丙酮酸脱氢酶E1α亚单位缺陷导致Leigh综合征

Leigh综合征是由于线粒体呼吸链能量代谢障碍所导致的遗传性疾病,丙酮酸脱氢酶E1浕亚单位(pyruvate dehydrogenase complex E1 alpha subunit,PDHA1)缺陷是导致Leigh综合征的常见原因之一。该研究通过PDHA1基因分析首次确诊了1例中国患者。该患儿1岁后运动发育落后,无力,肌张力低下,肌腱反射消失,发热、感冒时间歇性加重,智力发育正常。肌电图检查、腓肠肌病理活检结果提示神经性损害。3岁时脑MRI扫描未见异常,5岁时脑MRI呈现双侧苍白球对称性损害,符合Leigh综合征表现。经基因分析证实患者及其母亲PDHA1基因外显子3存在C214T突变,导致丙酮酸脱氢酶复合物活性下降。经过维生素B1、辅酶Q10、左旋肉碱及低碳水化合物饮食治疗后,患儿运动能力显著改善,现在8岁,正常就学。PDHA1缺陷为X连锁遗传性疾病,表型复杂,临床诊断困难,该患儿以无力为主要表现,经基因诊断确诊。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位、转录激活反应RNA结合蛋白1在表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌中的表达及对患者预后的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)、转录激活反应RNA结合蛋白1(TARBP1)在表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法取95例接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者的肿瘤组织,免疫组化法检测PDHA1、TARBP1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。随访3年,记录患者的总生存率,NSCLC患者预后的影响因素采用Cox风险比例回归模型分析。结果95例NSCLC患者肿瘤组织中,PDHA1阳性表达率为45.26%,阴性表达率为54.74%;TARBP1阳性表达率为74.74%,阴性表达率为25.26%。分化程度为中低分化、淋巴结转移NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1蛋白的阳性表达率较低、TARBP1蛋白的阳性表达率较高。至随访结束,95例NSCLC患者病死67例,生存28例。PDHA1阳性表达患者总生存率为44.2%,明显高于PDHA1阴性表达患者的17.3%(P﹤0.01);TARBP1阳性表达患者的总生存率为18.3%,明显低于TARBP1阴性表达患者的62.5%(P﹤0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为中低分化、有淋巴结转移、PDHA1表达阴性、TARBP1表达阳性均是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1阴性表达率较低、TARBP1阳性表达率较高,且PDHA1阴性表达、TARBP1阳性表达患者的预后较差。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位与心肌缺血再灌注损伤的研究进展

心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是临床体外循环（CPB）心脏直视手术术后心功能障碍甚至导致死亡的主要原因之一,其发生机制至今仍未完全阐明.我们的前期研究结果显示,心肌胰岛素抵抗（IR）可能是MIRI的又一重要机制,涉及心肌能量底物葡萄糖和脂肪酸代谢紊乱.近来的研究结果显示,丙酮酸脱氢酶E1α亚单位（PDHA1）作为丙酮酸脱氢酶复合物（PDC）的重要组成部分,在维持缺血缺氧及再灌注心肌细胞糖、脂及能量代谢稳态中扮演关键的角色.通过研究PDHA1的相关分子机制,可进一步阐明体外循环心肌胰岛素抵抗的发生机制,对MIRI的防治具有重要意义.

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位与心肌缺血再灌注损伤及心肌胰岛素抵抗的相关性研究进展

体外循环(CPB)是心脏外科心内直视手术的必备技术,但是CPB术中并发的心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)是导致患者心功能不全甚至死亡的最主要原因。MIRI的病理机制较为复杂,研究发现,心肌胰岛素抵抗是其又一重要发病机制,主要涉及心肌糖脂代谢紊乱。丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)是丙酮酸脱氢酶复合物的核心组成部分,它不仅是连接糖酵解与三羧酸循环的关键限速部分,也是调节糖脂代谢、维持细胞内能量供给平衡的重要调节点。本文总结PDHA1与心肌缺血再灌注损伤及心肌胰岛素抵抗相关性的研究,进一步揭示PDHA1在心肌胰岛素抵抗中的作用,为MIRI的防治提供有效的治疗靶点。

