应用丙型肝炎病毒合成肽检测HCV特异性IgM抗体

目的筛选验证捕捉丙型肝炎病毒(HCV)抗体能力最强的合成肽,进一步探讨抗HCV-IgM的效价与HCVRNA含量之间的关系。方法合成HCVCp14、HCVCp9和HCV5-1-1三种肽段,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙丙型肝炎和抗HCV阳性者血清抗HCV-IgM。同时测定HCVRNA。结果在39例急性丙型肝炎患者中,抗HCVCp14-IgM的阳性率为89.7%,而HCVCp9-IgM和抗HCV5-1-1-IgM的阳性率分别为48.7%和17.9%。HCVCp14-IgM的效价(A492nm值)>2.0以上者,HCVRNA的平均含量为105.1±3.6copies/μl。结论抗HCVCp14-IgM的检出及效价高低与HCV的复制活跃程度相关。

丙型肝炎病毒IgG抗体阳性患者血清抗HCV IgM、ALT及HCV RNA的对比分析

目的:探讨丙型肝炎(H C V)IgG阳性患者的血清抗-H C V IgM、丙氨酸转移酶(A LT)水平与H C V R N A之间的关系。方法:通过第三代E IA试剂盒检测抗-H C V IgG、抗-H C V IgM,全自动生化分析仪检测丙型肝炎患者A LT水平,荧光定量逆转录聚合酶链反应(R T-PC R)方法检测H C V R N A,并进行比较。结果:在丙型肝炎IgG阳性患者中,抗-H C V IgM阳性率为8.3%,H C V R N A阳性率为41.7%。H C V R N A的检出在A LT异常情况下较正常明显高(P<0.05),但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性(r=0.346,P>0.05)。结论:抗-H C V IgM不能反映病毒复制,A LT异常情况下H C V R N A检出率高,但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性,H C V R N A仍是反映H C V复制的可靠指标。

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-IdscFv),为研制HCVE2的抗-IdscFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCVE2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCVE2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCVE2特异性抗-IdscFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-IdscFv与HCVE2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高(E11A450nm0.928,E14A450nm1.152,E17A450nm1.136,E28A450nm1.163,E53A450nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11A450nm0.044,E14A450nm0.062,E17A450nm0.166,E28A450nm0.012,E53A450nm0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(E28)阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCVE2的抗-IdscFv,本实验结果为开展用抗-IdscFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.

用芯片研究丙型肝炎病毒不同功能区抗体

目的 用蛋白质芯片研究 HCV不同功能区抗体及临床意义。方法 将抗原性强的 C、NS3、NS4、NS5片段用芯片点样仪定量点加在醛基化玻片上来制作蛋白芯片。用进口 HCV(EL ISA)筛选出 6 5例抗 - HCV阳性标本 ,阳性标本用芯片检测不同功能区抗体 ,并测定 HCV- RNA;同时用芯片检测 2 4例抗 - HCV阴性的正常献血员血清。结果 2 4例抗 - HCV阴性标本用芯片检测均阴性 ;6 5例抗 - HCV阳性标本经芯片均有 1～ 4种抗体阳性 ,其中抗 - C+抗 - NS3+抗 - NS4+抗 - NS5阳性率最高 ,占 33.8% ;抗 - C、抗 - NS3、抗 NS5、抗 NS4总的检出率分别为98.5 %、89.2 %、5 2 .3%和 5 0 .8% ;未发现单独含抗 - NS3、抗 - NS4的血清 ;抗 - C+抗 NS3+抗 - NS4+抗 - NS5阳性血清中 HCV- RNA检出率最高 ,占 77.3% ;HCV- RNA阳性血清中抗 - NS5阳性率最高 ,占 6 1.8% ,说明抗 - NS5与 HCV- RNA最有相关性 (P<0 .0 5 )。结论 蛋白质芯片显示较高的敏感性与特异性 ;抗 - C、抗 - NS3在诊断抗 -HCV都很重要 ,抗 - NS4及抗 - NS5有诊断的互补作用 ,而抗 - NS5在一定程度上能反映 HCV的复制情况。

用合成肽测定抗丙型肝炎病毒高变区抗体及其意义

目的 探讨慢性丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清中抗高变区 1 (HVR1 )抗体的多型性及其临床意义。方法 利用 1 4种不同氨基酸序列的HVR1 合成肽作为包被抗原 ,采用酶免疫测定检测 2 9例慢性HCV感染者血清中HVR1 抗体 ,并与其他指标进行比较分析。结果 2 9例患者血清中均存在能与 2～ 1 2种HVR1 合成肽发生免疫反应的抗体。该组患者与 1 4种合成肽反应的HVR1 抗体总阳性率为 1 0 0 % ;肝硬化丙肝患者与非肝硬化患者的HVR1 抗体阳性率差异无显著性 ;血清HCVRNA阳性组与阴性组其抗体的阳性率差异亦无显著性。结论 慢性HCV感染者的血清中均存在多型性HVR1抗体。这种抗体不能清除体内的HCV ,亦似与病情。

