丙酮沉淀法提取金花茶多糖的研究

[目的]确定丙酮沉淀法提取花金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)多糖的最佳工艺条件。[方法]以金花茶为研究对象,以水为溶剂,在一定的条件下提取金花茶多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取沉淀剂用量、沉淀时间和离心时间3个因素做单因素试验,然后以离心时间、丙酮加入量、沉淀时间作为因素,进行正交试验,来确定最佳提取条件。[结果]丙酮沉淀法的最佳工艺条件为:离心时间为15 min,丙酮加入量为20 ml、沉淀时间为12 h,在此条件下的所得粗茶多糖含量量为0.003 7 g。[结论]该研究建立的检测方法简便、快速,具有较强的实用性。

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率。方法采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比。结果三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响。结论三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究。

TCA-丙酮沉淀法提取聚合草叶蛋白的研究

目的本研究旨在用TCA-丙酮沉淀法对聚合草叶蛋白进行提取,为聚合草叶蛋白的大规模制备奠定基础。方法测定聚合草干叶、鲜叶中的蛋白含量,提取的蛋白经真空冷冻干燥后称重,确定所提蛋白的纯度并计算蛋白提取率。结果以鲜叶为原料时的提取率为51.76%,所得蛋白的纯度为54.2%;以干叶为原料时,蛋白提取率为46.45%,蛋白纯度为48.3%。结论利用TCA-丙酮沉淀法从聚合草鲜叶中提取粗蛋白优于干叶。

丙酮沉淀法提取茶多糖的研究

本论文以信阳毛尖为研究对象，以水为溶剂，在一定的条件下提取茶多糖。提取液用丙酮进行沉淀，选取沉淀剂用量、沉淀时间和离心时间三个因素做单因素实验，然后通过正交实验方法确定了丙酮沉淀法的最佳工艺条件。

丙酮沉淀法提取β-甘露聚糖酶的研究

为获得纯度较高的β-甘露聚糖酶,采用丙酮沉淀法提取β-甘露聚糖酶,并研究了丙酮用量、温度及时间对提取β-甘露聚糖酶的影响.结果表明V粗酶液∶V丙酮为1∶1.6,-20℃,5 h最高提取率达75.81%,提取后的酶活比原始酶活高152倍,酶活随提取温度降低、反应时间的缩短而升高.

丙酮沉淀法提取杠板归多糖的工艺研究

目的:探讨丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。方法:以杠板归为研究对象,以水为溶剂提取杠板归多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取离心时间、沉淀时间和沉淀剂用量3个因素做单因素进行正交实验,探索最佳提取条件。结果:丙酮加入量75ml、沉淀时间18h和离心时间18min是丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。结论:确定了丙酮沉淀法提取杠板归多糖的最佳工艺条件。

改良丙酮沉淀法用于天花粉蛋白的提取

随着天花粉蛋白(TCS)在临床性研究的不断进展,天花粉蛋白的生产工艺也越来越受到人们的重视。分别利用硫酸铵盐析法和改良丙酮沉淀法对天花粉蛋白的提取和工艺进行了比较分析,硫酸铵盐析法提取天花粉蛋白过程中操作复杂,提取率低,仅为0. 464‰;改良丙酮沉淀法操作简便,可短时间多次提取天花粉样品,提取率为1. 152‰,提取效果明显优于传统的硫酸铵分级沉淀法。由此表明改良丙酮沉淀法更适合天花粉蛋白质的研究。

改良TCA/丙酮沉淀法去除肥胖人群血浆中的高丰度蛋白质

目的对传统的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法进行改良,探索一种较好的高脂血浆的高丰度蛋白去除方法。方法分别用不同体积(1、3、4、5、6、8、10和20倍样品体积)、不同TCA浓度(10%、30%、40%、50%、60%、70%)的TCA/丙酮溶液处理高脂血浆处理所得上清和沉淀蛋白样品分别进行一维十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证比较,确定去除效果最佳的TCA/丙酮溶液,用该浓度TCA/丙酮溶液与含有10%三氯乙酸的TCA/丙酮溶液同时处理血浆,对所得沉淀蛋白进行二维SDS-PAGE验证,并对所得上清和沉淀蛋白质进行Nano HPLC-Chip-MS/MS鉴定比较。结果 4倍样品体积的TCA/丙酮溶液去除高丰度蛋白的效果较好,增加或减少TCA/丙酮溶液的体积都会影响去除效率;60%TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效率比10%、20%、30%、50%TCA/丙酮好,而70%TCA/丙酮溶液处理血浆的重复性较差。质谱鉴定结果显示,4倍样品体积的60%TCA/丙酮溶液与10%TCA/丙酮溶液处理后的血浆样品相比,可鉴定更多的低丰度蛋白质。结论用4倍样品体积的60%TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效果最为理想,尤其适用于较高脂含量的样品的处理。