细胞角蛋白19血清片段211、丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位在非小细胞肺癌患者中的表达及意义

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者细胞角蛋白19血清片段211(Cyfra211)、丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位(PDHA1)的表达及临床意义。方法 收集2017年3月至2020年3月我院收治的139例NSCLC患者癌组织标本(癌组织组)及远离癌组织3 cm的癌旁正常组织(对照组)。分析不同特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表达及患者预后情况。结果 癌组织组Cyfra211阳性表达率及PDHA1阴性表达率高于对照组(P<0.05);低分化、Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移NSCLC患者Cyfra211阳性率及PDHA1阴性率更高(P<0.05);139例患者中死亡84例,生存55例,死亡NSCLC患者Cyfra211阳性率、PDHA1阴性率均高于生存患者(P<0.05);Cyfra211、PDHA1联合检测AUC、灵敏度、特异度均显著高于单一检测(P<0.05)。结论 Cyfra211、PDHA1C联合检测在NSCLC病情、预后评估中的作用更加可靠有效,可为NSCLC患者临床治疗指导及预后评估提供更好的参考依据。

用重组丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位检测M2抗体及其临床意义

目的用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)检测M2抗体,以利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期诊断。方法采用重组表达的PDC-E2建立了免疫印迹法(IBT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。检测40例PBC患者血清的M2抗体,以其他肝病患者、自身免疫病患者、健康体检者作对照。结果40例PBC患者血清中检测出抗PDC-E2抗体阳性37例,阴性3例,阳性率为92.5%,而疾病对照组和健康体检者血清中该抗体检测均为阴性。结论用重组表达的人PDC-E2检测抗体有较好的敏感性和特异性,有助于PBC的临床诊断。

丙酮酸脱氢酶E_(1α)自然突变的结构和特性的研究进展

综述了丙酮酸脱氢酶(PDH)E1α自然突变的结构和特性的研究进展

脑胶质瘤组织中肿瘤坏死因子受体1、丙酮酸脱氢酶复合物E2的表达变化及其临床意义

目的观察脑胶质瘤组织中肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法脑胶质瘤患者79例,均接受手术治疗,术中留取脑胶质瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测脑胶质瘤组织及癌旁组织中TNFR1、PDC-E2,计算阳性表达率,分析脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达的相关性及其与脑胶质瘤患者临床病理参数的关系。根据脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2检测结果,将患者分为TNFR1阳性表达组、TNFR1阴性表达组和PDC-E2阳性表达组、PDC-E2阴性表达组,分析TNFR1、PDC-E2阳性表达与脑胶质瘤患者预后的关系。结果脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达率分别为70.89%、64.56%,癌旁组织中分别为36.70%、46.83%,两者相比,P均<0.05。脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达呈正相关关系(r=0.653,P<0.05)。TNFR1、PDC-E2阳性表达与脑胶质瘤患者肿瘤直径、WHO肿瘤分级有关(P均<0.05),而与年龄、性别、病理类型、侵犯脑叶数无关(P均>0.05)。TNFR1阳性表达组5年生存率为30.36%,TNFR1阴性表达组5年生存率为65.22%,两组相比,P<0.05。PDC-E2阳性表达组5年生存率为31.37%,PDC-E2阴性表达组5年生存率为57.14%,两组相比,P<0.05。结论与癌旁组织相比,脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达率升高;脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达呈正相关关系,并与肿瘤直径、WHO肿瘤分级有关,TNFR1、PDC-E2阳性表达的脑胶质瘤患者术后生存率较低。

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1蛋白表达增高,随后其表达下降。②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P<0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P>0.05)。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。

