丙型肝炎病毒蛋白对Bcl-10蛋白信号转导的影响

0 引言 最初原癌基因Bcl-10是作为低度B细胞淋巴瘤(BCL,B-cell lymphoma)相关基因得到鉴定的,Bcl-10是一种含有胱冬肽酶募集结构域(caspase recruitment domain,CARD)的蛋白,同时属于黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoidtissue,MALT)B淋巴瘤中鉴定的断裂位点的基因,在淋巴细胞中抗原受体介导的NF-κB激活过程中是必需的.Bcl-10属于CARD蛋白家族成员,调节细胞凋亡和NF-κB信号转导[1-5].初步研究结果表明,丙型肝炎病毒(HCV)基因组编码蛋白对于Bcl-10的基因表达水平具有显著的上调作用,Bcl-10基因的表达在HCV感染引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的发病机制中具有重要的作用[6].

乙型和丙型肝炎病毒蛋白对于细胞周期素A的调节研究

0引言细胞周期(cell cycle)是细胞分裂增生的经典概念,过去的研究主要集中在细胞周期的形态学描述上.随着细胞周期素(cyclin)和细胞周期素依赖性激酶(cyclin dependentkinase,CDK)的发现及其作用机制的研究进展,使得我们对于细胞周期调节有了分子生物学水平上的深入认识.细胞周期的分子生物学调节机制的研究,也促进了肿瘤形成的分子生物学机制的研究,同时对于肿瘤病毒(oncogenic virus)引起正常细胞的恶性转化机制的研究具有十分重要的促进作用.

乙型和丙型肝炎病毒蛋白反式激活作用机制及其意义的研究进展

编者按乙型肝炎病毒(HBV)和丙肝炎病毒(HCV)感染不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)的发生、发展密切相关.

丙型肝炎病毒蛋白疫苗的研究进展

丙型肝炎病毒 (HepatitisCVirus ,HCV)是丙型肝炎的病原体 ,是导致输血后肝炎和急慢性非甲非乙型肝炎的主要致病因子。HCV感染常导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。目前尚没有治疗丙型肝炎的特效药物 ,也没有有效的丙型肝炎病毒疫苗。

乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响

0 引言生物细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号。信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的最终结果。相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应。

乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响

0引言 生物的细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号.信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的最终结果.相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应.细胞的一切生命活动都与信号有关,信号是细胞一切活动的始作俑者.因此,对信号转导的研究非常重要,非常有用.由于肝炎病毒可以影响细胞信号转导,引起细胞的病变及恶性转化[1],而蛋白酪氨酸激酶是重要的细胞信号转导激酶,因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制会有进一步的了解.

丙型肝炎病毒IgG抗体阳性者确诊丙型肝炎的高危因素分析及列线图预测模型构建

目的分析丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)免疫球蛋白G(IgG)抗体阳性者中确诊HCV的高危因素,同时建立列线图(nomogram)预测模型,为基层医疗机构丙肝的临床诊断和转诊决策提供依据。方法回顾性收集2022年1月—2023年10月住院筛查患者中同时进行HCV\|RNA、HCV-IgG抗体、肝功能和血常规检测HCV-IgG抗体阳性者的人口学特征及丙肝相关各项指标。采用logistic回归分析HCV-IgG抗体阳性者确诊丙肝的高危因素,并构建nomogram模型,分别采用一致性系数和校准曲线评估模型的预测性能和符合度。结果394例HCV-IgG抗体阳性者中,HCV-RNA阳性率为30.2%。多因素logistic分析显示,在HCV-IgG抗体阳性的人群中,HCV-IgG≥5.0 S/CO、天冬氨酸氨基转移酶(AST)>35 U/L和有肝炎相关临床症状为HCV-RNA阳性的独立危险因素,其OR值分别为233.926(95%CI:31.814~1720.046)、4.079(95%CI:2.105~7.904)和5.295(95%CI:1.505~18.634)。用于预测HCV-RNA阳性的nomogram模型准确度为0.923,灵敏度为99.2%,特异度为74.5%。结论基于HCV-IgG抗体、AST和肝炎相关临床症状的nomogram模型具有高准确度,可用于指导临床医生判断HCV-IgG抗体阳性者确诊HCV感染的风险。

