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抗丙型肝炎病毒锤头结构核酶的计算机设计 被引量:11
1
作者 贾战生 周永兴 +3 位作者 连建奇 冯志华 李光玉 张文彬 《世界华人消化杂志》 CAS 1999年第4期300-302,共3页
目的设计可位点特异切割丙型肝炎病毒(HCV)5’非编码区(5’NCR)和C区的多位点核酶(RZ).方法根据“锤头结构”RZ的设计原理,以HCVH(1a)株5’NCR和C区RNA为靶序列,计算机预测其二级结构,运用能... 目的设计可位点特异切割丙型肝炎病毒(HCV)5’非编码区(5’NCR)和C区的多位点核酶(RZ).方法根据“锤头结构”RZ的设计原理,以HCVH(1a)株5’NCR和C区RNA为靶序列,计算机预测其二级结构,运用能量最低化程序,选择理论上理想的RZ切割位点,并比较5株HCV序列RZ切点两翼的同性.结果在HCV5’NCR和C区124个自然切割位点(CUX和GUX)中选出213(CUC),260(GUA),407(GUC)和498(CUU)4个切割位点,不同株之间切点两翼RZ结合序列同源性为100%.结论计算机可作为抗病毒RZ设计的辅助工具;HCV上述4个位点可能是最理想的切割位点. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核酶 计算机设计 锤头结构
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丙型肝炎病毒锤头结构核酶的细胞内免疫 被引量:3
2
作者 贾战生 陈琳 +5 位作者 郝春秋 冯志华 李谨革 王九平 曹义战 周永兴 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第2期148-150,共3页
目的:探讨预先转染丙型肝炎病毒(HCV)核酶(Rz213)的人肝癌细胞对HCV再转染的抑制作用.方法:应用从前构建的HCV锤头结构Rz(Rz213),通过脂质体介导的基因转染方法,转染人肝癌细胞(HHCC),经G418筛选转染Rz213的基因克隆,应用luc报告基因的... 目的:探讨预先转染丙型肝炎病毒(HCV)核酶(Rz213)的人肝癌细胞对HCV再转染的抑制作用.方法:应用从前构建的HCV锤头结构Rz(Rz213),通过脂质体介导的基因转染方法,转染人肝癌细胞(HHCC),经G418筛选转染Rz213的基因克隆,应用luc报告基因的表达活性,观察该细胞克隆对靶基因(pCMVNCRluc)转染的抑制作用.结果:G418筛选能使Rz213在转染细胞内有效表达RzRNA,转染Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染.结论:我们构建的Rz213真核表达载体能在HHCC细胞内有效表达,预先转染发挥细胞内免疫作用,可防止HCV感染. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 锤头结构 核酶 细胞内免疫
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丙型肝炎病毒特异性核酶对HepG2.9706细胞HCV5′NCR基因表达的抑制作用 被引量:3
3
作者 王小红 王升启 +2 位作者 管伟 刘立忠 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期391-394,共4页
为探讨锤头型核酶抗丙型肝炎病毒的作用 ,根据HCV 5′NCR及翻译起始区的二级结构 ,设计及合成了 1个锤头型核酶RzA .将其插入pCI neo表达载体的多克隆位点 ,构建了表达RzA的质粒pHCV RzA .采用转基因细胞模型HepG2 970 6细胞 ,评价了pH... 为探讨锤头型核酶抗丙型肝炎病毒的作用 ,根据HCV 5′NCR及翻译起始区的二级结构 ,设计及合成了 1个锤头型核酶RzA .将其插入pCI neo表达载体的多克隆位点 ,构建了表达RzA的质粒pHCV RzA .采用转基因细胞模型HepG2 970 6细胞 ,评价了pHCV RzA质粒对HCV 5′NCR调控荧光素酶表达的抑制活性 .结果表明 ,在HepG2 970 6细胞中 ,pHCV RzA以序列特异性、剂量依赖性方式抑制荧光素酶基因的表达 ,抑制率达 80 % ,提示核酶有可能作为HCV感染基因治疗的一种有效途径 . 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 锤头核酶 HepG2.9706细胞 基因表达 抑制作用
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丙型肝炎病毒特异性核酶细胞内切割活性的研究 被引量:2
4
作者 杨健洋 洪世雯 +3 位作者 貌盼男 梁勇 鞠连才 胡燕 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期400-401,共2页
