M2型丙酮酸激酶、缺氧诱导因子-1α在子宫内膜癌组织中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨M2型丙酮酸激酶(PKM2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及与患者临床特征的关系。方法取41例EC患者的EC组织及相应癌旁组织和10例子宫内膜良性疾病患者的正常子宫内膜组织。采用免疫组化法检测PKM2、HIF-1α的表达情况。比较EC组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中PKM2、HIF-1α的阳性表达率及不同临床特征EC患者EC组织中PKM2、HIF-1α的表达情况。结果EC组织中HIF-1α的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。p53突变型、分化程度为低分化EC患者EC组织中PKM2的阳性表达率分别明显高于p53野生型、分化程度为中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。有脉管浸润的EC患者EC组织中HIF-1α的阳性表达率高于无脉管浸润患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论HIF-1α在EC组织中的阳性表达率较高。PKM2、HIF-1α表达与EC患者的临床特征有关,或可作为EC患者的有效治疗靶点。

丙酮酸激酶同工酶M2介导长非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大作用

越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,但其在心肌肥厚调节中可能的作用和机制尚不清楚。利用腺病毒介导在乳小鼠心肌细胞(neonatal mouse ventricular cardiomyocytes,NMVCs)和乳大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cardiomyocytes,NRVCs)中过表达RP11-879F14.2,检测对NMVCs中心肌肥厚相关基因,包括肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白(Acta1)以及心钠素(NPPA)表达的影响,结果显示,过表达RP11-879F14.2可显著抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达。RT-qPCR和Western印迹结果证实,当过表达RP11-879F14.2时可显著促进NMVCs中丙酮酸激酶同工酶M2(PKM 2)表达。并且,过表达PKM 2和RP11-879F14.2可一致地抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导NRVCs的表面积增加,而敲降PKM 2可逆转RP11-879F14.2对NMVCs中心肌肥厚相关基因表达的抑制作用。利用Seahorse 96XF细胞能量分析仪检测显示,过表达RP11-879F14.2和PKM 2可一致增加NMVCs中葡萄糖代谢水平,而沉默PKM 2对RP11-879F14.2上调NMVCs中糖酵解、三羧酸(TCA)循环和线粒体电子传递链(ETC)相关基因的表达有显著的抑制作用。因此,PKM 2介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

丙酮酸激酶M2型在非小细胞肺癌中的作用

肺癌是目前全球最常见的病死原因之一,其中,非小细肺癌(NSCLC)占所有肺癌的85%。丙酮酸激酶(PK)是糖代谢中的关键酶,调控磷酸烯醇式丙酮酸向丙酮酸转化速率,存在四种亚型,其中丙酮酸激酶M2型(PKM2)主要存在于具有高合成代谢要求的高增殖细胞,尤其是肿瘤和胚胎组织中。PKM2可以调控肿瘤细胞的有氧糖酵解过程,并能转移至细胞核内参与调控多种促癌因子的表达。PI3K/AKT信号通路在细胞生长、增殖、分化、生存和代谢等多个生物学过程中发挥着至关重要的作用。PKM2可以通过与PI3K/AKT通路的相互作用参与NSCLC的发生、发展。本文针对PKM2在非小细胞肺癌中作用及其调节机制的研究进展进行综述。

M2型丙酮酸激酶在宫颈鳞状细胞癌和宫颈腺癌中临床意义的生物信息学分析

目的基于生物信息学方法分析M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在宫颈鳞状细胞癌和宫颈腺癌(cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma,CESC)中的临床意义。方法通过R软件分析PKM2基因在CESC和正常宫颈组织中的表达差异;GEPIA平台分析PKM2基因对CESC病人总生存期(overall survival,OS)的影响;TIMER平台验证PKM2基因表达对CESC病人OS的影响;HPA平台分析PKM2蛋白表达对CESC病人OS的影响;TIMER平台分析免疫细胞浸润水平与PKM2基因表达及病人OS的相关性。结果CESC病人中PKM2基因和蛋白质高表达病人的OS均劣于低表达者,CESC中PKM2基因表达还与免疫细胞浸润水平有关,而免疫细胞浸润水平又与病人的OS有关。结论PKM2是CESC预后的不利因素,在CESC的诊断和治疗中可作为潜在的指标和靶点。

