应用丙型肝炎病毒合成肽检测HCV特异性IgM抗体

目的筛选验证捕捉丙型肝炎病毒(HCV)抗体能力最强的合成肽,进一步探讨抗HCV-IgM的效价与HCVRNA含量之间的关系。方法合成HCVCp14、HCVCp9和HCV5-1-1三种肽段,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙丙型肝炎和抗HCV阳性者血清抗HCV-IgM。同时测定HCVRNA。结果在39例急性丙型肝炎患者中,抗HCVCp14-IgM的阳性率为89.7%,而HCVCp9-IgM和抗HCV5-1-1-IgM的阳性率分别为48.7%和17.9%。HCVCp14-IgM的效价(A492nm值)>2.0以上者,HCVRNA的平均含量为105.1±3.6copies/μl。结论抗HCVCp14-IgM的检出及效价高低与HCV的复制活跃程度相关。

丙型肝炎病毒感染者血清中抗-HCV-IgG抗体轻链比值检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因。方法根据HCV C区和NS4基因序列设计并人工合成3条合成肽,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗.HCV IgG抗体轻链κ/λ比值。结果 抗-HCVSP42,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜;84例抗-HCV阳性者中82例(97.62％)抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值恒定不变。结论HCV感染者抗-HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护免疫缺陷的原因之一。

从医护人员的职业暴露谈丙型肝炎病毒(HCV)的防治

医护人员职业暴露感染HCV,麻醉科王医生在年度体检的时候发现肝功能指标异常,于是进行了肝炎病毒的筛查,发现抗HCV抗体(HCV-Ab)和HCV核酸(HCV RNA)均为阳性,提示HCV的活动性感染。王医生顿时慌了神,回顾自己两年前参加手术时发生针刺伤,患者是丙型肝炎患者,当时他只是把血挤出来,用碘酒进行了消毒,没有到院感科备案,也没有定期复查。因此他不能算工伤,不能获得免费的治疗和补偿。好在HCV感染目前治愈率达到90%以上,经过规范治疗,王医生的HCV RNA和HCV核心抗原(HCV-cAg)均转阴。

丙型肝炎病毒IgG抗体阳性患者血清抗HCV IgM、ALT及HCV RNA的对比分析

目的:探讨丙型肝炎(H C V)IgG阳性患者的血清抗-H C V IgM、丙氨酸转移酶(A LT)水平与H C V R N A之间的关系。方法:通过第三代E IA试剂盒检测抗-H C V IgG、抗-H C V IgM,全自动生化分析仪检测丙型肝炎患者A LT水平,荧光定量逆转录聚合酶链反应(R T-PC R)方法检测H C V R N A,并进行比较。结果:在丙型肝炎IgG阳性患者中,抗-H C V IgM阳性率为8.3%,H C V R N A阳性率为41.7%。H C V R N A的检出在A LT异常情况下较正常明显高(P<0.05),但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性(r=0.346,P>0.05)。结论:抗-H C V IgM不能反映病毒复制,A LT异常情况下H C V R N A检出率高,但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性,H C V R N A仍是反映H C V复制的可靠指标。

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-IdscFv),为研制HCVE2的抗-IdscFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCVE2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCVE2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCVE2特异性抗-IdscFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-IdscFv与HCVE2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高(E11A450nm0.928,E14A450nm1.152,E17A450nm1.136,E28A450nm1.163,E53A450nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11A450nm0.044,E14A450nm0.062,E17A450nm0.166,E28A450nm0.012,E53A450nm0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(E28)阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCVE2的抗-IdscFv,本实验结果为开展用抗-IdscFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.

丙型肝炎病毒核心蛋白抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

为制备抗丙型肝炎病毒核心蛋白的抗独特型单链可变区抗体 (抗 IdscFv) ,采用噬菌体表面展示技术 ,将抗 HCV核心蛋白的单克隆抗体固相包被于Nunc板 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得可与HCV核心蛋白单克隆抗体结合的抗独特型人源单链可变区抗体的噬菌体集落。随机挑选 6 0个克隆 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验 ,对其进行免疫学检测和鉴定。获得与HCV核心蛋白单克隆抗体结合活性较强的抗 IdscFv阳性克隆 ,并对HCV核心蛋白特异性抗 IdscFv的编码序列进行测定分析。结果经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选 ,在随机挑选的 6 0个克隆中 ,有 2 0株克隆ELISA的吸光度(A4 5 0nm)值较高 ,这些噬菌体上清与牛血清白蛋白 (BSA)进行交叉反应后 ,确定了其中有 6株交叉反应较弱 ,结合 2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果 ,最后确定 1株阳性克隆 ,提取质粒 ,进行DNA序列测定 ,DNA大小为 76 8bp。本实验结果提示用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗 HCV核心蛋白的抗 IdscFv ,为开展用抗