大鼠肝再生相关基因LRRP1的人同源基因是一种新型琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因

目的:应用分子生物学和生物信息学方法,寻找、克隆大鼠肝再生相关基因LRRP1的人的同源基因,阐明LRRP1 基因的结构和功能,为研究肝脏再生调节的分子生物学机制奠定基础. 方法:利用美国国立卫生研究院建立的核苷酸数据库(GenBank)以及相应的核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTN),以大鼠的LRRP1的cDNA序列作为参照,对于人的同源性cDNA序列进行搜索分析,寻找人的LRRP1 的同源基因序列.利用蛋白质一级结构序列的势据库以及相应的同源蛋白序列的搜索分析,阐明人LRRP1蛋白质一级结构与已知蛋白序列的同源性,从而根据蛋白质一级结构的相似性,对于新克隆基因进行功能方面的预测分析.应用在线软件的分析,对于人LRRP1蛋白质一级结构序列进行分析预测,分析其氨基末端序列是否具有信号肽序列,以判断人LRRP1蛋白是否是一种可以分泌表达的蛋白;同样对人LRRP1蛋白质一级结构序列进行在线软件的分析,对于人LRRP1蛋白质分子结构中的潜在的糖基化位点以及其他类型的修饰位点进行预测. 结果:人的LRRP1的编码基因由480 nt组成,编码产物由159 aa组成.人LRRP1的蛋白质一级结构序列与人琥珀酸脱氢酶亚单位D、牛琥珀酸脱氢酶亚单位D高度同源,同源性分别为79%(126/159),78%(123/156).人LRRP1是一种分泌蛋白,在其分子结构中具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和豆蔻脂化修饰位点. 结论:人LRRP1蛋白是一种新型的琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因.

非诺贝特对2型糖尿病大鼠骨骼肌丙酮酸脱氢酶激酶表达的影响

目的:动态观察2型糖尿病进展过程中骨骼肌丙酮酸脱氢酶激酶(PDK4)和丙酮酸脱氢酶1α亚单位(E1α)水平的变化和非诺贝特的干预作用。方法:4周龄自发性2型糖尿病动物模型雄性OLETF大鼠20只随机分为治疗组和未治组,每组10只,另设正常LETO大鼠10只为对照。治疗组每d灌胃非诺贝特20mg/kg,未治组和对照组每d灌胃等量蒸馏水。分别于第8周、17周和30周龄称体质量,行标准葡萄糖耐量试验(OGTT),测定空腹血糖和胰岛素、2h血糖、甘油三酯和胆固醇。17周龄时每组随机抽取4只动物杀检,至30周龄全部杀检,取下肢骨骼肌,Western blot测定骨骼肌PDK4和E1α的表达。结果:8周龄时3组生化指标差异无统计学意义(P>0.05)。随鼠龄的增加,未治组2h血糖、PDK4和E1α的表达高于同期对照组;与未治组比较,治疗组上述指标改善不明显(P>0.05)。结论:胰岛素抵抗大鼠骨骼肌PDK4和E1α的表达随病程增加持续增强,这可能与胰岛素在骨骼肌的作用下降有关。

一株南极嗜冷杆菌产丙酮酸脱氢酶的性质研究及基因克隆

从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株嗜冷杆菌7195,其16SrDNA序列分析表明该菌株属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter),从该菌的全基因组DNA中克隆到编码丙酮酸脱氢酶系E1(PDHcE1)的完整ORF,全长为2817bp,使用DNAMAN 5．1对其全长ORF的PDHcE1基因进行分析,PDHcE1基因编码一个由939AA残基组成、分子量预计为100663Da的PDHcE1蛋白质,与Psychrobacter sp．273-4的PDHcE1有78．53％的相似性。