M2型丙酮酸激酶的生物学特征及其在泌尿生殖系统肿瘤中作用机制的研究进展

M2型丙酮酸激酶(PKM2)是糖酵解途径的关键酶,在不同组织器官及有大量核酸合成的细胞中均表达。PKM2高表达可促进肿瘤细胞发生糖酵解,其与肿瘤的发生发展密切相关。肾癌、前列腺癌和膀胱癌是泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤,其发生发展与PKM2有着密不可分的关系。本文对PKM2的生物学特征及其在泌尿生殖系统肿瘤中的作用机制进行综述。

M2型丙酮酸激酶、自噬相关基因2B蛋白与乳腺浸润性导管癌分子亚型的关系

目的探究M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)、自噬相关基因2B(autophagy related gene 2B,ATG2B)蛋白与乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)分子亚型及临床病理特征的关系。方法选择2018年9月至2019年12月合肥市第二人民医院收治的IDC患者63例为研究对象,采用免疫组织化学法检测患者癌组织及癌旁组织PKM2、ATG2B表达,分析癌组织PKM2、ATG2B表达与临床病理特征及分子亚型的关系;所有患者均随访3年,根据其生存情况分为死亡组及生存组,分析癌组织PKM2、ATG2B表达、临床病理特征及分子亚型对患者预后的影响。结果IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于癌旁组织,ATG2B蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);不同月经状态、肿瘤直径、临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的PKM2阳性表达率对比差异有显著性,不同临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的ATG2B阳性表达率比较,差异有显著性(P<0.05);Luminal A型IDC患者癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于三阴型,ATG2B蛋白阳性表达率低于三阴型(P<0.05);死亡组中临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性表达率高于生存组,ATG2B蛋白阳性表达率低于生存组(P<0.05);临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达与临床病理特征及分子亚型有关,且PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素。

RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解

目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采用RT-qPCR和Westernblotting分别在mRNA水平和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功。通过EdU增殖实验和克隆形成实验检测过表达和敲低RBMX后细胞的生长和集落形成能力,同时通过Transwell实验分析过表达和敲低RBMX后对细胞迁移、侵袭能力的影响;随后,采用Westernblotting检测过表达和敲低RBMX后糖酵解关键蛋白PKM1(M1型丙酮酸激酶)和PKM2(M2型丙酮酸激酶)的表达变化;最后,利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析过表达和敲低RBMX对膀胱癌细胞糖酵解的影响。结果RT-qPCR和Westernblotting结果显示,过表达RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05),敲低RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。过表达RBMX明显抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭,敲低RBMX则作用相反。Westernblotting实验结果显示,过表达RBMX使PKM1表达上升,PKM2表达下降,敲低RBMX则作用相反。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,过表达RBMX均能抑制膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05),敲低RBMX均能促进膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05)。结论RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌的发生发展和糖酵解能力,有望成为膀胱癌诊断和治疗的潜在分子靶标。

