丙型肝炎病毒IgG抗体阳性者确诊丙型肝炎的高危因素分析及列线图预测模型构建

目的分析丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)免疫球蛋白G(IgG)抗体阳性者中确诊HCV的高危因素,同时建立列线图(nomogram)预测模型,为基层医疗机构丙肝的临床诊断和转诊决策提供依据。方法回顾性收集2022年1月—2023年10月住院筛查患者中同时进行HCV\|RNA、HCV-IgG抗体、肝功能和血常规检测HCV-IgG抗体阳性者的人口学特征及丙肝相关各项指标。采用logistic回归分析HCV-IgG抗体阳性者确诊丙肝的高危因素,并构建nomogram模型,分别采用一致性系数和校准曲线评估模型的预测性能和符合度。结果394例HCV-IgG抗体阳性者中,HCV-RNA阳性率为30.2%。多因素logistic分析显示,在HCV-IgG抗体阳性的人群中,HCV-IgG≥5.0 S/CO、天冬氨酸氨基转移酶(AST)>35 U/L和有肝炎相关临床症状为HCV-RNA阳性的独立危险因素,其OR值分别为233.926(95%CI:31.814~1720.046)、4.079(95%CI:2.105~7.904)和5.295(95%CI:1.505~18.634)。用于预测HCV-RNA阳性的nomogram模型准确度为0.923,灵敏度为99.2%,特异度为74.5%。结论基于HCV-IgG抗体、AST和肝炎相关临床症状的nomogram模型具有高准确度,可用于指导临床医生判断HCV-IgG抗体阳性者确诊HCV感染的风险。

丙型病毒性肝炎抗体检测与HCV高敏核酸检测对病毒性丙型肝炎的筛查价值研究

目的通过对本院2019年1月至2022年9月需进行手术、输血或其他侵入性医疗服务的住院患者的HCV血清学抗体及高敏HCV RNA筛查结果进行回顾性分析,探讨丙型病毒性肝炎抗体检测与HCV高敏核酸检测对病毒性丙型肝炎的筛查检测价值。方法对本院相关住院患者进行Elecsys Anti-HCV II或(和)高敏HCV RNA检测,统计分析其检测结果。结果HCV血清学抗体检测22443人次,阳性率为0.68%,阳性COI中位数为38.4(1.0~165)。高敏HCV RNA检测34628人次,阳性率0.30%,阳性病毒载量中位数为1.00×10^(6)IU/mL(3.50×10^(1)~4.00×10^(7)IU/mL)。两种方法学均显示45~59岁人群阳性率显著高于其他人群(P<0.001)。两种检测有重合的样本共17785人次,HCV抗体血清学阳性率为0.70%。高敏HCV RNA阳性率0.22%,如以高敏HCV RNA为丙型肝炎现症感染的标准,HCV抗体血清学检测HCV现症感染的灵敏度为100.00%(95%CI 89.09%~100.00%),特异性为99.52%(95%CI 99.41%~99.61%),现症感染阳性预测期PPV为32.00%(95%CI 23.82%~40.18%),阴性预期值为100.00%。HCV抗体血清学检测COI值与高敏HCV RNA检测的病毒载量无线性相关性,COI<10和COI>100的HCV RNA阳性率低。结论HCV抗体检测和高敏HCV RNA均为有效的丙型肝炎筛查手段,需进一步加强对重点人群的丙型肝炎感染管理。