丙型肝炎病毒NS4A抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

为探索新型治疗方法 ,制备抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A的抗独特型人源单链可变区抗体 (抗 IdscFv) ,采用噬菌体表面展示技术 ,将抗HCVNS4A单克隆抗体固相包被于Nunc板 ,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,随机挑选 82个克隆 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验 ,对其进行免疫学检测和鉴定 ,获得与HCVNS4A单克隆抗体结合活性较强的抗 IdscFv阳性克隆 ,并对HCVNS4A特异性抗 IdscFv的编码基因进行序列测定分析。结果 ,经过筛选 82个克隆中有 4 0株克隆ELISA的吸光度 (A4 5 0nm)值较高 ,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白 (BSA)进行交叉反应 ,确定其中有 7株交叉反应较弱 ,结合 2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果 ,最后确定 1株阳性克隆。提取质粒 ,进行DNA序列测定 ,DNA为 789bp。本实验结果提示 ,用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗HCVNS4A的抗 IdscFv,为开展用抗

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和批间CV分别为 3.6 4 %和 4 .39% ,平均回收率 10 5 .5 8% ,可测范围为 1.0 1— 17.34NCU/mL ,灵敏度为 0 .0 3NCU/mL。本法与HB sAg有 0 .2 3%的交叉 ,与HBeAg有 0 .0 4 %的交叉。 2 78例正常对照组血清抗 -HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示 ,高度灵敏、稳定的抗

用芯片研究丙型肝炎病毒不同功能区抗体

目的 用蛋白质芯片研究 HCV不同功能区抗体及临床意义。方法 将抗原性强的 C、NS3、NS4、NS5片段用芯片点样仪定量点加在醛基化玻片上来制作蛋白芯片。用进口 HCV(EL ISA)筛选出 6 5例抗 - HCV阳性标本 ,阳性标本用芯片检测不同功能区抗体 ,并测定 HCV- RNA;同时用芯片检测 2 4例抗 - HCV阴性的正常献血员血清。结果 2 4例抗 - HCV阴性标本用芯片检测均阴性 ;6 5例抗 - HCV阳性标本经芯片均有 1～ 4种抗体阳性 ,其中抗 - C+抗 - NS3+抗 - NS4+抗 - NS5阳性率最高 ,占 33.8% ;抗 - C、抗 - NS3、抗 NS5、抗 NS4总的检出率分别为98.5 %、89.2 %、5 2 .3%和 5 0 .8% ;未发现单独含抗 - NS3、抗 - NS4的血清 ;抗 - C+抗 NS3+抗 - NS4+抗 - NS5阳性血清中 HCV- RNA检出率最高 ,占 77.3% ;HCV- RNA阳性血清中抗 - NS5阳性率最高 ,占 6 1.8% ,说明抗 - NS5与 HCV- RNA最有相关性 (P<0 .0 5 )。结论 蛋白质芯片显示较高的敏感性与特异性 ;抗 - C、抗 - NS3在诊断抗 -HCV都很重要 ,抗 - NS4及抗 - NS5有诊断的互补作用 ,而抗 - NS5在一定程度上能反映 HCV的复制情况。

用合成肽测定抗丙型肝炎病毒高变区抗体及其意义

目的 探讨慢性丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清中抗高变区 1 (HVR1 )抗体的多型性及其临床意义。方法 利用 1 4种不同氨基酸序列的HVR1 合成肽作为包被抗原 ,采用酶免疫测定检测 2 9例慢性HCV感染者血清中HVR1 抗体 ,并与其他指标进行比较分析。结果 2 9例患者血清中均存在能与 2～ 1 2种HVR1 合成肽发生免疫反应的抗体。该组患者与 1 4种合成肽反应的HVR1 抗体总阳性率为 1 0 0 % ;肝硬化丙肝患者与非肝硬化患者的HVR1 抗体阳性率差异无显著性 ;血清HCVRNA阳性组与阴性组其抗体的阳性率差异亦无显著性。结论 慢性HCV感染者的血清中均存在多型性HVR1抗体。这种抗体不能清除体内的HCV ,亦似与病情。