宫颈癌患者高危型HPV感染状况与血清M2型丙酮酸激酶、巨噬细胞集落刺激因子表达的相关性

目的 研究宫颈癌患者高危型人乳头状病毒(HPV)感染状况及其与血清M2丙酮酸激酶(M2-PK)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平之间的相关性。方法 将113例单一高危型HPV阳性宫颈癌患者(宫颈癌组)、106例单一高危型HPV阳性宫颈上皮内瘤变患者(CIN组)及60例健康妇女(对照组)作为研究对象,分别检测其血清M2-PK和GM-CSF水平,比较不同HPV亚型宫颈癌患者以及不同宫颈病变级别患者的血清M2-PK和GM-CSF水平,采用Spearman线性相关分析宫颈癌患者血清M2-PK及GM-CSF与高危HPV感染宫颈癌之间的关系。结果 宫颈癌和CIN患者高危HPV分型分布比较差异情况无统计学意义(P>0.05)。CIN以及宫颈癌组患者血清M2-PK及GM-CSF水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);且宫颈癌组患者血清M2-PK及GM-CSF水平高于CIN组,差异具有统计学意义(P<0.05);且随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,CIN患者血清M2-PK及GM-CSF水平呈依次上升趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌不同HPV分型患者血清M2-PK及GM-CSF水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman线性相关分析结果显示,血清M2-PK和GM-CSF水平与宫颈上皮内瘤病变级别均呈正相关(γ=0.53,0.61,P均<0.001)。结论 血清M2-PK及GM-CSF水平在宫颈癌患者中异常升高,且与宫颈上皮内瘤病变级别呈正相关,提示M2-PK及GM-CSF可能共同参与了宫颈癌发病机制。

PKM2通过调控活性氧依赖的PI3K/Akt信号通路影响膀胱尿路上皮细胞癌细胞的侵袭能力

目的 探讨PKM2通过调控活性氧(ROS)依赖的PI3K/Akt信号通路对膀胱尿路上皮细胞癌细胞侵袭能力的影响。方法 将人膀胱癌T24细胞随机分为Control组、si-NC组、si-PKM2组和si-PKM2+IGF-1组。实时PCR检测细胞中PKM2 mRNA表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞侵袭和转移;Hoechst 33342荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡;ROS荧光探针法检测细胞中ROS水平;Western blotting检测细胞中PI3K、Akt、mTOR、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞相比,人膀胱癌T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量明显增加(P <0.05)。与Control组相比,si-PKM2组T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量、细胞增殖能力、侵袭细胞数以及细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),细胞凋亡率、细胞中ROS相对水平以及细胞中Bax、caspase-3蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与siPKM2组相比,si-PKM2+IGF-1组T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量、细胞增殖能力、侵袭细胞数以及细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),细胞凋亡率、细胞中ROS相对水平以及细胞中Bax、caspase-3蛋白表达水平明显降低(P <0.05)。结论 敲减PKM2可促进膀胱尿路上皮细胞癌细胞中ROS水平升高,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,进而发挥抑制细胞侵袭和促进细胞凋亡作用。

血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2表达水平及其联合HPV诊断宫颈癌的价值

目的探讨辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)、高迁移率族蛋白A1(Hmga1)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)水平及联合人乳头状瘤病毒(HPV)对宫颈癌的诊断价值。方法选取2022年3月至2023年3月在河南省中医院就诊的186例宫颈疾病患者作为研究对象,根据疾病类型分为宫颈炎组(n=62)、宫颈癌前病变组(n=58)和宫颈癌组(n=66),另选取60例同期健康体检者作为对照组,比较四组及宫颈癌前病变组和宫颈癌组合并、未合并HPV感染患者入院时Th1/Th2因子[血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)]、Hmga1、PKM2水平,分析血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2水平表达与肿瘤病理特征的关系及联合HPV对宫颈癌合并HPV感染的诊断价值。结果四组受检者入院(体检)时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平比较,宫颈癌组>宫颈癌前病变组>宫颈炎组>对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与未合并HPV感染患者比较,宫颈癌前病变组、宫颈癌组合并HPV感染患者入院时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移宫颈癌合并HPV感染患者入院时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);HPV感染对宫颈癌诊断灵敏度为84.85%(54/66),特异度为72.41%(16/28),准确度为56.45%(70/124);血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2、HPV感染对宫颈癌、宫颈癌前病变诊断AUC分别为0.761、0.730、0.745、0.806、0.819、0.707、0.786,HPV感染联合各血清指标诊断AUC为0.908,大于单一指标诊断。结论血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2水平检测对宫颈癌具有一定的诊断价值,临床可通过其联合HPV感染情况早期辅助诊断宫颈病变,为临床针对性制定干预方案提供参考。

