用多聚酶链反应检测患者丙型肝炎病毒RNA

作者对32例肝病、血液病患者与5例丙氨酸转氨酶(ALT)异常供血员,应用二温度点多聚酶链反应(PCR)技术检测其血清的HCV RNA.结果发现,阳性血清在240 bp处有一条清晰的区带.37份血清的HCV DNA阳性率为48.6％.5例非甲非乙型输血后肝炎患者与3例急性非甲非乙型肝炎患者HCV RNA全部阳性,慢性肝炎与肝硬变患者中检出率也高(4/5).显示在我国各种类别的非甲非乙型肝炎中,丙型肝炎(丙肝)的比例很高.血液病患者与ALT异常的供血员中也有一定比例(分别为2/6与1/5)的丙肝病毒携带者,值得注意.结果提示PCR确是诊断丙肝特异而敏感的方法.

多聚酶链式反应与酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒感染的比较

本文报告了用逆转录套式多聚酶链式反应(RT nested PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HCV—RNA和抗—HCV.用军科院丙肝抗体酶免试剂盒检测了2086份血清,病区和门诊病人抗—HCV阳性率为13.4%,献血员为2.2%,一些高危人群HCV感染率比较高.用军科院和肝研所两个单位的丙肝抗体酶免疫试剂盒同时检测100份血清,抗—HCV总符合率为95.0%.用PCR法检测了34份抗—HCV阳性和20份抗—HCV阴性血清,阳性符合率为70.6%,总符合率为79.6%.PCR与ELISA法检测HCV感染各有长短,目前仍需找到一种敏感、特异、简便、快速的诊断方法,以适应临床需要.

几种改良的多聚酶链反应在丙型肝炎病毒检测中的应用

本文综述了近年来几种改良的多聚酶链反应(PCR)在检测丙型肝炎病毒中的应用。包括巢式PCR、半巢式PCR、一步法PCR、定量PCR、链特异性PCR、RNA捕获法PCR及原位PCR。

巢式多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒5′端非编码区基因

本文采用丙型肝炎病毒(HCV)基因中高度保守的5′端非编码区的两对引物,建立了检测 HCV 核酸(HCV-RNA)的巢式(两步法)多聚酶链反应(PCR),对其中标本 RNA的提取、互补 DNA(cDNA)合成时引物的浓度、PCR 的反应体积以及 PCR 时温度循环程序等进行了优化选择。用该法检测了67例非甲非乙型肝炎患者的血清标本,发现52例(78%)为HCV-RNA 阳性。在丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阴性的27例非甲非乙型肝炎患者中检出16例(59%)HCV-RNA 阳性。这些结果再次证实 HCV 感染是非甲非乙型肝炎的重要病因,并提示仅检测抗-HCV 可能会低估 HCV 的感染率。

“双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒NS_5基因

“双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒ＮＳ_５基因李庆生，郭建平，陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）我们在扩增丙型肝炎病毒ＮＳ５基因中，探讨了退火温度与扩增产物特异性之间的关系，发现“双退火温度”多聚酶链反应可很好地解决目?..

丙型肝炎病毒型特异性聚合酶链反应基因分型的临床应用

目的 探索丙型肝炎病毒 (HCV)基因型在不同人群中的分布规律及流行优势型。方法 分别对健康体检者、住院患者和血液透析患者抗HCVIgG阳性标本 ,用自行设计的 5’非编码区 (5’ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型。结果 3组人群中血液透析患者HCV感染率最高 ,抗HCVIgG和HCVRNA阳性率分别为 5 5 .37%和 38.84%。基因型以 1b亚型为主 ,1b及 1b的相关型占 91.6 7%。结论 本地区HCV流行优势型为 1b亚型。

尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用

目的:建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),并优化尿苷酶(Uracil-DNA glycosylase,UDG)的抗污染剂量和抗污染时间。方法:逆转录-抗污染-联体PCR技术的第1次PCR实行逆转录-抗污染-PCR同步化;第2次PCR经分层蜡处理进行全程抗污染,并应用该技术扩增HCV cDNA,制备全含脱氧尿嘧啶核苷酸(dUTP)的DNA(dU-DNA)为模板,作为UDG实验室抗污染质控对照并验证该联体PCR检测HCV RNA灵敏度,用DNA-酶免疫测定技术检测HCV cDNA。结果:抗污染实验结果证实,0.2u的UDG在37℃和42℃40min均可达到抗污染的效果。对高浓度全dU-DNA模板也有良好的抗污染效果。灵敏度检验结果表明,用HCV RNA浓度为2.110×105copies/mL的血清,稀释到10-4倍后仍可检测出HCV RNA。结论:应用该逆转录-抗污染-联体PCR技术进行全程抗污染,减少了因程序中多次加样造成的污染,为HCV逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测RNA提供良好的防污染和抗污染操作技术。

聚合酶链反应技术在丙型肝炎病毒检测中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）检测中的应用。方法：对ＨＣＶ抗体阳性的献血员８８例同时检测ＰＣＲ与ＡＬＴ（丙氨酸转氨酶）。结果：ＡＬＴ增高组ＰＣＲ９０％阳性，而ＡＬＴ正常组ＰＣＲ仅５１．７％阳性。结论：说明肝组织损伤与ＨＣＶ基因在体内存在有密切关系，ＰＣＲ的检测有助于对病情与疗效的了解及献血员的筛选。

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区聚合酶链反应检测方法的建立及应用

目的:建立一种以丙型肝炎病毒(HCV)干扰素敏感决定区(ISDR)特异性引物为基础的聚合酶链反应(PCR)方法,对HCVISDR进行序列测定.方法:根据GenBank中6株HCV全序列核苷酸序列,设计共同的外引物及三组ISDR型特异性内引物.建立了HCVISDRPCR检测方法,对27例HCV基因型1b的慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA进行测定,并对PCR阳性标本的产物进行多位点分析.结果:A组PCR结果阳性率为37%(10/27),A-B组为30%(8/27),A-C组为4%(1/27),A-B-C组为22%(6/27),三组均阳性者有5例为使用IFN治疗6-12mo后定性PCR检测HCVRNA转阴,停药3mo后PCR检测HCVRNA结果仍为阴性.结论:以ISDR特异性引物为基础的PCR法可靠、简便,可用于丙型病毒性肝炎患者对HCV进行敏感决定区的测定,用于以NS5A-ISDR突变数量来预测HCV基因型1b感染的患者对IFN的持续应答.