胶体金法与ELISA法在检测血液丙型肝炎病毒抗体中的比较

目的探索胶体金法与ELISA法在检测血液丙型肝炎病毒抗体中的应用价值。方法选择近期在我院住院治疗的541例丙型肝炎疑似患者。回顾分析胶体金法与ELISA法检测结果,对照分析胶体金与ELISA法检测结果、检查时间和费用。结果 541份样本中,与ELISA法检测结果进行对比,胶体金法相对特异性为96.0%(261/272),相对灵敏性为88.8%(239/269),相对准确性92.4%(500/541)。胶体金与ELISA法检测结果差异显著(P<0.05)。对照显示,HCV胶体金检查时间〔(22.4±4.6)min〕和费用〔(6.2±1.1)元〕显著低于ELISA法的检测时间〔(118.2±21.1)min〕和费用〔(13.3±3.2)元〕(P<0.05)。结论胶体金法应用于丙型肝炎病毒检测,操作便捷、省时及费用低,且有相对较高的特异性和灵敏度,可作为紧急和特殊需要情况下的初筛。

116例阳性血清中丙型肝炎病毒RNA定量检测及其抗体丙氨酸转氨酶结果分析

我国一般人群丙型肝炎病毒（HCV）感染率约为3．2％（0．1％。10％），HCV感染严重危害人类的健康，早期发现HCV感染患者，可及时进行抗HCV治疗。抗-HCV抗体及HCV核糖核酸（HCV RNA）是诊断丙型肝炎的主要病原学指标。本文采用EIA法检测抗-HCV，用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测HCV RNA，同时用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶（ALT），对结果进行比较分析，探讨两种检测方法在临床诊断治疗中的意义。

丙型肝炎病毒抗体光密度值与丙型肝炎病毒核酸的关系

〔目的〕了解抗ＨＣＶ的ＯＤ值与ＨＣＶ—ＲＮＡ的关系，为丙型肝炎的诊断提供科学依据。［方法］从太原市中心血站、太原市卫生防疫站、山西省强制戒毒所、山西省妇女劳动教养所、本站性病门诊、山西医科大学第一医院采集抗ＨＣＶ阳性血清 ２９６份，筛选出抗ＨＣＶ阳性的血清 ２２８份，用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ—ｎｅｓｔ ＰＣＲ）进行 ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测。［结果］２２８份抗ＨＣＶ阳性标本中，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者１６１例，阳性率为７０．６１％。在抗ＨＣＶ的效价增高到一定值（ＯＤ／ＣＯ≥８．０）时，ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率增高较明显。结果还显示，不同人群抗ＨＣＶ阳性者的ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率有差别，献血员、丙型肝炎患者的ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率较高（８５．２５％和 ８１．８２％）。 ［结论］当抗ＨＣＶ阳性的血清ＯＤ／ＣＯ≥８． ０时，ＨＣＶ—ＲＮＡ很可能也为阳性。

115463例住院及门诊患者丙型肝炎病毒抗体检测结果分析

丙型肝炎是一种主要经血液传播，性传播，母婴传播的疾病[1]。可导致急慢性肝炎、肝硬化和肝癌。我国一般人群丙型肝炎感染率为3．2％[2]，全球约有1．7亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3．5万例[3]，为了解杭州地区医院就诊患者HCV感染状况，回顾性分析2010—2012年间来本院就诊的115463例住院及门诊患者的血清标本抗HCV检测结果，现报告如下。

重组表达丙型肝炎病毒非结构蛋白2(NS2)及其血清抗NS2抗体检测方法的建立与评价

目的重组表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2),建立并评价基于化学发光法的血清抗NS2抗体的检测方法。方法以HCV 1b基因型的NS2核苷酸序列质粒(PUC-NS2)为模板,构建包含NS2全序列的重组质粒(pGEX-KG-NS2);诱导NS2蛋白原核表达,将纯化后的NS2融合蛋白包被于微孔板,基于化学发光法制备抗NS2抗体检测试剂盒,并对其方法学指标进行评价。结果成功诱导获得相对分子质量(M_(r))约51000的NS2融合蛋白;并制备血清抗NS2抗体检测试剂盒,试剂盒方法学评价:精密度试验(批内变异系数4.60%~9.17%,批间变异系数6.62%~10.09%)结果良好,空白限和检出限的相对发光强度比值(RLIR)分别为1.57、4.80(r=0.9870),分析测量范围(AMR)为1.63~44.50 RLIR;准确度试验:平均回收率为99.4%,类风湿因子等阳性血清标本对本试验无交叉反应,试剂盒15个月内稳定,45例HCV感染者血清抗NS2抗体阳性率为20%(9/45)。结论获得了原核表达的HCV NS2并制备了检测血清抗NS2抗体的试剂盒。

