外源性化合物修饰丙酮酸脱氢酶E2亚单位在原发性胆汁性肝硬化发病机制中的意义

目的初步探讨外源性化合物——2-辛炔酸（2-OA）修饰丙酮酸脱氢酶E2亚单位（PDC-E2）在PBC发病机制中的作用。方法选择PBC患者102例，原发性硬化性胆管炎（PSC）患者34例及健康对照组50名，采用ELISA方法检测周围血抗PDC-E2抗体、抗硫辛酸及抗2-OA抗体的水平；选择其中30例抗PDC-E2抗体阳性且抗2-OA抗体阴性的PBC患者，采用抑制ELISA（iELISA）实验方法，检测患者周围血中是否存在与2-OA修饰PDC-E2后新出现表位的抗体。计数资料间比较采用χ2检验和Fisher确切概率法；计量资料间的比较采用Welch修正的非配对t检验；相关分析采用Spearman秩相关分析法。 结果PBC患者抗PDC-E2抗体、抗硫辛酸阳性及抗2-OA抗体的阳性率分别是94.1%（96/102）、73.5%（73/102）和53.9%（55/102），显著高于健康对照组，PSC组与健康对照组间各抗体阳性率差异无统计学意义。PBC患者抗硫辛酸抗体与抗2-OA抗体间无相关性（r=-0.065，P=0.520）。iELISA结果显示：40%（12/30）PBC患者周围血中存在只识别经2-OA修饰后PDC-E2（2OA-PDC-E2）的抗体，此抗体主要存在于早期PBC患者中。 结论PBC患者血清中存在无相关性的抗硫辛酸抗体和抗2-OA抗体。经2-OA修饰后的PDC-E2可能出现新的抗原构象表位，介导部分PBC易患体质者对此产生免疫应答，从而有助于患者突破对PDC-E2的免疫耐受，最终导致PBC发病。

用重组丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位检测M2抗体及其临床意义

目的用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)检测M2抗体,以利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期诊断。方法采用重组表达的PDC-E2建立了免疫印迹法(IBT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。检测40例PBC患者血清的M2抗体,以其他肝病患者、自身免疫病患者、健康体检者作对照。结果40例PBC患者血清中检测出抗PDC-E2抗体阳性37例,阴性3例,阳性率为92.5%,而疾病对照组和健康体检者血清中该抗体检测均为阴性。结论用重组表达的人PDC-E2检测抗体有较好的敏感性和特异性,有助于PBC的临床诊断。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位缺陷导致Leigh综合征

Leigh综合征是由于线粒体呼吸链能量代谢障碍所导致的遗传性疾病,丙酮酸脱氢酶E1浕亚单位(pyruvate dehydrogenase complex E1 alpha subunit,PDHA1)缺陷是导致Leigh综合征的常见原因之一。该研究通过PDHA1基因分析首次确诊了1例中国患者。该患儿1岁后运动发育落后,无力,肌张力低下,肌腱反射消失,发热、感冒时间歇性加重,智力发育正常。肌电图检查、腓肠肌病理活检结果提示神经性损害。3岁时脑MRI扫描未见异常,5岁时脑MRI呈现双侧苍白球对称性损害,符合Leigh综合征表现。经基因分析证实患者及其母亲PDHA1基因外显子3存在C214T突变,导致丙酮酸脱氢酶复合物活性下降。经过维生素B1、辅酶Q10、左旋肉碱及低碳水化合物饮食治疗后,患儿运动能力显著改善,现在8岁,正常就学。PDHA1缺陷为X连锁遗传性疾病,表型复杂,临床诊断困难,该患儿以无力为主要表现,经基因诊断确诊。

细胞角蛋白19血清片段211、丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位在非小细胞肺癌患者中的表达及意义