设计合成针对丙型肝炎病毒 (HCV )核心区基因 (第3 84— 3 86nt)的锤头状核酶 (Ribozyme ,Rz) ,从丙型肝炎病人的血清中提取HCV RNA ,经RT—PCR扩增HCV基因片段( 4 12bp) ,作为核酶的靶序列 ,将核酶基因和HCV靶基因片段分别克隆人反转... 设计合成针对丙型肝炎病毒 (HCV )核心区基因 (第3 84— 3 86nt)的锤头状核酶 (Ribozyme ,Rz) ,从丙型肝炎病人的血清中提取HCV RNA ,经RT—PCR扩增HCV基因片段( 4 12bp) ,作为核酶的靶序列 ,将核酶基因和HCV靶基因片段分别克隆人反转录病毒载体 pLXN中构建重组载体 ,并用电击法分别转入包装细胞PA3 17中 ,将上述两种转细胞释放到培养液中的含Rz的假病毒颗粒和含HCV靶基因的假病毒颗粒混合后 ,共同感染空白的PA3 17细胞 ,被感染细胞维持液的RT -PCR结果表明 ,无HCV靶基因产物即无靶基因的假病毒颗粒释放至维持液中 ,证明Rz在细胞内有切割HCV靶RNA的活性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 锤头核酶 切割活性 研究
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丙型肝炎病毒RNA特异性核酶的切割活性研究 被引量:1
5
作者 刘立忠 王升启 +1 位作者 朱宝珍 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期449-453,共5页
针对丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozymeA,ribozymeB,ribozymeC1,ribozymeC2).首先应用体外切割实验... 针对丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozymeA,ribozymeB,ribozymeC1,ribozymeC2).首先应用体外切割实验筛选出作用于HCVRNA起始密码子上游GTA↓位点的核酶RzA有较好的活性.为初步验证核酶RzA在细胞内的切割活性,经脂质体介导,将RzARNA与另一携带该核酶靶基因的质粒表达载体pClneoluciferase(载体中荧光素酶基因受核酶靶基因的调控)共转染HepG2细胞.通过测定荧光素酶基因的表达证实了核酶在细胞内有较好的切割活性.在此实验基础上,把RzA基因克隆至pClneo质粒表达载体中,再次经脂质体介导,将重组的表达载体pClneoRzA与携带该核酶靶基因的质粒表达载体pClneoluciferase共转染HepG2细胞,获得了更好的切割效果. 展开更多
关键词 锤头核酶 丙型肝炎病毒 基因治疗
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抗丙型肝炎病毒5'非编码区核酶自剪切真核表达载体的构建 被引量:3
6
作者 贾战生 周永兴 +3 位作者 连建奇 冯志华 李光玉 栾荣华 《第四军医大学学报》 1998年第3期346-347,共2页
引言丙型肝炎病毒(HCV)基因变异率高,病毒准种多,使HCV疫苗的研制遇到一定困难,目前的抗病毒治疗和免疫治疗也不令人满意.核酶(Rz)作为抗病毒基因治疗的重要策略之一,已在多种病毒显示出潜在的应用价值.抗HIVRz... 引言丙型肝炎病毒(HCV)基因变异率高,病毒准种多,使HCV疫苗的研制遇到一定困难,目前的抗病毒治疗和免疫治疗也不令人满意.核酶(Rz)作为抗病毒基因治疗的重要策略之一,已在多种病毒显示出潜在的应用价值.抗HIVRz是目前研究最多、取得效果也最好的抗... 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核酶 真核表达载体 基因治疗
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抗丙型肝炎病毒核酶的细胞内免疫及其意义
7
作者 周永兴 贾战生 +3 位作者 连建奇 冯志华 焦成松 李谨革 《第四军医大学学报》 2000年第7期796-798,共3页
目的 探讨抗丙型肝炎病毒 (HCV)核酶 (Rz)预先转染的细胞内免疫效应 .方法 应用从前构建的 HCV锤头结构 Rz(Rz2 13) ,通过脂质体介导的基因转染方法 ,转染人肝癌细胞 (HHCC) ,经 G418筛选转染 Rz2 13的基因克隆 ,应用 luc报告基因的... 目的 探讨抗丙型肝炎病毒 (HCV)核酶 (Rz)预先转染的细胞内免疫效应 .方法 应用从前构建的 HCV锤头结构 Rz(Rz2 13) ,通过脂质体介导的基因转染方法 ,转染人肝癌细胞 (HHCC) ,经 G418筛选转染 Rz2 13的基因克隆 ,应用 luc报告基因的表达活性 ,观察该细胞克隆对靶基因 (p CMVNCRluc)转染的抑制作用 .结果  G418筛选能使 Rz2 13在转染细胞内有效表达 Rz RNA,转染 Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染 .结论 我们构建的 Rz2 13真核表达载体能在 HHCC细胞内有效表达 ,预先转染发挥细胞内免疫作用 ,可防止 HCV感染 . 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 锤头结构核酶 细胞内免疫
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丙型肝炎病毒核心基因靶向性M1 GS核酶的构建及鉴定
8
作者 刘碧瑜 张文军 《广东药学院学报》 CAS 2011年第2期183-186,共4页