丙型肝炎病毒核酸单引物聚合酶链反应产物的直接序列分析

利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,得到丙型肝炎病毒核酸非编码区引物所引导的扩增片段。用改进的不对称PCR方法,制备单链cDNA,直接作为模板进行序列分析,结果与Takamizawa发表的序列符合。本法简单方便,亦可用于其他类似的研究中。

应用多聚酶链反应检测尿中丙型肝炎病毒RNA

应用多聚酶链反应检测尿中丙型肝炎病毒ＲＮＡ（河南省开封市１５５医院４７５００３）徐艳云，陈雷由于多聚酶链反应（ＰＣＲ）法的建立，近几年对于丙型肝炎的研究取得了很大进展，目前国外用ＰＣＲ方法从丙型肝炎病人的唾液、精液、汗液和阴道分必物及乳汁中检测到ＨＣ...

逆转录多聚酶链反应技术及其在丙型肝炎病毒核酸检测中的研究进展

逆转录多聚酶链反应技术及其在丙型肝炎病毒核酸检测中的研究进展河北省卫生防疫站（保定０７１０００）牛建章（综述）孟宗达刘树贤（审校）多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术首先由Ｍｕｌｉｓ于１９８５年发明建立。１９９０年，Ｗｅｉｎｅｒ等［１］将该技术用于丙型肝炎病毒...

聚合酶链反应检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸的研究

本文报道了简便快速检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的聚合酶链反应(PCR)方法。检测单浆献血员61例,其中抗-HCV阳性30例,检出血清HCV RNA阳性者17例;抗-HCV阴性31例,检出血清HCV RNA阳性者9例。检测6例血清HCV RNA阴性、抗-HCV阳性丙型肝炎患者的肝穿标本,发现4例HCV RNA阳性。说明本文所建立的PCR方法是诊断HCV感染的特异性强、敏感度高的一种新方法。检测肝组织内的HCV RNA可提高HCV RNA的检出率。本文还对标本的处理及如何避免假阳性等问题进行了讨论。

研究ELISA联合荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒的效果

目的评估丙型肝炎病毒检测应用酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)联合荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测的应用价值。方法选取2022年8月—2023年8月滕州市疾病预防控制中心接诊的90例疑似丙型肝炎病毒患者为研究对象,采用ELISA联合荧光定量PCR检测,以丙型肝炎病毒(Hepatitis Virus C,HCV)RNA检测结果作为“金标准”,分析检测方式的应用价值。结果HCV RNA检测结果显示,阳性率为47.78%,ELISA检测的阳性率40.00%,荧光定量PCR检测发现阳性量率42.22%,联合检测的阳性率46.67%。ELISA检测与荧光定量PCR检测在灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值方面比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。联合检测的灵敏度为93.02%、准确度为94.44%、阳性预测值为95.24%以及阴性预测值为93.75%,显著高于ELISA检测的67.44%、76.67%、80.56%、74.07%,联合检测的灵敏度、准确度显著高于荧光定量PCR检测(76.74%、83.33%),差异有统计学意义(P均<0.05)。结论丙型肝炎病毒检测应用ELISA联合荧光定量PCR检测检出率高。

丙型肝炎病毒的聚合酶链反应检测法与抗体检测法的临床应用比较

按文献设计丙型肝炎病毒(HCV)引物,建立了聚合酶链反应检测法,并同时用抗体检测(ELISA)法检测了109例非甲非乙型肝炎所致的肝功能异常者.结果表明抗HCV抗体检测阳性率明显高于聚合酶链反应法.其原因可能是并非所有抗HCV抗体阳性者均含HCV;抗HCV抗体检测法假阳性率较高.为确保临床诊断的可靠、准确,建议对同一患者同时进行以上两种方法检测.

逆转录—套式聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA

采用逆转录-套式聚合酶链反应（RT－PCR）检测280例疑为HCV感染的病人血清，共同时做抗-HCV－IgG检测。结果51例HCV-RNA阳性，其中26例抗HCV－IgG阳性；在254例抗HCV－IgG阴性血清中有25例HCV－RNA阳性。证明RT－PCR检测HCV－RNA是提高丙型肝炎诊断率和HCV感染率的最佳方法。

逆转录聚合酶链反应检测血清中丙型肝炎病毒RNA

本文用本所自己合成的引物，对３０份怀疑ＨＣＶ感染血清进行ＨＣＶＲＮＡＲＴ－ＰＣＲ检测。该３０份血清中，２２份抗－ＨＣＶ阳性，其中１８份ＨＣＶＲＮＡ为阳性，８份抗－ＨＣＶ阴性血清及怀疑阳性血清中，２份ＨＶＣＲＮＡ为阳性。结果提示，抗－ＨＣＶ抗体试剂盒用于检测急性ＨＣＶ感染有其不足之处，结合ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ的方法可提高急性ＨＣＶ感染的检出率。