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丙型肝炎病毒NS3蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究 被引量:6
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作者 李波 冯德云 +5 位作者 程瑞雪 孙树艳 何琼琼 胡忠良 郑晖 文继舫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第10期991-997,共7页
丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源... 丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立了稳定表达HCVNS3蛋白的人源永生化肝细胞系QSG7701/NS3,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子AP-1、NF-κB和STAT3的活性变化.结果表明:HCVNS3蛋白可促进人源永生化肝细胞QSG7701的增殖,HCVNS3蛋白激活ERKs/AP-1可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子NF-κB和STAT3的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns3蛋白 肝细胞 丝裂原蛋白激酶(MAPK) 增殖
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民族药野梦花基源及提取物抗丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性研究 被引量:4
2
作者 危英 马超美 +3 位作者 梁光义 魏升华 危莉 服部征雄 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1661-1663,共3页
目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞... 目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞香科植物(Daphne papyracea Wall.ex Steud.var.crassiuscula Rehd.),其乙酸乙酯和正丁醇提取物,在浓度为100μg.ml-1时,对HCV NS3/4A蛋白酶的抑制率分别为70.5%和65.4%。结论民族药野梦花的乙酸乙酯和正丁醇部位为抗HCV NS3/4A蛋白酶的有效部位。 展开更多
关键词 野梦花 基源 丙型肝炎病毒ns3/4A蛋白酶抑制剂
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抑制丙型肝炎病毒NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义 被引量:1
3
作者 苏秀芬 姜艳芳 +2 位作者 王峰 牛俊奇 唐彤宇 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期570-573,共4页
目的:构建抑制丙型肝炎病毒NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序... 目的:构建抑制丙型肝炎病毒NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后线性的pSilencerTM3.1-H1neo载体的H1启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒,进行电泳,将3个不同的RNAi质粒和阴性对照质粒分别与HCV NS5A真核表达质粒共转染正常肝细胞HL-7702细胞系,用Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白表达。结果:对重新构建的pSilencerTM3.1-H1neoHCV NS5A-R1、R2、R3质粒进行测序,与设计的序列完全相同;3个质粒电泳均在4 348 bp处出现特异性条带;Western blotting印迹法测得R1、R2和R3的NS5A蛋白未见明显条带,阴性对照质粒NS5A蛋白在相对分子质量5 600处出现条带。结论:设计合成的3个不同位点的63个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全正确,对HCV NS5A基因表达有特异性抑制作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns5A基因 短发夹RNA RNA干扰
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丙型肝炎病毒NS5A抑制剂的3D-QSAR研究
4
作者 孟令鑫 刘蒙蒙 +1 位作者 王远强 林治华 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2015年第5期52-60,F0003,共10页