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者细胞角蛋白19血清片段211(Cyfra211)、丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位(PDHA1)的表达及临床意义。方法 收集2017年3月至2020年3月我院收治的139例NSCLC患者癌组织标本(癌组织组)及远离癌组织3 cm的癌旁正常组织(对照组)。分析不同特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表达及患者预后情况。结果 癌组织组Cyfra211阳性表达率及PDHA1阴性表达率高于对照组(P<0.05);低分化、Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移NSCLC患者Cyfra211阳性率及PDHA1阴性率更高(P<0.05);139例患者中死亡84例,生存55例,死亡NSCLC患者Cyfra211阳性率、PDHA1阴性率均高于生存患者(P<0.05);Cyfra211、PDHA1联合检测AUC、灵敏度、特异度均显著高于单一检测(P<0.05)。结论 Cyfra211、PDHA1C联合检测在NSCLC病情、预后评估中的作用更加可靠有效,可为NSCLC患者临床治疗指导及预后评估提供更好的参考依据。

用ELISA检测抗丙酮酸脱氢酶复合物E2和E3结合蛋白自身抗体

目的 用重组丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位和E3结合蛋白 (PDC E2 ,PDC E3BP)建立筛查原发性胆汁性肝硬化 (PBC)患者相应自身抗体的ELISA。方法 用本室制备的重组PDC E2和PDC E3BP蛋白包被酶联反应板 ,检测PBC患者、正常人及其他肝病患者血清。结果 组建成筛查PBC患者血清中自身抗体的试剂盒 ,能够准确地检测PBC患者血清中的自身抗体。结论 建立的试剂盒能用于PBC患者血清中丙酮酸脱氢酶复合物自身抗体的检测。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位、转录激活反应RNA结合蛋白1在表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌中的表达及对患者预后的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)、转录激活反应RNA结合蛋白1(TARBP1)在表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法取95例接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者的肿瘤组织,免疫组化法检测PDHA1、TARBP1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。随访3年,记录患者的总生存率,NSCLC患者预后的影响因素采用Cox风险比例回归模型分析。结果95例NSCLC患者肿瘤组织中,PDHA1阳性表达率为45.26%,阴性表达率为54.74%;TARBP1阳性表达率为74.74%,阴性表达率为25.26%。分化程度为中低分化、淋巴结转移NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1蛋白的阳性表达率较低、TARBP1蛋白的阳性表达率较高。至随访结束,95例NSCLC患者病死67例,生存28例。PDHA1阳性表达患者总生存率为44.2%,明显高于PDHA1阴性表达患者的17.3%(P﹤0.01);TARBP1阳性表达患者的总生存率为18.3%,明显低于TARBP1阴性表达患者的62.5%(P﹤0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为中低分化、有淋巴结转移、PDHA1表达阴性、TARBP1表达阳性均是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1阴性表达率较低、TARBP1阳性表达率较高,且PDHA1阴性表达、TARBP1阳性表达患者的预后较差。

脑胶质瘤组织中肿瘤坏死因子受体1、丙酮酸脱氢酶复合物E2的表达变化及其临床意义

目的观察脑胶质瘤组织中肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法脑胶质瘤患者79例,均接受手术治疗,术中留取脑胶质瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测脑胶质瘤组织及癌旁组织中TNFR1、PDC-E2,计算阳性表达率,分析脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达的相关性及其与脑胶质瘤患者临床病理参数的关系。根据脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2检测结果,将患者分为TNFR1阳性表达组、TNFR1阴性表达组和PDC-E2阳性表达组、PDC-E2阴性表达组,分析TNFR1、PDC-E2阳性表达与脑胶质瘤患者预后的关系。结果脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达率分别为70.89%、64.56%,癌旁组织中分别为36.70%、46.83%,两者相比,P均<0.05。脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达呈正相关关系(r=0.653,P<0.05)。TNFR1、PDC-E2阳性表达与脑胶质瘤患者肿瘤直径、WHO肿瘤分级有关(P均<0.05),而与年龄、性别、病理类型、侵犯脑叶数无关(P均>0.05)。TNFR1阳性表达组5年生存率为30.36%,TNFR1阴性表达组5年生存率为65.22%,两组相比,P<0.05。PDC-E2阳性表达组5年生存率为31.37%,PDC-E2阴性表达组5年生存率为57.14%,两组相比,P<0.05。结论与癌旁组织相比,脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达率升高;脑胶质瘤组织中TNFR1、PDC-E2阳性表达呈正相关关系,并与肿瘤直径、WHO肿瘤分级有关,TNFR1、PDC-E2阳性表达的脑胶质瘤患者术后生存率较低。