目的构建一种具有丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)靶向性的M1GS核酶,为进一步研究引导序列(guide sequence,GS)引导核酶P在RNA水平阻断HCV核心基因(core gene,C)的表达作前期基础。方法选择HCV基因组中序列相对保守且在病毒复制过... 目的构建一种具有丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)靶向性的M1GS核酶,为进一步研究引导序列(guide sequence,GS)引导核酶P在RNA水平阻断HCV核心基因(core gene,C)的表达作前期基础。方法选择HCV基因组中序列相对保守且在病毒复制过程中起关键作用的核心基因作为靶基因,针对该基因mRNA中的潜在切割位点(第52位),设计相应的引导序列及桥序列(bridge sequence),以PCR扩增M1GS,将其插入pGEM-3Z克隆载体;重组的克隆载体经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切、测序及体外转录鉴定。结果 M1GS-HCV/C52克隆载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳证明插入片段与M1RNA片段大小相符;体外转录产生的M1GS-HCV/C52核酶在体外切割实验中将HCV核心基因RNA切割成2个片段,片段大小符合预期。结论成功构建出具有体外靶向切割活性的HCV核心基因靶向性M1GS核酶。 展开更多
关键词 M1GS 核酶 靶向 丙型肝炎病毒 核心基因
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丙型肝炎病毒感染的核酶治疗研究进展
9
作者 王鲁文 《中华临床医药杂志(北京)》 CAS 2002年第3期65-68,共4页
关键词 丙型肝炎病毒感染 核酶治疗 基因治疗
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LNAzyme设计及其体外特异性抑制丙型肝炎病毒C基因的表达 被引量:1
10
作者 邓益斌 农乐根 +3 位作者 梁祚仁 张梁 覃羽化 何平 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第14期1992-1997,共6页
目的:探讨针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)C基因的锁核酸核酶对病毒RNA复制与表达的特异性抑制作用.方法:设计合成能切割HCV C基因位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme.实验设对照组和实验组.对照组包括空白对照组、脂质体对... 目的:探讨针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)C基因的锁核酸核酶对病毒RNA复制与表达的特异性抑制作用.方法:设计合成能切割HCV C基因位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme.实验设对照组和实验组.对照组包括空白对照组、脂质体对照组和脂质体-无关LNAzyme对照组.实验组包括脂质体-DNAzyme、脂质体-硫代DNAzyme组和脂质体-LNAzyme组.以阳离子脂质体介导转染hepG2.9706细胞.采用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48、96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞代谢.结果:加入药物后,脱氧核酶、硫代脱氧核酶及锁核酸核酶组对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用均较对照组强(P<0.01),其中,锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05),平均抑制率分别达47.55%和52.44%,且随用药时间延长,抑制率呈增高趋势,96 h后,HCV RNA复制和荧光蛋白表达的下降率均较用药前明显(P<0.01),其中,锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05),平均下降率分别达79.40%和80.05%.而LNAzyme对细胞活性基本无影响.结论:LNAzyme能特异性抑制HCV C基因的复制与表达,且优于硫代修饰的DNAzyme. 展开更多
关键词 丙型肝炎 丙型肝炎病毒 锁核酸核酶 非编码区 基因表达
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丙型肝炎抗病毒治疗研究若干进展
11
作者 刘克洲 《现代实用医学》 2002年第2期65-66,64,共3页
关键词 丙型肝炎 病毒治疗 IFN HCV-DNA疫苗 核酶
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丙型肝炎病毒主要酶区结构及功能的研究进展
12
作者 江静 李君武 《广东药学院学报》 CAS 2004年第6期671-674,共4页
关键词 4丙型肝炎病毒 核酶 NS3蛋白
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一种产生丙型肝炎病毒体的体外模型[英]/Hener T…//Proc Nalt Acad Sci USA.