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活SV40病毒早期启动子/增强子的研究

目的 :探讨丙型肝炎病毒核心蛋白的反式激活作用。方法 :以重组质粒pcDNA3 core(含有HCV核心蛋白编码基因 )转染HepG2细胞 ,从转录和翻译水平鉴定核心蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2细胞 ,检测 β 半乳糖苷酶表达活性 ,酶的活性反映了表达的核心蛋白对SV40病毒早期启动子 /增强子功能的影响。结果 :质粒pcDNA3 core在HepG2细胞瞬时表达核心蛋白 ,共转染实验中pcDNA3 core组 β 半乳糖苷酶的表达是空质粒对照的 5 4倍。结论 :HepG2细胞中表达的核心蛋白具有反式激活SV40早期启动子 /增强子的特性 。

丙型肝炎病毒NS3蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究

丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立了稳定表达HCVNS3蛋白的人源永生化肝细胞系QSG7701/NS3,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子AP-1、NF-κB和STAT3的活性变化.结果表明:HCVNS3蛋白可促进人源永生化肝细胞QSG7701的增殖,HCVNS3蛋白激活ERKs/AP-1可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子NF-κB和STAT3的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤.

丙型肝炎病毒核心蛋白活化NF-κB介导的信号传导途径

目的 研究丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core protein)致病作用的细胞内信号传导途径。方法将人HCV核心蛋白cDNA克隆至载体pCXN2上，经基因测序及转染Cos-7细胞后检测核心蛋白表达等方法选出构建成功的pCXN2-core重组质粒，用该质粒分别与环AMP反应分子(CRE)、血清反应因子(SRF)、血清反应分子(SRE)、活化蛋白-1(AP-1)及核转录因子κB (NF-κB)重组表达质粒共转染Hela细胞，通过检测转染后细胞内荧光素酶活性确定与核心蛋白作用的因子。结果HCV核心蛋白可激活NF-κB介导的信号传导途径，且随着pCXN2-core转染量的增多，NF-κB被活化的程度也升高，两者呈剂量依存关系。结论HCV核心蛋白通过活化NF-κB介导的细胞内信号传导途径发挥其致病作用。

丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为。方法构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFAT1 mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加。结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关。

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因TAHCCP2的克隆

目的:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因.方法:以 HCV 核心蛋白表达质粒 pcDNA3.1(-)-core 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取 mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,从转染 pcDNA3.1(-)-core 的 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:新基因命名为 TAHCCP2,编码序列全长为429个核苷酸(nt),编码产物由142个氨基酸残基(aa)组成,测序证实 TAHCCP2克隆正确.在 GenBank 中注册,注册号为 AY039043.结论:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因TAHCCP2,为进一步研究 HCV 核心蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.

丙型肝炎及其肝硬化组织中病毒核心蛋白及p53和Bcl-2的表达与相关性研究

目的:探讨丙型肝炎及其肝硬化组织中丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白、突变p53、Bc l-2的表达及其相关性,探讨HCV核心蛋白是否能促进p53突变和Bc l-2的表达。方法:收集HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织23份,采用免疫组化Envision法检测HCV核心蛋白、突变p53、Bc l-2的表达,并分析三者间的关系。结果:核心蛋白和突变p53的阳性表达主要定位于细胞核中,Bc l-2的阳性表达主要定位于细胞质中;在核心蛋白表达阳性的组织中,突变p53的阳性表达率为87.0%,Bc l-2的阳性表达率为95.7%,三组间阳性强度的差异无显著性意义(P=0.095);HCV-C蛋白与突变p53、Bc l-2阳性强度两者间相关性检验的P值分别为0.011和0.012,相关系数r分别为0.69和0.72;突变p53与Bc l-2两者相关性检验P=0.007,r=0.72。结论:三种蛋白的表达有相关性;HCV核心蛋白可能促进野生p53突变;核心蛋白和突变p53都有可能促进Bc l-2蛋白的表达。

丙型肝炎病毒核心蛋白对HepG2细胞生长周期的影响

目的:构建丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-core-1b)真核重组质粒,获得稳定表达HCV-core-1b的HepG2细胞株,观察HCV-core-1b对HepG2细胞株生长周期及cyclin D1和pRb/p130表达的影响,探讨丙型肝炎病毒慢性感染的可能机制。方法:将HCV-core-1b亚克隆入pBabe-Flag-puro载体,获得重组质粒pBabe-Flag-HCV-core-1b;将重组质粒转染病毒包装细胞Pheonix 293T,筛选获得分泌HCV-core-1b的病毒包装细胞株。利用包装细胞产生的病毒上清感染靶细胞,筛选后获得稳定表达HCV-core-1b的HepG2细胞株,流式细胞仪检测靶细胞生长周期的变化,Western blotting检测cyclin D1和pRb/p130蛋白的表达。结果:基因测序确认HCV-core-1b亚型基因编码区完整无移位,与标签蛋白Flag形成融合蛋白。HepG2-HCV-core细胞株成功表达Flag-HCV-core-1b蛋白,并导致细胞cyclin D1和pRb/p130的水平下调,显著改变了HepG2细胞生长周期,使细胞阻滞在G0/G1期。结论:成功构建了pBabe-Flag-HCV-core-1b真核表达质粒,获得稳定表达Flag-HCV-core-1b融合蛋白的HepG2细胞。由于HCV-core-1b蛋白的表达,下调了HepG2细胞cyclin D1和pRb/p130的表达,显著抑制HepG2细胞生长周期。

