HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24,48,72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变;对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应,并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力,诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加,抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低,促进凋亡的发生。结论HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移,诱导MNK-45细胞凋亡的发生。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因介导GCV治疗人膀胱癌的实验研究

探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (Herpes sim plex virous thym idine kinase,HSV- TK)基因介导的丙氧鸟苷(Ganciclovir,GCV )系统对人膀胱癌细胞 (T2 4 )生长的抑制作用。利用电穿孔技术将携有 HSV- TK基因的重组逆转录病毒载体 (p L XSN- TK)导入包装细胞 PA317,获得转染后的逆转录病毒包装细胞 PA317/ TK。将 BAL B/ c裸鼠 2 4只随机分为 4组 (每组 6只 ) ,建立人 T2 4裸鼠荷瘤模型。治疗 1,2组分别瘤内注射病毒悬液或 PA317/ TK细胞后再经 GCV处理。对照 1,2组则分别瘤内注射等量生理盐水或 PA317/ TK细胞后再经等量 GCV或生理盐水处理。观察各组肿瘤体积和瘤重的变化 ;采用原位杂交技术分析 HSV - TK基因在肿瘤组织中的表达 ;采用流式细胞仪技术 (Flow cytom etry,FCM )和末端脱氧核苷酸介导的 X- d U TP缺口末端标记技术 (Termininaldeoxynucleofidyl trasferase- mediated d U TP nick end labelling technigue,TUNEL )检测膀胱癌细胞凋亡。结果表明 :(1)逆转录病毒介导的 HSV- TK基因在体内能转染 T2 4细胞 ,联合运用 GCV后 ,肿瘤的生长速度明显减慢 ;(2 ) HSV - TK/ GCV治疗后膀胱癌细胞凋亡现象明显增强。以上结果提示 T2 4荷瘤裸鼠内 HSV - TK/ GCV系统对T2 4细胞的生长有明显的抑制作用 ,且可能?

六味地黄丸入血成分对自杀基因杀伤肝癌细胞的增效作用

目的:探讨六味地黄丸主要入血成分对单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)自杀基因系统杀伤大鼠肝癌细胞(CBRH7919)的增效作用。方法:按CBRH7919/tk占总细胞数10%的比例混合CBRH7919与CBRH7919/tk细胞,分别接种96孔板,每孔加细胞悬液100μL(2×103个/孔),设置对照组、低、中、高3种浓度的六味地黄丸入血成分组、GCV组、各浓度六味地黄丸入血成分联合GCV组;培养24 h后分别加入入血成分马钱素和丹皮酚(质量浓度均为25,50,100μmol.L-1),莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸、獐牙菜苷(浓度均为37.5,75,150μmol.L-1)5种化合物和5种化合物混合组分(质量浓度为0.006 7,0.013 5,0.027 g.L-1);及其混合组分(质量浓度为0.034 g.L-1)作用后淋巴细胞培养上清(占培养液体积分数7.5%,15%,30%),设6个复孔,37℃,5%CO2培养箱培养72 h后MTT法测定细胞存活率,检测六味地黄丸主要入血成分及淋巴细胞培养上清对自杀基因系统杀伤肝癌细胞的影响。结果:自杀基因系统联合马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸、獐牙菜苷和丹皮酚5种化合物及5种化合物的混合组分,均未显示其对肿瘤自杀基因疗法的直接增效作用;但含药上清联合GCV组对肝癌细胞生长抑制率分别为(22.72±3.12)%,(26.68±1.92)%,(30.50±3.53)%;与单独自杀基因(10%tk/GCV)组抑制率(15.37±3.96)%比较,差异均有统计学显著性意义;q值分别为1.50,1.75,2.24,均大于1.15,具有协同增效作用,并呈一定的量效关系。结论:六味地黄丸主要入血成分能刺激淋巴细胞产生某些活性物质,并发挥了对HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统对肝癌CBRH7919细胞杀伤的增效作用,这些淋巴细胞产生的内源性活性物质可能才是六味地黄丸对肿瘤自杀基因疗法增效作用的药效物质基础。