CRH对培养下丘脑神经元胞浆内cAMP和Ca^(2+)变化的影响

目的 研究促肾上腺皮质激素释放激素 (Corticotropin releasinghormone ,CRH)对下丘脑神经元胞浆内cAMP浓度和Ca2 + 的调节作用。方法 取孕 17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元 ,采用PTI(Photontechnologyinternational,PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度 ( [Ca2 + ]i)变化的影响 ,放射免疫方法测定神经元内cAMP含量。结果 正常对照组的下丘脑神经元 [Ca2 + ]i和cAMP含量较低 ,外源性CRH刺激后 ,[Ca2 + ]i立即升高 ,神经元胞浆内cAMP生成明显增加 ;CP 15 45 2 6可明显抑制CRH ( 10 - 6 mol L)刺激的下丘脑神经元 [Ca2 + ]i和cAMP的生成增加。结论 CRH可通过与其 1受体结合直接作用于下丘脑神经元 ,使神经元 [Ca2 + ]i和cAMP含量明显增加 ,在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的CRH可能起了重要作用。

大鼠下丘脑神经元培养的新方法

目的通过对大鼠下丘脑神经元培养方法的改进研究,寻找更佳的下丘脑神经元培养方法。方法基于目前常用的Neurobasal+B27+GlumaxⅠ的神经元培养体系,采用多重过滤替代原来的取上清过滤的方法处理神经元,并对换液方式作出相应调整。以NF-200对细胞进行免疫组织化学染色鉴定。通过观察比较培养下丘脑神经元的细胞密度、神经元轴突长度和胞体面积等指标,对培养方法作出评价。结果2种培养方法均获得良好的培养效果,改进的方法在细胞密度,3、7、10、12 d 4个时间点均优于原培养方法;神经元轴突长度和胞体面积方面,新方法只在3 d时优于原方法,至7 d时二者差异已不明显。结论新方法具有稳定的可重复性,可应用于神经元的培养实验。

缺氧及谷氨酸对大鼠下丘脑神经元NMDA通道的影响

目的 研究缺氧和N 甲基 D 天门冬氨酸 (N methyl D asparticacid ,NMDA)通道激动剂谷氨酸对大鼠下丘脑神经元NMDA通道开放动力学的影响。方法 运用膜片钳技术的细胞吸附式方法记录NMDA通道的单通道电流。结果 在急性缺氧条件下 ,NMDA通道的开放增大 ,开放时间常数τ1,τ2 分别由 (0 .3 3± 0 .10 )ms ,(4.3 6± 0 .2 6)ms变为 (0 .93± 0 .2 2 )ms ,(7.64± 0 .72 )ms ,关闭时间常数τ1,τ2 分别由 (18.0 3± 3 .5 0 )ms ,(171.5 0± 19.10 )ms变为 (3 .42± 1.0 2 )ms ,(19.3 9± 3 .0 7)ms。平均开放概率由 0 .12± 0 .0 5变为 0 .66± 0 .3 6。谷氨酸浓度增加 ,NMDA通道开放时间常数增大、关闭时间常数减小 ,开放概率增大。结论 缺氧及谷氨酸能提高下丘脑神经元NMDA通道的兴奋性 ,促进NMDA通道开放增加。

促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元CREB的调控

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)对下丘脑神经元内CREB(CAMP-responsive element-binding protein)含量变化的调节作用。方法:取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon technology international,PTI)荧光成像系统测量下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca2+]i)变化;测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元内钙信号变化的影响,用Western blot方法测定神经元内P-CREB的含量变化,分别与用细胞膜L-型钙通道拮抗剂尼莫地平或CRH1受体(CRH1R)特异性拮抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后[Ca2+]i和P-CREB的变化作比较。结果:正常对照组的下丘脑神经元[Ca2+]i含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca2+]i立即升高;预先应用尼莫地平或CP-154526处理再用CRH刺激的神经元[Ca2+]i含量的增加明显被抑制,同时也可明显抑制神经元内P-CREB含量的增加。结论:在急性应激反应中,CRH可直接与下丘脑神经元CRH1R结合,开放膜L-型钙离子通道促使钙离子内流使[Ca2+]i明显增加,从而进一步激活神经元内P-CREB信号通路。说明在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了重要的作用。