PKM2抑制剂Alkannin对乳腺癌恶性进展的影响及机制研究

目的:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在多种肿瘤中异常表达并有望成为潜在治疗靶点,本研究旨在阐明PKM2特异性小分子抑制剂Alkannin对乳腺癌恶性进展的影响及其分子机制。方法:通过生物信息学分析鉴定PKM2在乳腺癌组织及癌旁正常组织中的表达情况及与预后的相关性。测定乳腺癌细胞MDA-MB-231中Alkannin的半致死浓度(IC50)。将乳腺癌细胞分为阴性对照组和Alkannin处理组,通过CCK-8实验、克隆形成实验及Transwell实验检测Alkannin对肿瘤细胞存活、运动侵袭能力的影响。通过免疫印迹、qPCR、双荧光素酶报告基因等实验解析Alkannin调控PKM2/β-连环蛋白(β-catenin)信号轴影响乳腺癌恶性进展的分子机制。结果:PKM2在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,高表达PKM2提示患者预后不良。Alkannin能够显著削弱MDA-MB-231细胞的存活、运动和侵袭能力。Alkannin可通过靶向PKM2抑制β-catenin的激活。结论:本文证实了PKM2抑制剂Alkannin在乳腺癌中发挥抗肿瘤作用,同时也为乳腺癌临床治疗提供了新思路。

丙酮酸激酶M2通过活化信号转导和转录激活因子3影响皮肤鳞状细胞癌上皮间质转化过程

目的:检测丙酮酸激酶(PK)M2和磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT)3在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的表达情况,初步探讨其在CSCC A431细胞系上皮间质转化过程中的作用机制。方法:选取经组织病理检查确诊的30例CSCC患者肿瘤组织和10例行皮肤美容手术患者术中修整切除的正常皮肤组织,通过免疫组化SP法比较PKM2和p-STAT3在两种组织中的表达情况。分析CSCC中PKM2和p-STAT3表达水平与临床病理资料的相关性。采用慢病毒感染法构建靶向敲低PKM2基因的CSCC A431细胞模型,采用免疫印迹(Western blot)法验证敲低模型的构建效果。通过Transwell实验和细胞划痕实验探讨PKM2对A431细胞迁移能力的影响。采用Western blot法检测STAT3、p-STAT3(Tyr705)、N-cadherin、Vimentin和Slug蛋白的表达。结果:PKM2和p-STAT3在CSCC中均高表达,且两者表达水平之间呈正相关。PKM2和p-STAT3在CSCC中的表达与肿瘤分化程度相关。在A431细胞中敲低PKM2基因后,p-STAT3(Tyr705)、N-cadherin和Slug表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),而STAT3和Vimentin表达变化差异无统计学意义。结论:PKM2和p-STAT3的高表达可能参与了CSCC的发生及发展,且PKM2可能通过活化STAT3促进CSCC上皮间质转化过程。

以M2型丙酮酸激酶为靶点的抗肿瘤药物研究进展

目前,肿瘤高发病率、高病死率以及难治愈性使其成为科学研究领域无法突破的难点。随着分子生物学的发展,针对肿瘤细胞特征而挖掘的分子靶点受到研究者的关注。M2型丙酮酸激酶(PKM2)是肿瘤细胞有氧糖酵解过程中的关键催化酶,其对糖酵解具有双重调控作用。因此,PKM2的抑制剂和激活剂均具有成为抗肿瘤候选药物的潜能。本文将对这一看似相悖的现象加以探讨,重点以PKM2为研究对象,介绍其在肿瘤发生发展中的双重作用,并对相关靶向药物加以阐述,为同类相关靶点的挖掘和抗肿瘤候选药物的研发提供理论依据。