丙型病毒性肝炎感染是输血后肝炎的主要病因之一。NS5A蛋白的小分子抑制剂显示出很强的体外抑制病毒生长的活性,并且初步的临床评价也证实了NS5A抑制剂能很好地抑制体内丙型肝炎病毒的生长。因此,研发高效的NS5A小分子抑制剂为治疗丙型... 丙型病毒性肝炎感染是输血后肝炎的主要病因之一。NS5A蛋白的小分子抑制剂显示出很强的体外抑制病毒生长的活性,并且初步的临床评价也证实了NS5A抑制剂能很好地抑制体内丙型肝炎病毒的生长。因此,研发高效的NS5A小分子抑制剂为治疗丙型肝炎提供了新的策略。进行了daclatasvir丙型肝炎病毒NS5A复制抑制剂的三维定量构效关系(3D-QSAR)研究,通过SYBYL-X 2.1.1分子模拟软件系统搜寻方法搜寻出化合物的最低能量构象,然后在Triops力场中用共轭梯度最小化进行优化。应用比较分子力场分析(Co MFA)和比较分子相似性指数分析(Co MSIA)进行分子活性构象的选择、分子叠合、建立空间场范围以及数据统计。用22个衍生物作为训练集建立模型,用6个衍生物作为测试集来验证模型的优劣。结果表明:Co MFA模的交叉相互验证系数q2=0.578,回归系数r2=0.939,Co MSIA模型的q2=0.584,r2=0.968。这些结论为丙型肝炎病毒NS5A复合体抑制剂的药物设计和筛选提供了理论依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns5A抑制剂 三维定量构效关系 比较分子场方法 比较分子相似 性指数分析法
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白功能的研究进展
5
作者 周友乾 尹凤鸣 冯经华 《临床肝胆病杂志》 CAS 2009年第2期148-151,共4页
关键词 丙型肝炎病毒ns5A 蛋白功能 非结构蛋白 包膜蛋白E1 开放阅读框 HCV 肝脏疾病 感染人数
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基于机器学习方法的丙型肝炎病毒聚合酶NS5B非核苷抑制剂的定量构效关系研究
6
作者 丛湧 薛英 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1639-1647,共9页
对89个苯并异噻唑和苯并噻嗪类丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶非核苷抑制剂进行了定量构效关系(QSAR)研究.采用遗传算法组合偏最小二乘(GA-PLS)和线性逐步回归分析(LSRA)两种特征选择方法选择最优描述符子集,然后建立多元线性回归和偏最... 对89个苯并异噻唑和苯并噻嗪类丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶非核苷抑制剂进行了定量构效关系(QSAR)研究.采用遗传算法组合偏最小二乘(GA-PLS)和线性逐步回归分析(LSRA)两种特征选择方法选择最优描述符子集,然后建立多元线性回归和偏最小二乘线性回归模型.并首次尝试使用遗传算法耦合支持向量机方法(GA-SVM)对两种特征选择方法所选的描述符子集分别建立非线性支持向量机回归模型.三种机器学习方法所建模型均得到比较满意的预测效果.采用LSRA所选的6个描述符建立的三个QSAR模型对于测试集的相关系数为0.958-0.962,GA-SVM法给出最好的预测精度(0.962).采用GA-PLS所选的7个描述符建立的三个QSAR模型对于测试集的相关系数为0.918-0.960,偏最小二乘回归模型的结果最好(0.960).本工作提供了一种有效的方法来预测丙型肝炎病毒抑制剂的生物活性,该方法也可以扩展到其他类似的定量构效关系研究领域. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns5B聚合酶 非核苷抑制剂 线性逐步回归分析 偏最小二乘法 遗传算法 支持向量机
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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A结合蛋白37基因的克隆化研究 被引量:2
7
作者 王琳 李克 +7 位作者 成军 张健 邵清 梁耀东 陈天艳 刘妍 钟彦伟 洪源 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期771-773,I001,共4页
丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 5A(NS5A)可与多种细胞内蛋白发生结合 ,涉及调节细胞生长、干扰素耐受、脂质代谢和其他细胞内信号转导通路。本实验通过酵母双杂交技术筛选得到一个与NS5A相结合的未知功能蛋白基因 ,命名为NS5ABP37,根据G... 丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 5A(NS5A)可与多种细胞内蛋白发生结合 ,涉及调节细胞生长、干扰素耐受、脂质代谢和其他细胞内信号转导通路。本实验通过酵母双杂交技术筛选得到一个与NS5A相结合的未知功能蛋白基因 ,命名为NS5ABP37,根据Gen Bank数据库推定蛋白编码序列的信息 ,应用反转录聚合酶链反应 (PCR)扩增出该基因序列。连接入酵母和真核细胞表达载体表达成功 ,并经回交实验证实NS5A与NS5ABP37的结合作用 ,为进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 基因克隆化 丙型肝炎病毒ns5A 酵母双杂交
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丙型肝炎病毒NS5A抑制剂--达卡他韦 被引量:9
8