丙酮沉淀法富集尿液蛋白的影响因素分析

尿液蛋白质组学是体液蛋白质组学的重要组成部分。有机溶剂沉淀法是常用的尿蛋白富集方法，综合富集效率、富集蛋白种类及重复性等因素，丙酮沉淀法效果最佳。但丙酮沉淀法尚缺少共识性的标准流程，本文从防腐剂、尿液解冻方法、丙酮沉淀时间和尿液与丙酮体积比4个方面，探讨丙酮沉淀法富集尿蛋白的影响因素，以优化尿蛋白质组学研究中样本收集及蛋白富集的标准流程。

三氯醋酸/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白效果的对比研究

目的探讨三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果。方法选取2017年6月至2019年6月长春市中心血站采集的O型RHD阳性新鲜冰冻血浆12例,组成4个样品并分别编号为A1、A2、B1、B2。采用TCA/丙酮沉淀法去除A1、A2样品血浆中高丰度蛋白,硫酸铵沉淀法去除B1、B2样品血浆中高丰度蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证血浆中高丰度蛋白去除的效果。Clean-up Kit去除蛋白质中干扰物质,并采用SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)验证Clean-up Kit的效果。结果银染的SDS-PAGE胶图显示,TCA/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法均可有效去除血浆高丰度蛋白,但与硫酸铵沉淀法相比,TCA/丙酮沉淀法的SDS-PAGE条带更清晰。SDS-PAGE和2-DE显示两种方法去除清蛋白的血浆Clean-up Kit后对去除血浆中其他干扰物质效果并不明显。结论TCA/丙酮沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果更好,且去除血浆中清蛋白后的血浆Clean-up Kit对去除效果无显著影响,可直接进行2-DE、图像分析及质谱检测分析。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的对TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中的微量蛋白进行测量的效果进行分析。方法采用随机抽样的方法,抽取2007年9月～2010年9月就诊的进行尿液标本检测的患者90例,再将其随机分为A、B、C3组,平均每组30例。A组采用丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定;B组患者采用CAN/TFA沉淀法对微量蛋白进行测定;C组患者采用TCA/丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定。对三组的测量结果进行比较分析。结果分析结果表明,C组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显高于其他两组患者,差异有显著的统计学意义(P<0.01);A组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显低于其他两组患者,有显著的统计学意义(P<0.01)。结论采用TCA/丙酮沉淀法对尿液微量蛋白含量进行测量的效果比较理想,具有操作简单、高效等特点,可以作为临床对患者进行尿液微量蛋白测量的首选方法,值得进一步推广。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。

3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较

目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。

野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是十字花科植物黑腐病的病原细菌。我们建立了Xcc的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白。为了减少胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对蛋白材料质量的影响,我们构建了EPS缺陷的Xcc8004ΔgumB突变体。本研究以Xcc8004ΔgumB出发菌株,用诱导培养液培养,取细胞上清通过超滤浓缩得到蛋白质粗提物,分别采用丙酮沉淀法、试剂盒纯化法和丙酮沉淀-试剂盒联用法来纯化蛋白质粗提物,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明丙酮沉淀-试剂盒联用法较为理想,所得双向电泳图片清晰,分辨率高。因此,此方法可以用于制备野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

大鼠皮质双向电泳样品制备方法的优化

目的优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法,初步建立双向电泳条件,提高电泳分辨率和重复性。方法分别应用三氯乙酸/丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品,并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ的匀浆物4℃放置过夜后再进行后续处理。结果改良超速离心法所制备的电泳样品,不仅可以减少蛋白的降解,还可以增加蛋白的溶解性,从而获得分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论改良超速离心法更适于制备来源于中枢神经系统双向电泳样品。

竹节参总皂苷的纯化方法研究

比较了大孔树脂吸附与丙酮沉淀法对竹节参总皂苷的纯化效果。结果表明,大孔吸附树脂对竹节参总皂苷具有较好的纯化能力,D101大孔树脂对竹节参总皂苷的吸附能力最佳。最佳洗脱条件为:60%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为3BV(BV为树脂体积倍数),洗脱流速为1 mL/min。该条件下竹节参总皂苷纯度可达88.12%(丙酮沉淀法64.30%)。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。