M2型丙酮酸激酶翻译后修饰在肿瘤发生和发展中的作用

PKM2,即M2型丙酮酸激酶,因其在糖酵解中的关键作用及在多种肿瘤中的异常表达而备受关注。随着PKM2非代谢功能的发现,PKM2的丙酮酸激酶活性(在细胞质中以四聚体形式存在)和蛋白激酶活性(在细胞核中以二聚体形式存在)之间的切换再次使PKM2成为肿瘤研究的焦点。研究表明,PKM2是一种容易受多种翻译后修饰影响的蛋白质,而不同翻译后修饰对PKM2的细胞定位、结构及激酶活性转换等过程均具有重要的调节作用。PKM2多种翻译后修饰在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。如磷酸化及乙酰化修饰通过改变PKM2细胞定位促进核易位;糖基化、泛素化修饰通过影响PKM2结构转变促进其二聚体结构的形成;琥珀酰化及氧化还原修饰等通过影响激酶活性转变促进PKM2蛋白激酶活性的增强。无论是影响PKM2的结构还是转变细胞定位,都是通过改变其激酶活性来发挥促进或抑制肿瘤发展的作用。

丙酮酸激酶M2型(PKM2)入核机制和核内作用的研究进展

传统观点认为丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2,PKM2)通过催化肿瘤细胞糖代谢来促进肿瘤细胞生长。近年来研究发现除了酶催化功能外,PKM2还能通过多种途径进入细胞核,在核内作为蛋白激酶广泛参与转录调控、蛋白修饰等过程。本文将就这方面的研究成果作一综述。

血清PKM2、NRF2与宫颈癌患者临床病理特征和预后的关系

目的 探讨血清丙酮酸激酶M2型(PKM2)、核因子E2相关因子2(NRF2)与宫颈癌患者临床病理特征和预后的关系。方法 选取2016年1月至2018年1月安阳市肿瘤医院收治的宫颈癌患者92例为宫颈癌组,另选取同期体检健康女性55例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测患者血清PKM2、NRF2水平,分析血清PKM2、NRF2水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier(K-M)法绘制生存曲线,探讨血清PKM2、NRF2水平与宫颈癌患者预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PKM2、NRF2水平预测宫颈癌患者预后不良的价值。结果 宫颈癌组血清PKM2、NRF2水平高于对照组(P<0.001)。血清PKM2、NRF2水平与宫颈癌患者分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访5 a, 92例宫颈癌患者5 a总生存率为61.96%(57/92)。K-M生存曲线分析显示,PKM2、NRF2高水平组总生存率低于PKM2、NRF2低水平组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清PKM2、NRF2水平联合预测宫颈癌患者预后不良的曲线下面积为0.878,大于血清PKM2、NRF2水平单独预测的0.791,0.780。结论 宫颈癌患者血清PKM2、NRF2水平呈异常高表达,其与恶性临床病理特征有关,可能成为宫颈癌患者预后不良的辅助预测指标。

丙酮酸激酶M2型在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是最常见的恶性肿瘤之一。丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)是糖代谢中的关键调节点,控制磷酸烯醇式丙酮酸向丙酮酸转化速率。PK有4种类型,丙酮酸激酶M2型(Pyruvate kinase M2,PKM2)是其中一种,在CRC等肿瘤组织中以PKM2为主。PKM2控制肿瘤细胞的有氧糖酵解,能转移至细胞核参与多种促癌因子的表达。本文主要对PKM2在CRC中功能及其调控机制的研究进展进行综述。

梓醇干预PKM2/LDHA表达调控Th17细胞分化的机制研究

目的研究梓醇通过干预丙酮酸激酶M2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)表达进而影响辅助性T细胞17(Th17)分化的机制。方法从C57BL/6小鼠脾脏中分选出naive CD4^(+)T细胞,通过加入定向分化刺激剂诱导72 h使naive CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化。在诱导分化的同时,分别用0(定向对照)、20、40、80μg/mL梓醇对细胞进行处理。采用流式细胞术检测细胞中Th17细胞分化比例,采用比色法检测细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、PKM2、LDHA mRNA表达情况,采用Western blot法检测细胞中PKM2、LDHA、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。结果与定向对照组比较,经20、40、80μg/mL梓醇作用72 h后,细胞中Th17细胞分化比例分别降低了6.74%、8.41%、9.24%;细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,细胞中PKM2、LDHA、RORγt mRNA表达水平以及细胞中PKM2、LDHA蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论梓醇可通过下调PKM2、LDHA表达来降低糖酵解水平,进而抑制Th17细胞分化。