13
作者 丁惠 赵兰娟 《国外医学(微生物学分册)》 2005年第3期43-43,共1页
丙型肝炎病毒(HCV)是一种在世界范围内引起肝脏疾病的主要致病因子,严重威胁人类健康。由于缺乏可靠的体外培养系统,致使对HCV生活周期的研究受到了阻碍。虽然HCV基因组和亚基因组复制子的出现对于研究病毒复制和病毒一细胞相互作用... 丙型肝炎病毒(HCV)是一种在世界范围内引起肝脏疾病的主要致病因子,严重威胁人类健康。由于缺乏可靠的体外培养系统,致使对HCV生活周期的研究受到了阻碍。虽然HCV基因组和亚基因组复制子的出现对于研究病毒复制和病毒一细胞相互作用是一重大的进展,但这些系统并不能够产生病毒体。本文介绍了1种可以在细胞培养上清液中产生病毒颗粒的HCV体外复制系统。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 体外模型 核酶裂解 酶活性 病毒颗粒
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犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究 被引量:1
14
作者 陈丽凤 李建华 +3 位作者 邹亚学 赵月平 曹利利 张西臣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期279-284,共6页
目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型... 目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体:短反义序列,上游及下游均为21个碱基,形成重组质粒KRzS;长反义序列,上游为288个碱基,下游为507个碱基,形成重组质粒KRzL。另设两种阴性对照,即重组质粒TRzL(即R酶两端含虫体反义磷酸丙糖异构酶基因,上游为324个碱基,下游为380个碱基)和重组质粒PKR(即犬贾第虫病毒转染载体中仅有KRR1基因的反义片段而无R酶功能区)。应用荧光实时定量RT-PCR法检测嵌合型锤头状核酶体外对KRR1基因mRNA切割活性。结果KRzS、KRzL转录体对KRR1基因体外转录RNA切割效率分别达到74.0%和81.1%。而PKR对KRR1 mRNA反转录的影响较小,RT-PCR效率仅降低12.0%。TRzL对KRR1 mRNA反转录几乎无影响。结论犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体能进行有效切割,为以后的体内锤头状核酶对KRR1基因表达抑制试验提供依据。 展开更多
关键词 犬贾第虫病毒 转染载体 锤头核酶 KRR1蛋白
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锤头状核酶的结构及其对病毒基因表达的抑制
15
作者 刘建伟 林立辉 +1 位作者 赵文忠 方美玉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期79-81,共3页
关键词 锤头核酶 HH 结构 病毒基因表达
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慢性病毒性肝炎的基因治疗:核酶、反义寡核苷酸和显性负相突变
16
作者 施红 韩凤连 《传染病信息》 1998年第1期4-5,共2页
基因治疗已成为抗病毒治疗的一个主要的、潜在的应用领域。抗病毒策略可针对病毒生命周期的一个或数个阶段。病毒的生命周期包括:病毒对细胞膜的粘附、进人细胞内、脱衣壳、基因复制、表达、病毒装配以及最后病毒颗粒的释放。鉴于现行... 基因治疗已成为抗病毒治疗的一个主要的、潜在的应用领域。抗病毒策略可针对病毒生命周期的一个或数个阶段。病毒的生命周期包括:病毒对细胞膜的粘附、进人细胞内、脱衣壳、基因复制、表达、病毒装配以及最后病毒颗粒的释放。鉴于现行治疗慢性乙型肝炎和丙型肝炎病毒的疗效有限,研究了一些针对阻断病毒基因的表达或功能的抗病毒策略,如核酶、反义寡核苷酸和显性负相突变(Domi- 展开更多
关键词 基因治疗 反义寡核苷酸 突变 锤头核酶 生命周期 丙型肝炎病毒 义寡核昔酸 病毒颗粒 病毒治疗 显性
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一个双价锤头型核酶在体外对两种不同植物病毒RNA的专一切割作用 被引量:1
17
作者 宋任涛 张庆琪 +1 位作者 李洁 许政暟 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 1999年第2期133-137,共5页