奥拉西坦对大鼠下丘脑神经元钠钾通道电流的作用

目的研究在奥拉西坦作用下大鼠下丘脑神经元钠钾通道电流的变化。方法应用膜片钳技术的全细胞方法记录奥拉西坦作用下大鼠下丘脑神经元钠钾通道电流。结果在奥拉西坦作用下,下丘脑神经元平均Na+电流由(4.130±0.210)nA上升为(5.950±0.411)nA,平均K+电流由(5.601±0.221)nA增加为(7.550±0.403)nA,而且作用前后比较有统计学差异。结论在奥拉西坦的作用下,下丘脑神经元Na+,K+电流均增大,从而增加了神经元细胞动作电位的幅值及传导速度,使动作电位的传导更加容易。

温度对下丘脑神经元膜上延迟整流性K^+通道活动密度的影响

目的 :探讨温度对下丘脑神经元延迟整流性K+单离子通道 (Ik)活动密度的影响。方法 :采用膜片钳细胞贴附式技术观察和记录 32℃、37℃和 39℃时下丘脑神经元Ik 的活动。结果 :温度升高 ,记录到封接膜片上Ik 活动的机率增大 ,由 32℃时的 34.6 %升至 39℃时的 5 1.0 % ,而且出现多通道活动 ;Ik 通道活动密度明显增高 (P <0 .0 5 ) ,32℃、37℃和 39℃时膜上的通道活动密度分别为 0 .71、1.2 2和 1.5 2channels/ μm2 。结论 :温度升高 ,下丘脑神经元上Ik 通道更多地处于活动状态 。

针刺对单纯性肥胖者下丘脑神经元的抑食影响研究进展

单纯型肥胖症是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病,不仅影响美观,还会诱发其他慢性疾病,严重的危害患者身心健康。在机体的下丘脑中存在着一对完全相反的促食和抑食的神经元,调节着机体的能量稳态,目前已被证实针刺能够促进单纯性肥胖者胃肠抑食激素表达、提高其胃肠迷走神经活性从而将抑食信号及时的反馈至下丘脑抑摄食神经元,达到抑食行为,从而减少机体体重。现将十年来针刺对单纯性肥胖者下丘脑神经元相关抑食效果影响进行整理和综述。

不同温度条件对下丘脑神经元K^+单离子通道簇状开放的影响

目的 :探讨温度对下丘脑神经元电压依赖性K+ 单离子通道 (Kv)簇状开放 (Burstopening)的影响。 方法 :采用膜片钳细胞贴附式技术观察和记录 32℃、37℃和 39℃时下丘脑神经元Kv的活动。结果 :温度升高 ,单位时间内记录到的Burst开放明显增多 ,平均开放间期变长。当温度从 32℃升至 39℃ ,B1从 1.5ms升至 8.1ms ,B2 从 6 .6ms升至 83.2ms,Burst内部开放数目也由 1～ 2个升至 8个 ,从以简单Burst开放 (SB)为主转变成以复杂Burst开放(CB)占优势。结论 :温度升高 ,下丘脑神经元上IK 通道更多地处于活动状态 ,这可能有利于下丘脑神经元对体温变化的调节。

反复性脑缺血丘脑神经元损害的实验研究

目的 :研究反复性脑缺血丘脑神经元的病理损害及其机制。方法 :应用45Ca放射自显影及光镜对比研究大鼠单次性和反复性脑缺血及 NMDA受体拮抗剂 MK- 80 1治疗后丘脑钙积聚和神经元损害的病理改变。结果 :反复缺血组丘脑异常钙积聚与神经元损害明显重于单次缺血组 ;MK- 80 1能显著减轻和改善丘脑钙积聚与组织病理损害。结论 :反复非致死性短暂脑缺血导致丘脑腹侧神经元显著累积性损害 ,兴奋性氨基酸及 Ca2 +可能起着重要作用。

下丘脑神经元中游离Ca^(2+)的电生理测定法

目的 采用膜片钳技术通过对SD乳鼠下丘脑神经元上Ca2 + 激活K+ 通道 (KCa)Ca2 + 敏感性的研究测定其细胞内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)。方法 首先应用内面向外式研究不同 [Ca2 + ]i 时KCa通道的开放概率 (P0 ) ,作出量效曲线 ,再应用细胞贴附式求得生理状态下此通道的开放概率 ,从量效曲线上查出的细胞内游离Ca2 + 浓度。结果 试验表明SD乳鼠下丘脑神经元上KCa通道的P0 具有对 [Ca2 + ]i 的高度敏感性 ,求得下丘脑神经元内的 [Ca2 + ]i 为 0 1μmol/L。 结论 实验结果说明此电生理法测定 [Ca2 + ]i 具有较高的可靠性和准确性。