抗-HCV-IgG抗体及血清HCV RNA在丙型肝炎诊断中的应用价值

目的探讨抗-HCV-IgG抗体与血清HCV RNA应用于丙型肝炎诊断中的临床价值。方法选择2014年10月~2016年10月检验科收集的114例丙型肝炎待查者的血清标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对抗-HCV-IgG抗体进行检测,同时采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)对HCV RNA载量进行检测。统计所有标本抗-HCV-IgG抗体、HCV RNA检测结果。结果采用ELISA检测抗-HCV-IgG抗体阳性率为25.44%(29/114);采用荧光定量PCR检测HCV RNA阳性率为27.19%(31/114)。31例HCV RNA阳性标本中抗-HCV-IgG阳性标本有26例,符合率为83.87%(26/31)。ELISA检测抗-HCV-IgG抗体阳性率与荧光定量PCR检测HCV RNA阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。伴随HCV RNA病毒载量的不断增多,抗-HCV-IgG阳性抗体检出率明显提高;不同HCV RNA病毒载量的相邻区间的抗-HCV-IgG阳性抗体检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ELISA检测抗-HCV-IgG抗体和荧光定量PCR检测HCV RNA应用于丙型肝炎诊断均具有一定的临床价值,血清HCV RNA病毒载量是判断HCV感染的重要依据,能够有效反映病毒活动性及复制程度,然而单一的抗-HCV-IgG抗体、HCV RNA检测尚存在局限性,易出现漏诊,两者联合检测可显著提高丙型肝炎检出率,做到早诊断、早治疗,提高临床疗效。

国内丙型肝炎病毒抗体酶联免疫法试剂评价参考品体系的建立

目的建立国内丙型肝炎病毒抗体酶联免疫法(EIA)诊断试剂评价参考品。方法收集2009-03/2010-10期间来自全国不同省份4833份供血人员血清样品,用国产5种抗HCV EIA试剂和国外2种抗HCV EIA试剂分别进行初筛和复检;用Chiron的RIBA HCV 3.0 SIA、Roche HCV定量试剂对筛选样品进行了确认试验,对确认阳性样品进行HCV基因型检测;选择不同强度的确认阳性、阴性样品、混合阳性系列稀释样品、部分特殊样品等建立抗HCV诊断试剂评价参考品。结果设立了抗HCV诊断试剂评价参考品,包含30份强、中、弱阳性的抗HCV混合阳性样品,10份单片段抗体阳性确认阳性样品,6份评价灵敏度系列稀释样品,30份抗HCV确认阴性样品。结论本研究设立的抗HCV评价参考品检测结果可靠,样品涵盖背景丰富,对新产品研发和筛选评价高质量的抗HCV诊断试剂有一定参考价值。

输血后丙型肝炎病毒NS4区抗体的动态变化及其诊断意义

利用重组NS4抗原及合成肽5－11抗原分别检测5例输血后丙型肝炎患者的系列血清136份，并与HCV总抗体及HCVRNA检测结果比较，发现抗NS4抗体的动态变化虽然有两种模式，但在多数情况下为一种模式，即抗体阳转后很少转阴，并且其动态变化基本与总抗体相似。同时发现2例病人抗NS4抗体阳转时间早于总抗体，因此，推测HCV检测试剂中增加NS4抗原可能对提高HCV诊断试剂的灵敏度有一定意义。

慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA载量与丙型肝炎抗体及抗核抗体的相关性

目的:探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)RNA载量与抗-HCV滴度的相关性,分析HCV RNA载量与抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)滴度的变化规律及干扰素治疗前后ANA滴度的变化,为慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)的治疗提供指导.方法:收集2013-01/2014-02收治天津市第三中心医院的112例CHC患者血清,实时荧光定量聚合酶链反应检测HCV RNA,ELISA法检测抗-HCV,间接免疫荧光法检测ANA,Log HCV RNA与抗-HCV滴度及ANA滴度的相关性采用Spearman相关分析,采用独立样本的t检验及多个独立样本非参数检验分析Log HCV RNA与ANA滴度的关系.干扰素治疗前及治疗1 mo后ANA滴度的比较采用秩和检验.结果:HCV RNA载量与抗-HCV滴度不存在相关关系(r=0.078,P=0.465);HCV R N A载量与A N A滴度存在相关关系(r=0.744,P=0.001),ANA阳性与ANA阴性患者的HCV RNA载量有差异(P=0.001);不同ANA滴度组HCV RNA载量有差异(χ2=32.58,P=0.001).干扰素治疗前后ANA滴度变化有统计学意义(Z=2.60,P=0.001).C H C患者的A N A以低滴度为主,随着病毒载量的增高,高滴度的ANA例数有增多的趋势.结论:HCV RNA载量的高低可作为抗病毒疗效评估的观察指标;CHC患者存在一定程度自身免疫现象;干扰素治疗过程中会增强自身免疫的发生.

抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体的制备及免疫组织化学研究

目的:研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的人源噬菌体单链可变区抗体,并探讨其在临床病理学诊断中的应用价值。方法:以大肠杆菌表达的重组HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,利用抗原-抗体亲和性结合的原理,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)和DNA序列分析,获得HCV NS5A的人源单链抗体;用该抗体对7721转染全长HCV cDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV NS5A抗原进行免疫组化鉴定。结果:ELISA结果表明,制备的HCV NS5A人源单链抗体能与HCV NS5A抗原特异性结合;免疫组化结果表明,该抗体能够特异性识别HCV NS5A抗原,与正常肝细胞无交叉反应。结论:此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,为HCV NS5A病原的检测提供了新的有效的检测手段。

胶体金法与ELISA法在检测血液丙型肝炎病毒抗体中的比较

目的探索胶体金法与ELISA法在检测血液丙型肝炎病毒抗体中的应用价值。方法选择近期在我院住院治疗的541例丙型肝炎疑似患者。回顾分析胶体金法与ELISA法检测结果,对照分析胶体金与ELISA法检测结果、检查时间和费用。结果 541份样本中,与ELISA法检测结果进行对比,胶体金法相对特异性为96.0%(261/272),相对灵敏性为88.8%(239/269),相对准确性92.4%(500/541)。胶体金与ELISA法检测结果差异显著(P<0.05)。对照显示,HCV胶体金检查时间〔(22.4±4.6)min〕和费用〔(6.2±1.1)元〕显著低于ELISA法的检测时间〔(118.2±21.1)min〕和费用〔(13.3±3.2)元〕(P<0.05)。结论胶体金法应用于丙型肝炎病毒检测,操作便捷、省时及费用低,且有相对较高的特异性和灵敏度,可作为紧急和特殊需要情况下的初筛。

压电免疫传感器用于抗丙型肝炎病毒抗体检测的实验研究

目的研制一种用于检测抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体的压电免疫传感器。方法采用聚乙烯亚胺黏附、戊二醛交联的方法,选用(HCV)人工合成多肽抗原作为生物敏感材料,研制成一种新型的抗HCV抗体压电免疫传感器,将其用于临床血样的检测,探索了传感器的组装条件,考察了传感器的响应特性。结果HBsAg对抗HCV抗体检测干扰较小,且抗HCV抗体阳性血清的响应值与阴性血清的噪声值之比大于4。结论该方法选择性好,易于操作,能快速有效地检测抗HCV抗体。

血清HCV-RNA、抗-HCV抗体及肝脏酶谱联合诊断治疗丙型肝炎的临床意义

目的评价血清HCV-RNA、抗-HCV抗体和肝脏酶谱检测在丙型肝炎诊断及治疗中的临床应用价值。方法检测150例疑似丙型肝炎患者血清中HCV-RNA水平、抗-HCV抗体滴度,以及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)水平。对照组为本院体检中心30例健康体检者。HCV-RNA定量采用实时荧光定量PCR检测,抗-HCV抗体采用化学发光微粒子免疫检测法检测,ALT、AST、γ-GT采用酶速率法检测。结果 150例丙型肝炎患者血清中,同时检测HCVRNA定量和抗-HCV抗体滴度均为阳性的为80.7%,HCV-RNA定量与抗-HCV抗体滴度无显著相关性(P>0.05),ALT,AST,γ-GT水平与HCV-RNA水平有显著相关性(P<0.05)。结论同时检测HCV-RNA定量、抗-HCV抗体滴度可提高丙型肝炎的检出率,检测肝脏酶谱可一定程度评估肝脏受损状况,为丙型肝炎诊断治疗及疗效观察提供临床价值。