不同基因型丙型肝炎病毒感染者的自身免疫表现

目的 研究不同基因型HCV感染的丙型肝炎患者体内的自身抗体和其他免疫指标。方法 2 4例丙肝患者为研究组 ,5 2例健康体检者为对照组。HCV感染用RT PCR证实。HCV基因型的检测用型特异性探针核酸杂交法检测。抗核抗体和抗平滑肌抗体用免疫荧光法检测 ,抗Sm抗体和抗RNP抗体用对流免疫电泳法检测 ,类风湿因子、抗双链DNA抗体、抗心磷脂抗体、抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体用ELISA检测。冷球蛋白用冷沉淀法检测。免疫球蛋白水平用速率散射比浊法测定。循环免疫复合物用抗补体法测定。结果 ( 1) 2 4例丙肝患者中 ,13例 ( 5 4 2 % )为Ⅱ型HCV(okamoto分型法 )感染 ,7例 ( 2 9 2 % )为Ⅲ型 ,2例 ( 8 3 % )为混和型 (Ⅱ型 +Ⅲ型 ) ,2例 ( 8 3 % )难以确定。 ( 2 )自身抗体检测 :患者组中有 10例( 4 1 7% )检出 2 1项次自身抗体。Ⅱ型HCV感染的 13例中有 7例检出 16项次 ,Ⅲ型HCV感染的 7例中有 1例检出 1项次 ,Ⅱ型和Ⅲ型混和感染的 2例中检出 4项次自身抗体。检出自身抗体的患者中有 7例检出类风湿因子 ,4例检出抗核抗体 ,4例检出抗心磷脂抗体 ,2例检出抗平滑肌抗体 ,2例检出抗甲状腺球蛋白抗体 ,1例检出抗甲状腺微粒体抗体 ,1例检出抗双链DNA抗体。结论 ( 1)在本地区的丙肝患者中 。

献血员血清中抗丙型肝炎病毒抗体调查研究

丙型肝炎病毒(HCV)是目前世界上输血后和散发性非甲非乙肝炎的主要病原。有调查证实,输血后肝炎患者于发病1～6个月内采血检测,抗—HCV阳性率分别为82.8％和95.7％,而献血员抗—HCV阳性率为1％左右。

丙型肝炎病毒RNA定量检测的诊断评价

丙型肝炎病毒（Hepatitis Cvires，HCV）具有高度异质性，主要经血液和血制品传播。呈世界性流行，全球约1．7亿人感染HCV，感染率约为3％。我国一般人群HCV抗体（抗～HCV）阳性率为3．29／6，约有3800万HCV感染者。目前丙型肝炎病毒感染发病人群仅次于乙型肝炎病毒感染人群，

丙型肝炎病毒核酸定量测定的临床价值

目的 研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法 用FQ-PCR法检测128份怀疑HCV感染的血清中的HCV-RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果 128份样本中HCV-RNA阳性率为53.9%(69/128);抗-HCV阳性率为62.5%(80/128);ALT异常率为51.0%(65/128)。HCV平均载量为8.52×105 拷贝/ml血清。抗-HCV滴度和ALT异常随着HCV-RNA载量升高而增加。结论 用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定(1)抗HCV与抗-HBs不同,不是中和抗体,(2)高滴度抗-HCV血清具有传染性。(3)抗-HCV滴度与HCV-RNA浓度之间呈正相关性r=0.952, P<0.001,且有符合性和互补性,(4)对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV-RNA阴性或阳性可以鉴别活动性、复制性程度,(5)是评价丙型肝炎抗病毒治疗效果的重要指标。

在小鼠模型中抗闭锁蛋白单克隆抗体完全阻止了丙型肝炎病毒的感染

丙型肝炎病毒(HCV)进入宿主细胞的过程分多步完成。过程中需要多种宿主因子,闭锁蛋白(OCLN)作为紧密连接蛋白被包括在内,并且体外细胞培养系统业已表明其在HCV感染过程中不可或缺。然而,由于缺乏能够识别完整OCLN细胞外环状结构域并抵御HCV感染的连接子,研究者们尚不清楚OCLN是否能够作为HCV治疗手段中有效且安全的目标物。通过使用基因免疫法和独特细胞差异化筛选技术,研究者成功制备了四种大鼠抗OCLN单克隆抗体(mAb)。

丙型肝炎病毒高变区的变异规律及临床意义

丙型肝炎病毒(HCV)感染有潜在的致肝硬化和肝癌的危险。约60％的急性丙型肝炎患者转为慢性,到目前为止,尚未发现令人满意的治疗药物。机体自身难以清除HCV的主要原因是HCV具有高度异质性(heterogeneity),HCV可借自身的变异达到逃避机体的免疫攻击。研究HCVE区基因的变异规律及特点,可为HCV疫苗的设计和制备提供理论依据,这是当前HCV研究的一个前沿课题。现就E区基因变异的原因、规律及其临床意义加以综述。