烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adustaWZFF.W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65.5%,其中LacA平均纯化了29.2倍,LacB纯化了5.1倍,LacC纯化了18.5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA:68.7kDa、LacB:80.2kDa、LacC:77.2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45-70℃,最适反应pH3.0-5.5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3.5-6.0稳定,LacA在pH5.0-9.0稳定,Al3+对LacA、LacC的酶活有促进作用,Cl-、Fe3+、Hg2+抑制LacA、LacC的酶活,Cu2+抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。

豆壳过氧化物酶的分离纯化新工艺研究

采用一种新的简单纯化工艺进行了过氧化物酶分离纯化实验研究。该工艺为酶液经硫酸铵-丙酮协同沉淀,丙酮分级沉淀,最后用硫酸锌除杂。使豆壳过氧化物酶的Rz达到1.32,总酶活收率为65%。使用了丙酮-硫酸铵协同沉淀法,即有机溶剂-无机盐二相系统,是一种简便有效的分离纯化生物大分子的新方法。

大蒜SOD的分离纯化及其低温胁迫下的酶活性

在低温条件下用CaCl2浸种处理蒜瓣,通过"热击法"、"等电点法"、"丙酮分级沉淀法"的串联使用分离纯化SOD,并运用邻苯三酚的自氧化法测SOD的酶活性,研究钙对低温条件下大蒜SOD酶活性的影响.结果表明:上述3种方法串联能够有效地纯化超氧化物歧化酶,且其纯化程度比使用单一方法高.在低温胁迫条件下,钙离子浸种处理过的大蒜SOD酶活性下降的程度较未经处理的轻.说明钙离子对低温胁迫条件下的大蒜SOD酶活性有一定的保护作用,能够提高其抗冷性.

植物细胞中紫杉醇提取物在癌症化疗中的成本效果分析

为了提高植物细胞中紫杉醇药物的提取效率,本研究对丙酮/水分级沉淀法从植物细胞培养物中纯化紫杉醇的工艺方法进行试验。研究结果表明:室温加水工艺下,丙酮/水的比例为40∶60、30∶70、20∶80和10∶90(v/v)时,紫杉醇产率分别为54.3%、89.1%、95.5%和97.6%;在丙酮/水比为40∶60(v/v),并在低温下混合10min时,可立即获得高产率(87.9%)的紫杉醇;增加蒸馏水的比例或降低加入水可大幅提高紫杉醇的产率。通过乳腺癌诊断标准选取乳腺癌患者60例,随机分为2组,一组使用国产紫杉醇,另一组使用进口紫杉醇,3个疗程后通过影像学检查分析药物疗效,并通过最小成本分析法分析国产和进口紫杉醇对乳腺癌患者的成本疗效评价,可知国产组和进口组紫杉醇对乳腺癌的疗效并无明显差异,但是国产组紫杉醇可显著降低单位疗程紫杉醇平均费用。