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定

目的用含丙型肝炎病毒核心(HCV core)蛋白的cDNA片段构建酵母双杂交诱饵载体,并进行人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定。方法PCR扩增含HCV core蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。扩增人胎肝cDNA文库并纯化、鉴定。结果获得含HCVcore蛋白的cDNA片段,并成功克隆入pGBKT7中。待转化的人肝cDNA文库滴度在5×108左右,纯化后的质粒DNA质量浓度约1 g/L。用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切显示插入片段大小不一。结论成功构建了核心蛋白的酵母双杂交诱饵载体;扩增、纯化的人胎肝cDNA文库的多样性很好,适合于筛选。为用酵母双杂交技术研究与HCV core蛋白相互作用的蛋白打下坚实基础。

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。

丙型肝炎病毒核心蛋白细胞内信号传导途径的探讨

目的 研究丙型肝炎病毒核心蛋白致病作用的细胞内信号传导途径 (STPs)。方法 在前期工作已证实HCV核心蛋白激活NF κB介导的细胞内STPs这一结论的基础上 ,对核心蛋白活化NF κB的机制和作用位点进行了测定。用 0 .4μgpCXN2 core与 pNF κB共转染Hela细胞 3h后分别加入 5mmolIKKβ的抑制剂乙酰水杨酸和 2 5 μmol消炎痛 (作为对照 )各 0 .5ml ,继续转染 3 3h ,测定荧光素酶比活性 ,以此检测乙酰水杨酸对NF κB介导的STPs的抑制作用。以 pCXN2 core转染Cos 7细胞 3 6h ,收获细胞溶解液 ,用Western印迹分析检测IκBα表达 ,确定IκBα的降解情况。用pCXN2 core、pMEKK△ (表达非活性MEKK的质粒 )、pNF κB共转染Hela细胞 3 6h ,测定荧光素酶比活性 ,确定HCV核心蛋白是否通过MEKK活化NF κB介导的STPs。结果 ( 1)HCV核心蛋白活化NF κB介导的STPs被乙酰水杨酸抑制 ;( 2 )pCXN2 core转染后的细胞溶解液中IκBα的量较pCXN2 转染后的少 ;( 3 )HCV核心蛋白活化NF κB介导的STPs的作用不被MEKK△阻断。结论 ( 1)乙酰水杨酸通过抑制IKK的IκBα磷酸化作用 ,抑制IκB降解 ,阻断NF κB的活化 ,表明核心蛋白作用位点可能在IKK或其上游某个部位 ;( 2 )在表达HCV核心蛋白的细胞存在IκBα降解的增加 。

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子的调控作用

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是HCV病毒粒子核衣壳的组分,同时又是一种多功能蛋白。它能与胞内多种蛋白相互作用,调控NF-κB、AP-1、Sp1、Elk-1、STAT3、ATF-2、NF-AT等多种转录因子,影响一系列基因的表达。核心蛋白在HCV感染的病理发生和慢性化及致癌等过程中起着重要作用。

丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCV-NS4B)对肝癌细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响。方法采用构建好的HCV-NS4B表达载体,以脂质体转染法转染HepG2细胞。RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳证实HCV-NS4B在HepG2细胞稳定表达。MTT法绘制生长曲线,观察NS4B对肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期的情况;免疫细胞化学法检测PCNA和cyclinD1的表达。结果转染后,生长曲线显示NS4B可促进肝细胞生长;细胞周期检测显示转染NS4B的HepG2细胞进入S期和G2/M期增多(P<0.05),处于G0/G1期细胞降低(P<0.05)。PCNA和cyclinD1的表达均较空白载体组升高(P<0.05)。结论HCV-NS4B可干扰肝癌细胞周期,促进肝癌细胞增殖,其作用与上调PCNA、cyclinD1表达有关。