作者 张晓 钟武 《临床药物治疗杂志》 2016年第2期80-83,共4页
达卡他韦(Daklinza)是由美国百时美-施贵宝公司(BMS)研制的口服丙型肝炎病毒(HCV)NS5A抑制剂。继2014年欧盟批准其与联合其他抗病毒药用于基因型1-4慢性丙型肝炎成人患者的治疗后,2015年7月美国FDA批准其与索非布韦[sofosbuvir]联合用... 达卡他韦(Daklinza)是由美国百时美-施贵宝公司(BMS)研制的口服丙型肝炎病毒(HCV)NS5A抑制剂。继2014年欧盟批准其与联合其他抗病毒药用于基因型1-4慢性丙型肝炎成人患者的治疗后,2015年7月美国FDA批准其与索非布韦[sofosbuvir]联合用于慢性HCV基因型3感染的治疗。达卡他韦是第一个无需同时给予干扰素或利巴韦林即可有效治疗基因型3 HCV感染的药物,为该类患者提供了一个新选择,包括那些不能耐受利巴韦林患者。笔者就达卡他韦的基本信息、作用机制、药代动力学、药物相互作用、临床试验及应用等研发动态作一概述,以期能为医院临床用药及药物研究开发提供参考。 展开更多
关键词 达卡他韦 丙型肝炎病毒(HCV)ns5A抑制剂 丙型肝炎疾病
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女贞子抗丙型肝炎病毒复制酶活性成分研究 被引量:11
9
作者 孙瑞娜 张艳妮 +2 位作者 汪俊 刘好桔 孔令保 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1390-1396,共7页
在前期发现女贞子(Ligustrum lucidum,LL)提取物抑制丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制酶(NS5B)活性的基础上,研究女贞子提取物抑制NS5B活性的化学成分及其作用机制。采用乙酸乙酯萃取和薄层色谱法分离女贞子水提取物,NS5B活性... 在前期发现女贞子(Ligustrum lucidum,LL)提取物抑制丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制酶(NS5B)活性的基础上,研究女贞子提取物抑制NS5B活性的化学成分及其作用机制。采用乙酸乙酯萃取和薄层色谱法分离女贞子水提取物,NS5B活性抑制实验检测各个分离组分的抑制活性。结果显示,分离组分1和2能够抑制NS5B活性,组分2的抑制能力更强。采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)及NS5B活性抑制实验分析组分1和2中的活性成分。结果显示,熊果酸和齐墩果酸分别是组分1和2的抗NS5B活性成分,齐墩果酸的抑制能力更强。进一步的抑制机制分析发现,熊果酸和齐墩果酸通过非竞争抑制作用抑制NS5B活性,熊果酸和齐墩果酸的Ki分别约为4.7μg·mL 1(10μmol·kg-1)和2.5μg·mL-1(5.5μmol·kg-1)。本研究发现齐墩果酸和熊果酸通过非竞争抑制作用抑制丙型肝炎病毒复制酶NS5B活性,揭示这两个天然化合物具有潜在的丙型肝炎治疗价值。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒ns5B蛋白 女贞子 熊果酸 齐墩果酸
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血清中丙型肝炎NS3抗原ELISA检测方法的建立和初步应用 被引量:2
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作者 谢立 黄德庄 +3 位作者 陈海伦 贺立香 王键 韩大康 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期88-92,共5页
目的评价血清中丙型肝炎病毒(HCV)游离Ns,抗原的酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的特异性和灵敏度,初步探讨该方法在临床应用中的意义。方法对77例正常人血清标本,173例抗-HCV阳性标本和3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本检测... 目的评价血清中丙型肝炎病毒(HCV)游离Ns,抗原的酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的特异性和灵敏度,初步探讨该方法在临床应用中的意义。方法对77例正常人血清标本,173例抗-HCV阳性标本和3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本检测HCV游离NS,抗原;对部分HCVNS,抗原阳性标本进行验证,包括HCVRNA测定、中和试验和免疫斑点试验;对11例患者的25份系列血清标本进行rHCV游离Ns,抗原、HCVRNA和HCV抗体的联合检测,并结合临床资料综合分析。结果3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本中有48例为HCVNS,抗原阳性,其中3030例单纯乙型肝炎和445例其他类型肝炎血清标本中分别有44例和4例为HCVNS,抗原阳性;173例HCV抗体阳性标本中有42例为HCVNS,抗原阳性;77例正常人血清标本的HCVNS,抗原检测结果均为阴性;15例HCVNS,抗原阳性标本中有9例为HCVRNA阳性;23例HCVNS,抗原阳性标本的中和率和免疫斑点试验的阳性率分别为87.0%和69.6%;25份系列血清标本的检测结果显示其HCVNS,抗原的吸光度值与时间呈负相关,并有2例HCVNS,抗原阳性标本随着血清中HCVNS,抗原的吸光度值下降,其HCV抗体转阳。结论血清中HCV游离NS,抗原的ELISA检测方法有较好的特异性和敏感度,在发展中国家应用此方法进行HCV感染的早期诊断有-定的临床意义和推广价值。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒ns 抗原 丙型肝炎病毒RNA 丙型肝炎病毒抗体 酶联免疫吸附试验