丙型肝炎病毒抗体化学发光免疫分析法≥95%阳性预测值最佳吸光度/临界值建立方法学和重要性探讨

目的确定丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体阳性预测值≥95%的最佳吸光度/临界值(signal-to-cutoff,S/CO),确定首都医科大学附属北京地坛医院实验室医学决定水平,为探索不同系统丙型肝炎病毒抗体检测试剂95%阳性置信区间建立方法学。方法收集2021年7月至2022年2月门诊及住院患者进行化学发光免疫分析法(chemiluminescence analysis,CLIA)初筛检测同时进行HCV RNA检测的血浆样本共282例,其中抗体初筛有反应性(S/CO≥1)样本252例,阴性样本30例,进行重组免疫印记试验(recombinant immunoblot assay,RIBA)并查阅其HCV RNA检测结果,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线得到预测本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染的抗体S/CO值。结果初筛为阴性的30例样本双重确证试验结果均为阴性;排除16例HCV感染史不明确的样本,丙型肝炎病毒抗体S/CO≥1的236例样本经双重确证试验得到真阳性样本188例,阴性样本48例,经ROC曲线分析,本实验室阳性预测值≥95%时,本实验室抗体S/CO值为7.83,灵敏度为93.09%,特异度为95.83%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.98(P<0.0001)。结论为临床提供本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染抗体的S/CO值以协助临床诊疗。

门诊血液透析患者丙型肝炎病毒抗体假阳性情况调查与分析

目的:调查门诊血液透析患者丙型肝炎病毒抗体假阳性的发生率和发生原因,以便正确处理抗体检测报告和医患沟通困扰。方法:对中国人民解放军南部战区总医院2019年12月至2022年12月279名门诊血液透析患者的丙型肝炎病毒抗体和丙型肝炎病毒RNA检测结果进行整群抽样、横断面调查和回顾性研究。结果:调查发现共有81人丙型肝炎病毒抗体假阳性,占29.03%;其中S/CO值介于1.0~5.0的占98.77%,介于5.0~10.0的占比为1.23%。全部病例经HCV-RNA复核3次,均为阴性。检验科与输血医学科采取不同的检测方法与报告程序,结果有显著性差异(P<0.01)。结论:丙型肝炎病毒抗体S/CO值处于灰区范围时多为假阳性,且与抗体检测策略和报告程序有关。

丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体滴度、miR-27a和 miR-130a水平及意义

目的 探究丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、微小RNA-27a(miR-27a)和miR-130a表达水平及意义。方法 选取2020年1月至2022年6月就诊于西安市北方医院的152丙型肝炎患者作为观察组,另选取同期在该院体检的健康人员152例作为对照组。测定两组血清miR-27a、miR-130a水平及观察组血清HCV-Ab滴度和HCV-DNA载量。比较两组血清miR-27a、miR-130a水平,分析观察组血清HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平与HCV-DNA载量、肝脏组织炎症活动度和纤维化程度的相关性,探究其在丙型肝炎肝硬化预测中的价值。结果 观察组血清miR-27a、miR-130a水平均显著高于对照组(P<0.01)。观察组血清HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平均与HCV-DNA载量呈正相关性(P<0.01);肝脏炎症G4级患者的血清HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平>G3级>G2级>G1级(P<0.01);肝脏纤维化S4期患者血清HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平>S2~S3期>S1期>S0期(P<0.01)。受试者工作特征曲线分析结果显示,丙型肝炎患者血清HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平均对肝硬化发生具有一定预测价值,且3项指标联合检测的曲线下面积明显高于各指标单独检测(P<0.01)。结论 丙型肝炎患者血清miR-27a、miR-130a表达水平上调,患者HCV-Ab滴度、miR-27a、miR-130a水平均与HCV-DNA载量、肝脏炎症活动度和纤维化严重程度呈一定相关性,故血清miR-27a、miR-130a水平和HCV-Ab滴度对肝硬化具有一定预测价值,且联合检测预测肝硬化效能更高。

CLIA与ELISA检测在丙型肝炎病毒抗体中的应用价值比较

目的:对比研究化学发光酶免疫分析法(CLIA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检查在丙型肝炎病毒(HCV)抗体中的临床价值。方法:挑选疑似HCV侵扰86例,全部患者均进行CLIA与ELISA检测,以重组免疫印迹法检查结果为“金标准”,统计CLIA、ELISA的检查结果,并分析相关病毒抗体检出率。结果:本组86例疑似HCV感染患者,经重组免疫印迹法诊断阳性80例,阴性6例;经ELISA检查出真阳性69例,真阴性1例;经CLIA诊断出真阳性79例,真阴性2例。CLIA检查抗SP100抗体、抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗PML抗体检出率38.37%高于ELISA检查;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:与ELISA比较,CLIA诊断HCV能提高HCV抗体检出率,便于临床早期治疗疾病。