PDHA1基因新发变异致丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺陷女性患儿遗传学分析

目的对1例临床拟诊丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症(PHD)患儿及家系成员进行临床及基因突变分析,为早期诊断及遗传咨询提供依据。方法对就诊于柳州市妇幼保健院的1例PHD患儿的临床特点及基因检测进行回顾分析。以“丙酮酸脱氢酶复合物”“丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症”“PDHA1基因”“Pyruvate dehydrogenase complex”“Pyruvate dehydrogenase complex deficiency”“PDHA1”为关键词查阅在线人类孟德尔遗传数据库、PubMed数据库、中国知网及万方数据库从建库至2020年6月相关文献,对中国人PHD病例进行汇总分析。结果先证者女性,以运动发育落后为主要临床表现,实验室检查血乳酸5.62 mmol/L(参考值0.5~2.2 mmol/L),丙酮酸430μmol/L(参考值30~100μmol/L),血氨66μmol/L(参考值0~54μmol/L),头颅MRI检查提示双侧基底节区异常信号,伴脑萎缩、脑室增宽,符合Leigh综合征影像学改变。患儿PDHA1基因检出未报道变异位点c.508C>T(p.R170X),变异位点导致蛋白质合成提前终止,经致病性预测分析软件及ACMG变异分类为1类致病变异,父母双方未检测到相应的变异位点。共检索到中国人PHD病例15例,相关文献18篇,包括本次报道1例共16例,其中男性14例,女性2例。多数患者以神经肌肉系统疾病为首发症状,实验室检查提示乳酸、丙酮酸增高,影像学检查可见基底节区信号改变。中国人PDHA1基因检测共发现14种变异类型,以R378C和R126C突变为主。结论通过临床表现结合PDHA1基因诊断确诊1例丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症女性患儿,新变异位点的发现丰富了PDHA1基因突变谱。

丙酮酸脱氢酶复合物E_2亚单位的克隆表达与临床应用

目的 构建丙酮酸脱氢酶复合物的E2亚单位(PDC-E2)的表达载体。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术从人淋巴细胞中扩增出PDC-E2的基因片段,克隆至pExSecI表达载体进行诱导表达,并对表达产物进行western blot和酶联免疫吸附法鉴定。 结果 成功构建了表达载体pExSecI/PDC-E2;表达产物能特异性的被原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中的自身抗体识别。 结论 获得PDC-E2蛋白的高效表达,为利用原核表达PDC-E2对PBC患者进行血清学检测奠定了基础。

鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定

为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。

外源性化合物修饰丙酮酸脱氢酶E2亚单位在原发性胆汁性肝硬化发病机制中的意义

目的初步探讨外源性化合物——2-辛炔酸（2-OA）修饰丙酮酸脱氢酶E2亚单位（PDC-E2）在PBC发病机制中的作用。方法选择PBC患者102例，原发性硬化性胆管炎（PSC）患者34例及健康对照组50名，采用ELISA方法检测周围血抗PDC-E2抗体、抗硫辛酸及抗2-OA抗体的水平；选择其中30例抗PDC-E2抗体阳性且抗2-OA抗体阴性的PBC患者，采用抑制ELISA（iELISA）实验方法，检测患者周围血中是否存在与2-OA修饰PDC-E2后新出现表位的抗体。计数资料间比较采用χ2检验和Fisher确切概率法；计量资料间的比较采用Welch修正的非配对t检验；相关分析采用Spearman秩相关分析法。 结果PBC患者抗PDC-E2抗体、抗硫辛酸阳性及抗2-OA抗体的阳性率分别是94.1%（96/102）、73.5%（73/102）和53.9%（55/102），显著高于健康对照组，PSC组与健康对照组间各抗体阳性率差异无统计学意义。PBC患者抗硫辛酸抗体与抗2-OA抗体间无相关性（r=-0.065，P=0.520）。iELISA结果显示：40%（12/30）PBC患者周围血中存在只识别经2-OA修饰后PDC-E2（2OA-PDC-E2）的抗体，此抗体主要存在于早期PBC患者中。 结论PBC患者血清中存在无相关性的抗硫辛酸抗体和抗2-OA抗体。经2-OA修饰后的PDC-E2可能出现新的抗原构象表位，介导部分PBC易患体质者对此产生免疫应答，从而有助于患者突破对PDC-E2的免疫耐受，最终导致PBC发病。

丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症1例的临床表现与分子诊断

目的分析1例丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症患儿PDHA1基因的变异特点及其相应的临床症状,为临床诊断、遗传咨询和产前诊断提供依据。方法对1例丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症患儿的临床症状、生化检查及治疗效果进行分析;运用高通量测序技术对患儿及其父母外周血进行基因组DNA检测,运用Sanger测序对患儿姐姐进行阳性位点验证。结果患儿,男,3个月,持续性高乳酸血症,血乳酸9.05~11.04 mmol/L,不会抬头,反应欠灵敏。头颅磁共振成像提示双侧侧脑室略显僵直,胼胝体体部变薄,双侧枕骨发育不对称。3 h脑电图提示睡眠期左侧前中颞区为主尖波、尖慢复合波散发;睡眠期广泛性中-高波幅2.0~3.0 Hz慢波阵发。高通量基因测序结果提示,患儿PDHA1基因c.1243_1257dup15(p.V415-N419dup)半合子变异,结合临床表现确诊为丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症。患儿母亲及姐姐未携带该变异,且排除母亲致病位点嵌合体的可能性。最后患儿因治疗无效于1岁3个月死亡。结论 PDHA1基因c.1243-1257dup15重复变异为新发变异,该变异可导致丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症;丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症的确诊需进行分子诊断。