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微生物学
11
《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 2005年第4期225-230,共6页
日本脑炎病毒E基因与流感病毒HA基因的串联表达及应用;HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的组装;SARS冠状病毒M基因的克隆及其表达;肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达;甲氧西林耐药的金... 日本脑炎病毒E基因与流感病毒HA基因的串联表达及应用;HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的组装;SARS冠状病毒M基因的克隆及其表达;肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达;甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学调查;一株西尼罗病毒株的生物学特征研究;JC病毒样颗粒可直接转运进人细胞核;我国HIV-1流行株gp41抗原表位筛选与串联表达;甲肝减毒活疫苗L-A-1疫苗株的核酸序列测定与比较分析;河南省分离的HIV-1B-Thai亚型流行株全基因组克隆及序列分析;HCV抗体检测试剂对血站HCV抗体初筛试剂的评价;巨细胞病毒感染后晚期mRNA表达与细胞病变相关性的研究;狂犬病北京3aG-V生产株的特性研究;丙型肝炎病毒NS5a高免疫原区人工合成多肽抗原性的研究;反义RNA体外抑制丙型肝炎病毒基因表达的研究;逆转录病毒载体介导的HSVtk基因表达及提高重组逆转录病毒滴度的研究;MMP-2、MT-MMP-2在实验性肝纤维化形成和逆转过程中表达的动态研究;北京地区2株人偏肺病毒的P和M蛋白基因序列分析;丙型肝炎病毒不同基因型NS3蛋白的抗原异质性分析;人УδT细胞TCR分子与结核杆菌多肽抗原特异性结合的证据;霍乱弧菌减毒活疫苗候选株IEM109的构建;问号钩端螺旋体内化过程中细胞内游离Ca^2+水平变化及细胞凋亡;黏膜免疫戊型肝炎试验性疫苗的研究;表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究;O157:H7原噬菌体消除菌株的鉴定与分析;结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定;钩端螺旋体OmpL1抗原表位预测、克隆和表达;重组超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和序列分析;结核分枝杆菌Rv1884基因的克隆、表达及亲和层析纯化;羊瘙痒因子263K经多种途径感染仓鼠的脑外组织PrP^Sc分子和沉积特点研究;流感病毒血凝素基因HA1区的克隆及其真核表达载体的构建;分枝杆菌融合表达ICL-GFP穿梭质粒的构建及鉴定;5-氟胞嘧啶耐药白色念珠菌的DNA与RNA的随机扩增多态性分析;通用引物检测儿童血和脑脊液的6种疱疹类病毒;人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制;广东2003年末SARS患者冠状病毒抗原抗体动态特征分析。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 丙型肝炎病毒ns5A 微生物学 SARS冠状病毒 分子流行病学调查 细胞内游离CA^2+ 人类免疫缺陷病毒1型 金黄色葡萄球菌 甲肝减毒活疫苗
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性测定系统的研究进展
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作者 雷迎峰 杨敬 +1 位作者 尹文 徐志凯 《国际病毒学杂志》 2008年第6期-,共4页
NS3/4A丝氨酸蛋白酶是理想的抗HCV靶位之一.缺乏有效的细胞培养系统和小动物模型是抗HCV药物筛选和评价的瓶颈,基于酶建立的测定系统常被用作筛选和鉴定抗HCV药物.关于NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性的测定系统已经有很多报道,本文从细胞内测... NS3/4A丝氨酸蛋白酶是理想的抗HCV靶位之一.缺乏有效的细胞培养系统和小动物模型是抗HCV药物筛选和评价的瓶颈,基于酶建立的测定系统常被用作筛选和鉴定抗HCV药物.关于NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性的测定系统已经有很多报道,本文从细胞内测定和体外测定系统两方面综述如下. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns3/4A丝氨酸蛋白酶 酶活性测定系统
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