HyTK基因转导联合丙氧鸟苷对鼠膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 探索HyTK基因转导丙氧鸟苷 (ganciclovir,GCV)对鼠膀胱癌细胞的影响。方法 脂质体介导法将PL(HyTK)SN质粒转染PA3 17细胞 ,潮霉素B筛选 ,直到出现抗性克隆 ,扩增培养 ,NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,用逆转录病毒上清液感染T73 9细胞 ,潮霉素B筛选 ,直到出现抗性克隆 ,扩增培养 ,命名为T73 9 TK。RT PCR对T73 9 TK细胞进行鉴定。然后观察其在体外膀胱癌细胞的杀伤作用。结果 RT PCR证实HyTK基因已插入T73 9细胞并有其mRNA的表达 ,经不同浓度GCV处理后的T73 9 TK细胞均表现出有杀伤作用 ,而T73 9细胞在各个剂量的GCV作用下生长均良好。结论 GCV对转导了HyTK基因的T73

TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究

目的:探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法:脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞,倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功,流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组,实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;实验2组用0.22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;对照组用培养液培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果:经TK基因转染的MG-63细胞,倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75.5%。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义(P<0.05);实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加,细胞凋亡率增加。结论:脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。

用Psi2STK/GCV对鼠C6神经胶质瘤细胞作用的初步研究

目的研究利用基因工程包装细胞进行基因转导和药物治疗相结合来治疗脑胶质瘤的可行性。方法利用分子生物学方法构建了逆转录病毒载体STK及基因工程包装细胞psi2STK,用psi2STK细胞和丙氧鸟苷(GCV)结合对胶质瘤细胞进行了基因治疗研究。结果C6胶质瘤细胞和基因工程包装细胞与不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)一起培养,未感染的细胞比感染的细胞对丙氧鸟苷(GCV)更为敏感。结论通过体外实验证实:逆转录病毒转导HSV-TK基因在培养C6胶质瘤细胞中,提高了其对GCV的敏感性。

TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

目的研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下(TK/GCV系统)联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63(tk+)呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测,当GCV浓度为10μg/ml时,骨肉瘤MG-63(tk+)细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1μg/ml。当顺铂与GCV(5μg/m1)联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25μg/ml,并对MG-63(tk+)细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。