丙型肝炎病毒的血清抗体检测及基因组cDNA扩增

采用抗HCV-N14和抗HCV-C100-3抗体试剂盒检测丙型肝炎(丙肝)高危人群血液标杯1544人份。丙肝抗体阳性率为:输血后肝炎64.5％、血液透析病人28.6％、肝硬变19.1％、肝细胞癌10.5％、临床非甲非乙型肝炎7.3％、献血员4.1％和医院工作人员2.6％,表明丙型肝炎病毒(HCV)感染在我国相当严重。抗HCV-N4抗体出现较早,且与多聚酶链反应PCR的基因诊断有较好的相关性,是判定HCV感染及其传染性的重要指标。

金标渗透法快速检测血清中丙型肝炎病毒抗体

采用基因工程技术克隆表达了丙型肝炎病毒 ( HCV) - Core- Ns3- Ns4优势表位嵌合抗原 ,研制出金标渗透法快速检测丙型肝炎病毒抗体试剂 ,与抗丙型肝炎病毒抗体酶联免疫检测试剂 ( HCV- EL ISA)和重组免疫印迹分析检测试剂 ( HCV- RIBA3.0 )进行了比较 ,其特异性、敏感性均达到了

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM 10 9中表达可溶性的HCV core ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV core ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经NcoI/NotI酶切鉴定 ,该ScFv基因由 75 0bp组成。将其亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCV core ScFv的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV core ScFv具有重组HCV核心蛋白的反应活性和特异性。对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表达的HCV core ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV core ScFv的分子量为 2 8kDa。为应用HCV core ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)诊断试剂盒质检评价分析

目的:对进口、国产2个厂家的6个不同批次试剂盒进行抽检,以保证试剂的质量,预防不合格试剂用于标本检测。方法:采用抽检的不同批次的试剂盒检测国家标准品考核血清盘,30份阳性血清,30份阴性血清和4份灵敏度血清,计算其灵敏度,特异性,相对符合率等指标。结果:进口抗丙型肝炎病毒(HCV)诊断试剂盒的6个不同批次试剂盒的特异性为99.6%,灵敏度为100%,相对符合率为98.33%;国产抗-HCV诊断试剂盒的6个不同批次,有1个批次的特异性为90.00%,灵敏度为86.66%,相对符合率为88.33%;其他5个批次的特异性为100%,灵敏度为96.66%,相对符合率为98.33%。结论:进口试剂所有批次全部合格,国产试剂有1个批次不合格,退回厂家。影响试剂质量的因素是多方面的,经国家有关部门检定合格的试剂,在投入使用之前必须进行抽检,确保检测结果可靠。

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量检测

目的 了解丙型肝炎病毒 (HCV)抗体酶联免疫诊断试剂反应时间与灵敏度及特异性的关系。方法 用丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂对阴、阳性血清进行检测 ,在加入样品后的不同反应时间分别进行显色终止 ,波长 492nm下测A值。结果 加入样品后的反应时间影响丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂灵敏度 ,对特异性没有影响。加入样品后的 2 0～ 3 0min ,反应时间对灵敏度影响变化最大。结论 延长反应时间 ,可提高阳性样品特别是弱阳性样品的检出率 ,对阴性样品无明显影响。

丙型肝炎病毒非结构蛋白 3人源单链可变区抗体的筛选与鉴定(英文)