PKM2对黑色素瘤细胞侵袭与迁移及巨噬细胞M2转变的影响

目的探讨黑色素瘤中丙酮酸激酶M2(PKM2)的表达情况及其与预后相关性,阐明PKM2如何通过糖酵解途径影响黑色素瘤侵袭与迁移及对巨噬细胞M2转变的影响。方法利用TCGA数据库及免疫组化分析PKM2在黑色素瘤组织中的表达情况;利用基因过表达、敲低及ECAR技术分析PKM2对黑色素瘤细胞糖酵解过程影响;通过划痕实验及Transwell实验验证PKM2对黑色素瘤细胞侵袭与迁移的影响;通过细胞共培养检测PKM2对巨噬细胞M1/M2转变的影响。结果TCGA数据库显示,与正常组织相比,PKM2 mRNA水平在黑色素瘤组织中表达明显升高(P<0.05),且PKM2高表达水平患者的生存率低于低/中表达患者(P=0.0018);免疫组化染色结果显示,PKM2在黑色素瘤发生转移患者中的评分明显高于未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。敲低PKM2表达后,黑色素瘤细胞糖酵解能力、糖酵解容量和乳酸水平均明显降低(P<0.05)。细胞迁移实验结果显示,敲低PKM2表达后,黑色素瘤细胞的迁移和侵袭能力均明显降低,加入乳酸后,可部分逆转该现象。过表达组黑色素瘤巨噬细胞的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化碳合成酶(iNOS)水平低于对照组,而CD206和CD163水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);敲低组黑色素瘤巨噬细胞的TNF-α和iNOS水平高于对照组,而CD206和CD163水低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PKM2可通过影响糖酵解进程促进黑色素瘤侵袭与迁移,并对肿瘤微环境中巨噬细胞的M2转变起促进作用,是黑色素瘤代谢治疗的潜在靶点。

微小RNA-133b和M2型丙酮酸激酶在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的分析并探讨微小RNA-133b(miR-133b)和M2型丙酮酸激酶(M2 pyruvate kinase,PKM2)在食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法选取2020年1月至2021年12月于西南医科大学附属医院收治的72例食管鳞癌患者手术切除的癌组织作为研究组;配对癌旁正常食管组织作为对照组。采用原位杂交技术检测miR-133b的表达,运用免疫组化法检测PKM2的表达。比较两组miR-133b、PKM2表达差异,分析食管鳞癌组织miR-133b与PKM2表达的相关性及与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系。结果miR-133b在对照组中的表达水平显著高于研究组,差异有显著性(P<0.05)。PKM2在研究组中的表达水平显著高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。miR-133b低表达组PKM2高表达率显著高于miR-133b高表达组,差异有显著性(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,miR-133b和PKM2在食管鳞癌组织中的表达呈显著负相关(r=-0.532,P=0.000)。食管鳞癌组织中miR-133b的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、病理类型、肿瘤直径、病理分级、浸润深度、脉管转移、神经转移及淋巴结转移均无关(P>0.05)。PKM2在男性、高龄(年龄≥60岁)、发生于食管下段、溃疡型、肿瘤直径≤5cm、高/中分化、发生脉管转移和淋巴结转移的食管鳞癌患者中高表达率更高(P<0.05)。49例食管鳞癌淋巴结转移组织中,PKM2高表达率显著高于miR-133b(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中,miR-133b表达下调,PKM2表达上调。miR-133b可能通过下调PKM2的表达从而抑制食管鳞癌的浸润转移。