体”基因组DNA的Southern杂交结果表明 ,产生清晰杂交谱带的 6个低拷贝克隆均为 7B染色体专化或第 7部分同源群专化序列 ;而随机选取的

普通小麦-天蓝冰草部分双二倍体基因组变异的研究(英文)

根据传统理论，在禾本科特别是在含有多倍体小麦为亲本的禾本科纯合、稳定的双二倍体中应存在极少的基因组变异。然而，利用１０个小麦低拷贝染色体专化序列和３３个具代表性的部分同源群专化序列为探针，对２个普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）＿天蓝冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ（Ｈｏｓｔ）Ｐ．Ｂ．＝Ｅｌｙｔｒｉｇｉａｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（Ｈｏｓｔ）Ｎｅｖｓｋｉ＝Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ（Ｈｏｓｔ）ＢａｒｋｗｏｒｔｈａｎｄＤｅｗｅｙ）八倍体部分双二倍体（即中３和中５）的ＲＦＬＰ分析结果表明，２个双二倍体均发生了广泛的基因组变异。这些变异包括小麦亲本杂交片段的消失和／或新片段的产生。对分别取自２个连续自交世代的中３和中５各５个单株的ＤＮＡ分析结果发现，同一双二倍体中，２个世代的各５个单株的ＲＦＬＰ谱带在所分析的序列中完全一致。这一结果表明，基因组变异可能发生在双二倍体形成后的早期世代；之后，便相对稳定地遗传下来。中３和中５具有相同的基因组构成，但由于其小麦亲本的不尽一致使二者存在遗传上的差异。据此，二者间变化后的ＲＦＬＰ图谱的高度相似暗示基因组变异可能不是随机发生。文中对新近形?