目的筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 NS3的人单链可变区抗体 (Sc Fv) ,以解决人体内应用鼠单抗时的免疫原性问题 ,为进行抗 HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的 HCV非结构蛋白 NS3为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 -洗脱 -扩增”筛选过程 ,获得抗原结合活性较强的 HCVNS3人单链可变区抗体的阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。结果筛选出来的 Sc Fv片段具有抗 NS3的特异性。证实利用噬菌体抗体库技术 ,可以成功地获得 HCV NS3人单链抗体 Sc Fv的编码基因。结论筛选获得了 HCV非结构蛋白 NS3的特异性单链抗体的编码基因。

丙肝病毒核心抗原与丙肝抗体联合检测在丙型肝炎诊断中的应用

目的:通过检测丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-c Ag)、丙型肝炎抗体(HCV-Ab),探讨联合检测在丙肝诊断中的价值。方法:用ELISA方法对3 000例门诊及住院患者进行HCV-c Ag与HCV-Ab的联合检测,对单项阳性或两项均阳性者同时进行PCR法HCV-RNA检测。结果:3 000例患者中,进行HCV-c Ag与HCV-Ab联合检测,单项阳性或两项均阳性共45例,以HCV-RNA阳性作为分组标准,经HCV-RNA确证阳性39例,阴性6例,HCV-c Ag检测的阳性预测值为94.1%,HCV-Ab检测的阳性检出率为94.9%,两种方法联合检测可大大提高HCV临床检出率。结论 :HCV-c Ag检测与HCV-Ab检测能相互补充,两者联合检测更理想,能有效减少丙肝窗口期的漏检,有助于实现丙肝的早期防治,值得临床推广应用。

对两种丙型肝炎病毒抗体辅助确认试剂灵敏度的比较

目的 对两种市售HCV-Ab辅助确认试剂的灵敏度进行比较,以便选定用于献血者最终确认的试剂。方法 应用Chiron公司的RIBA和Genelabs公司的WB确认试剂,对6种ELISA试剂检测阳性的168份血样进行确认检测。结果 168份标本中,124份标本两种试剂结果一致;在125份有反应的标本中,Chiron公司的RIBA对Core、NS_3、NS_4和NS_5区抗体分别检出51、60、53、和37份;Genelabs公司的WB对Core、NS_3、NS_4和NS_5区抗体分别检出77、69、56和30份。结论 两种试剂检测不同抗原的反应性存在差别,Genelabs公司的WB的灵敏度高于Chiron公司的RIBA。

丙型肝炎病毒抗体筛查阳性结果确证方案的探讨

目的明确抗-HCV酶免检测结果与确证阳性结果之间的相互关系,以期建立简便、经济的血液筛查实验室抗-HCV确证试验方案。方法使用重组免疫印迹试验结合核酸检测方法对134份酶免抗-HCV阳性样本确证,初步探讨2或3种抗-HCV酶免试剂(Ortho、Murex和科华联合复检的S/Co值与阳性预期值的关系及不同试剂组合检测的阳性预期值。结果134份样本中,92份真阳性,5份可疑,其余均为阴性。Ortho和Murex试剂的S/Co与阳性预期值呈正相关,当S/Co≥3.8时,阳性预期值分别可达98.33%和97.78%。Murex联合科华、Ortho联合科华以及3种试剂同时检测为阳性时的阳性预期值为100%;Ortho联合Murex的阳性预期值为98.48%,与上述其它2或3种试剂组合比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论2种或3种酶免试剂联合复检的确证方案优于美国CDC推荐的S/Co≥3.8方案。在常规血液筛查实验室,可以选择3种抗-HCV试剂中的任2种同时复检,先行对抗-HCV阳性标本确证,对无法确证的样本再作重组免疫印迹试验分析。

丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒载量及肝功能间的相关性

目的研究丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒（HCV）载量及肝功能三者之间的相关性。方法检测168例丙肝患者自身抗体、丙肝病毒载量以及肝功能结果，并选取和检测129例健康对照者的自身抗体，其中计数资料采用卡方检验、计量资料采用t检验或者非参数秩和检验，统计分析丙肝患者与健康对照组自身抗体检出率差异，分析丙肝患者中自身抗体、病毒载量以及肝功能三者间的相关性，并分析自身抗体检出率与患者年龄、性别的关系。结果丙肝患者自身抗体阳性检出率为35.12％（59／168），各抗体阳性率分别为：抗核抗体（ANA）33.93％，抗平滑肌抗体（SMA）2.98％，抗线粒体 M2抗体（AMA-M2）1.80％，抗肝肾微粒体抗体（anti-LKM1）1.20％。抗胞浆抗体和抗可溶性肝抗原抗体未检出阳性。丙肝患者自身抗体总检出率及抗核抗体检出率较健康对照组高（χ2＝23.179，P＝0.000；χ2＝21.360，P＝0.000）。丙肝患者中，自身抗体阳性组与阴性组间丙肝病毒载量、总胆红素、谷氨酸氨基转移酶以及天冬氨酸氨基转移酶水平差异无统计学意义（χ2＝0.113，P＝0.945；Z＝－1.087，P＝0.277；Z＝－1.356，P＝0.175；Z＝－0.153，P＝0.878）；自身抗体检出率与性别无关（χ2＝2.897，P＝0.089），而与年龄相关（t＝3.274，P＝0.001）。HCV RNA阴性组与阳性组间谷氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平以及年龄的差异具有统计学意义（Z＝－6.430，P＝0.000；Z＝－6.123，P＝0.000；t＝－3.152，P＝0.002），HCV RNA阴性组年龄低于阳性组（44.17岁 vs 55.27岁）。结论丙肝患者容易发生自身免疫，自身抗体的产生与年龄有关，而与体内丙肝病毒载量的高低无关，也不能预测患者的肝功能损伤情况。HCV载量与患者年龄及肝损伤相关，高龄组病毒载量较高，肝损伤较严重。

丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义

目的 对丙型肝炎病毒 (HCV)包膜区E2基因进行克隆与表达 ,并将纯化的E2蛋白用于对HCV感染者血清中E2抗体的检测。方法 首先从HCV感染者血清中经随机引物反转录和聚合酶链反应 (PCR)获得E2区基因片段 ,然后克隆入原核表达系统pQE 30中进行蛋白表达、纯化 ,并检测表达蛋白的抗原性。结果 获得一段具有正确读码框架的E2区基因 ,全长 984bp ,表达蛋白分子量为 38kD。经与HCV感染者血清进行ELISA检测 ,证明其具有一定的抗原性。结论 本实验为研究HCV外膜蛋白的基本特点。

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-IdscFv),为研制HCVE2的抗-IdscFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCVE2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCVE2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCVE2特异性抗-IdscFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-IdscFv与HCVE2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高(E11A450nm0.928,E14A450nm1.152,E17A450nm1.136,E28A450nm1.163,E53A450nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11A450nm0.044,E14A450nm0.062,E17A450nm0.166,E28A450nm0.012,E53A450nm0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(E28)阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCVE2的抗-IdscFv,本实验结果为开展用抗-IdscFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.

丙型肝炎病毒抗体联合核酸定量检测对丙型肝炎患者的早期诊断价值研究

目的探讨在丙型肝炎患者早期诊断中丙型肝炎病毒抗体联合丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)检测的临床价值。方法对116例鼓楼医院住院及门诊丙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定HCV RNA、酶联免疫吸附试验(ELISA)和金标法测HCV抗体、速率法测丙氨酸氨基转移酶(ALT)。结果 116例丙型肝炎患者中,ELISA HCV抗体阳性97例(占83.6%),HCV RNA阳性85例(占73.3%),HCV金标阳性77例(占66.4%),ALT阳性69例(占59.5%),HCV抗体和HCV RNA联合检测总阳性率(指任一指标阳性即为阳性)为100.0%。结论 HCV抗体和HCV RNA联合检测扩大了丙型肝炎检测范围,降低了丙型肝炎的漏诊率,有利于丙型肝炎的早期诊断。