根据锤头核酶模型,设计合成了一个以黄瓜花叶病毒(CMV) 外壳蛋白(CP) 亚基因组RNA 为底物的锤头型核酶(RZC) 。在证明它能有效切割该底物后,再将这个核酶与一个能专一性切割烟草花叶病毒(TMV) 移动蛋白( MP... 根据锤头核酶模型,设计合成了一个以黄瓜花叶病毒(CMV) 外壳蛋白(CP) 亚基因组RNA 为底物的锤头型核酶(RZC) 。在证明它能有效切割该底物后,再将这个核酶与一个能专一性切割烟草花叶病毒(TMV) 移动蛋白( MP) 亚基因组RNA 的锤头型核酶(RZ1) 相互串联构成了一个双价核酶(RZ1C) 。体外结果表明,这个双价核酶能与相应的单价核酶RZ1 和RZC 一样专一而有效地切割CMVCP和TMV MPRNA。 展开更多
关键词 锤头核酶 双价核酶 植物病毒 专一切割
全文增补中
丁型肝炎病毒载体携带核酶在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒复制
18
作者 李晓娟 《传染病网络动态》 2006年第7期108-109,共2页
目的:研究用丁型肝炎病毒(HDV)作为载体携带乙型肝炎病毒(HBV)特异性的锤头状核酶所构建的重组体,在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响。方法:将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶... 目的:研究用丁型肝炎病毒(HDV)作为载体携带乙型肝炎病毒(HBV)特异性的锤头状核酶所构建的重组体,在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响。方法:将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶重组体对HBV基因表达的影响;用小鼠尾静脉快速注射法将共表达质粒转染到小鼠体内,检测重组体在动物体内对HBV基因表达和复制的抑制作用。结果:转染细胞中,重组体对HBsAg的抑制与HDV重组位点和核酶靶位都有关;水压法注射的质粒在小鼠肝内得到表达,与对照相比重组HDV-核酶可有效抑制在肝和血清中HBV的基因表达以及复制。与细胞中的结果一致。结论:此项体内实验为进一步构建治疗性重组HDV病毒,发现靶向性抗病毒基因治疗手段奠定基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒复制 锤头核酶 丁型肝炎病毒 体内抑制 病毒载体 乙型肝炎病毒(HBV) 小鼠 HUH-7细胞 核酶重组体 共表达质粒
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特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒负链的多价核酶的构建和体外活性测定 被引量:8
19
作者 邓文生 杨希才 +1 位作者 康良仪 田波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期370-373,共4页
根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成并克隆了特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)负链RNA不同区域位点的双价和三价锤头型核酶基因。通过体外转录 ,将PSTVd负链RNA分别与双价和三价核酶混合 ,37℃温育 2h。结果表明 ,双价核酶和... 根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成并克隆了特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)负链RNA不同区域位点的双价和三价锤头型核酶基因。通过体外转录 ,将PSTVd负链RNA分别与双价和三价核酶混合 ,37℃温育 2h。结果表明 ,双价核酶和三价核酶均表现出较高的切割活性 ,其中双价核酶处理的切割产物的大小与理论值相符合。三价核酶虽表现出较高的切割活性 ,但只是其中一价核酶在起作用。讨论了二价和三价核酶的应用前景。 展开更多
关键词 马铃薯纺锤形块茎类病毒 锤头核酶 特异切割
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核酶在我国植物抗病毒领域的研究和应用现状 被引量:2
20
作者 刘萍 祁喜涛 +4 位作者 胡建广 丁义峰 常云霞 韩德果 赵乐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第13期2940-2943,共4页
简要介绍了锤头型和发夹型核酶的结构、功能及催化机制,并对我国利用核酶抗植物病毒病害方面的研究和应用现状作一概述。
关键词 锤头核酶 发夹型核酶 植物病毒
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