一例锥体束受累的丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症的PDHA1基因变异分析

目的对1例表现为发作性共济失调合并锥体束征阳性患者的PDHA1基因进行变异分析,明确其致病原因并探讨其可能的机制。方法应用高通量测序、Sanger测序及SCA动态变异位点检测并分析。结果患者为青少年男性,表现为发作性共济失调,双侧膝反射亢进,踝阵挛(+)。基因检测结果显示患者的PDHA1基因发生了c.1159-1162dupAAGT变异,父、母和胞姐未携带此变异,提示为新生变异,而SCA动态变异未见异常,患者确诊为丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症。结论PDHA1基因c.1159-1162dupAAGT变异可能为患者的致病原因,丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症患者表型复杂,极少数可有锥体束受累,可能与早期神经元发育受影响有关。

一例PDHA1突变致女婴丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症临床及遗传学分析并文献复习

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症的临床特征及基因突变遗传学特点。方法回顾性分析由河北省人民医院确诊的1例丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症罕见女婴患儿的临床特点及基因学特征,并结合本病的研究进展做文献复习。结果罕见女婴发病,起病早,重度精神运动发育落后,持续高乳酸、高丙酮酸血症,代谢性酸中毒,头颅MRI显示透明隔较小,隔间腔缺如;穹隆显示不明确,胼胝体压部细小,呈蓬状向前突。第三脑室顶向背侧抬高,左侧侧脑室扩张向右侧突,左侧室间孔明显扩大。脑电图间歇期:左侧后头部(O1、T5)导联可见大量中高幅棘慢波、慢波,少量多棘慢波散发或连续发放。双侧半球各导联可见大量低幅慢波活动。二代基因测序发现患儿PDHA1基因在chrX-19371287位置有C>T(p.A169V)的杂合错义突变,父母PDHA1基因未见该突变。确诊为丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症。结论PDHA1突变所致的丙酮酸脱氢酶E1α缺乏症在早期缺乏特异性表现,且女性患者因有X染色体随机失活,更为少见。对原因不明的精神运动发育落后、持续高乳酸血症、难以纠正的代谢性酸中毒患儿,需警惕该病。可通过基因分析诊断。

TNFR1与PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡影响的相关性研究

目的:胶质瘤是一种最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,生长迅速,恶性程度高。研究胶质瘤细胞凋亡过程中肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)蛋白的表达变化,探讨TNFR1和PDC-E2在此过程中的作用。方法:培养TNFR1的小干扰细胞,将干扰掉TNFR1的质粒转染入U87MG细胞,检测TNFR1和PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡的影响。通过免疫共沉淀方法检测TNFR1和PDC-E2在体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87MG细胞内的共定位;在转染干扰掉TNFR1的胶质瘤细胞中,检测TNFR1和PDC-E2的相互作用对凋亡标记物Caspase-3蛋白表达量的调节作用。结果:将TNFR1的小干扰质粒转染入U87MG细胞,结果显示未干扰掉的TNFR1对胶质瘤细胞凋亡有抑制作用,干扰掉TNFR1时对胶质瘤细胞凋亡的抑制作用减弱。体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示TNFR1和PDC-E2存在相互作用;在胶质瘤细胞中检测到TNFR1和PDC-E2的相互作用协同促进Caspase-3的表达。结论:TNFR1和PDC-E2抑制胶质瘤细胞的凋亡,协同作用比单独对凋亡的影响更加明显;TNFR1和PDC-E2存在相互作用,两者协同作用更能增高作用底物Caspase-3的表达。