热损伤温度对新生SD大鼠下丘脑神经元膜上ATP激活单通道活动的影响

目的 观察下丘脑神经元经热损伤温度 (4 2℃ )处理后ATP激活单通道的变化。方法 采用膜片钳技术的细胞贴附记录模式 ,记录通道的活动动力学。结果 发现经高温处理后 ,新生SD大鼠ATP激活单通道的长时程开放时间常数(τ0 2 )、开放概率 (P0 )降低 (P <0 0 5 ) ,通道在膜上的数量和密度降低。

膜环境高温对下丘脑神经元膜上钾通道电压依赖性的影响

目的：观察膜环境高温对下丘脑神经元延迟整流性Ｋ＋通道（Ｉｋ）电压依赖性的影响。方法：采用细胞贴附式的膜片钳技术。结果：高温可影响通道的电压依赖性，使电压依赖曲线发生正向移位，过高温度则使电压依赖性减弱甚或丧失。结论：Ｉｋ电压依赖性的变化可能参与机体的发热和中暑发病过程。

新生大鼠下丘脑神经元发育过程中膜特性变化

大鼠出生后下丘脑神经元温度敏感性逐步升高,采用电流钳技术发现,膜被动特性在出生后18d内变化显著,同时峰电位升高,动作电位间期延长,前电位及后电位均有明显的变化,大多数神经元表现为单次放电.这些结果表明发育过程中离子通道的密度和活动特性发生了改变,同时温度敏感性与突触特性存在着一定的关系.

CRH对培养下丘脑神经元胞浆cAMP作用的探讨

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对下丘脑神经元细胞内cAMP浓度的调节作用。方法:取孕17天胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon Technology International,PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca^(2+)]i)变化的影响,放射免疫方法测定神经元内cAMP含量,治疗组用CRHl受体特异性拮抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后。结果:正常对照组的下丘脑神经元[[Ca^(2+)]i和cAMP含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca^(2+)]i立即升高,神经元细胞内cAMP生成明显增加,预先应用CP—154526处理再用CRH刺激下丘脑神经元,各刺激组与对照组相比,差异显著。CP—154526可明显抑制CRH(10^(-6)mol/L)刺激的下丘脑神经元细胞内[Ca^(2+)]i和cAMP的生成增加。结论:CRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元[Ca^(2+)]i和cAMP含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了一定的重要作用。

大鼠下丘脑神经元L-型Ca^(2+)通道特性与Ba^(2+)浓度关系的研究

目的 :研究不同浓度Ba2 + 情况下 ,新生大鼠下丘脑神经元L -型Ca2 + 通道单通道特性。方法 :采用神经元的急性分离技术 ;用膜片钳细胞贴附式记录方式进行研究。结果 :110mmol/LBa2 + 为载流子与 10mmol/LBa2 + 为载流子时 ,单通道活动不同、电导不同 ,分别为 2 8 6pS和 19 1pS ,平均开放概率也明显不同。结论 :L -型Ca2 + 通道单通道电导、平均开放概率、激活与失活等电生理特性存在明显的Ba2 + 浓度依赖性。

温度诱导的下丘脑神经元Kv簇状开放的特性

采用膜片钳细胞贴附式技术 ,观察和记录了32℃、37℃和39℃时下丘脑神经元电压依赖性K +单离子通道 (Kv)的活动 ,探讨Kv簇状开放 (Burstopening)与开放概率的关系。结果表明 ,温度升高时 ,单位时间内记录到的Burst开放明显增多 ,开放概率NPo从37℃时的0.175±0.124升至39℃时的0.696±0.187(P<0.01)。明显影响NPo的Burst开放有关参数包括Burst内部的开放数目和两个Burst开放的间期。温度升高 ,Burst开放内部开放数目增多 ,两个Burst开放间期明显缩短 。

新生大鼠下丘脑神经元原代培养及形态学

目的：优化下丘脑神经元体外培养方法，观察神经元形态学特点及生长规律。方法：取SD新生鼠，剥离下丘脑，机械吹打法制成单细胞悬液，接种，24h后换为Neurobasal培养基；神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学法计数阳性细胞；H-E染色、Nissl染色。结果：原代培养神经元6～8h内开始贴壁，培养5～7d突起增粗增长，连接成网，以多极神经元为主，胞体呈三角形、梭形、椭圆形；经NSE鉴定为神经元并且纯度约90％；细胞核大而圆，H-E染色胞核深蓝色，胞质红色，胞体可见尼氏颗粒。结论：改良后培养下丘脑的方法具有稳定的可重复性，可应用于下丘脑神经元培养实验及建立神经毒性研究模型。