非诺贝特对2型糖尿病大鼠骨骼肌丙酮酸脱氢酶激酶表达的影响

目的:动态观察2型糖尿病进展过程中骨骼肌丙酮酸脱氢酶激酶(PDK4)和丙酮酸脱氢酶1α亚单位(E1α)水平的变化和非诺贝特的干预作用。方法:4周龄自发性2型糖尿病动物模型雄性OLETF大鼠20只随机分为治疗组和未治组,每组10只,另设正常LETO大鼠10只为对照。治疗组每d灌胃非诺贝特20mg/kg,未治组和对照组每d灌胃等量蒸馏水。分别于第8周、17周和30周龄称体质量,行标准葡萄糖耐量试验(OGTT),测定空腹血糖和胰岛素、2h血糖、甘油三酯和胆固醇。17周龄时每组随机抽取4只动物杀检,至30周龄全部杀检,取下肢骨骼肌,Western blot测定骨骼肌PDK4和E1α的表达。结果:8周龄时3组生化指标差异无统计学意义(P>0.05)。随鼠龄的增加,未治组2h血糖、PDK4和E1α的表达高于同期对照组;与未治组比较,治疗组上述指标改善不明显(P>0.05)。结论:胰岛素抵抗大鼠骨骼肌PDK4和E1α的表达随病程增加持续增强,这可能与胰岛素在骨骼肌的作用下降有关。

丙酮酸脱氢酶复合物E_2亚单位的克隆表达与临床应用

目的 构建丙酮酸脱氢酶复合物的E2亚单位(PDC-E2)的表达载体。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术从人淋巴细胞中扩增出PDC-E2的基因片段,克隆至pExSecI表达载体进行诱导表达,并对表达产物进行western blot和酶联免疫吸附法鉴定。 结果 成功构建了表达载体pExSecI/PDC-E2;表达产物能特异性的被原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中的自身抗体识别。 结论 获得PDC-E2蛋白的高效表达,为利用原核表达PDC-E2对PBC患者进行血清学检测奠定了基础。

PDHA1基因新发变异致丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺陷女性患儿遗传学分析

目的对1例临床拟诊丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症(PHD)患儿及家系成员进行临床及基因突变分析,为早期诊断及遗传咨询提供依据。方法对就诊于柳州市妇幼保健院的1例PHD患儿的临床特点及基因检测进行回顾分析。以“丙酮酸脱氢酶复合物”“丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症”“PDHA1基因”“Pyruvate dehydrogenase complex”“Pyruvate dehydrogenase complex deficiency”“PDHA1”为关键词查阅在线人类孟德尔遗传数据库、PubMed数据库、中国知网及万方数据库从建库至2020年6月相关文献,对中国人PHD病例进行汇总分析。结果先证者女性,以运动发育落后为主要临床表现,实验室检查血乳酸5.62 mmol/L(参考值0.5~2.2 mmol/L),丙酮酸430μmol/L(参考值30~100μmol/L),血氨66μmol/L(参考值0~54μmol/L),头颅MRI检查提示双侧基底节区异常信号,伴脑萎缩、脑室增宽,符合Leigh综合征影像学改变。患儿PDHA1基因检出未报道变异位点c.508C>T(p.R170X),变异位点导致蛋白质合成提前终止,经致病性预测分析软件及ACMG变异分类为1类致病变异,父母双方未检测到相应的变异位点。共检索到中国人PHD病例15例,相关文献18篇,包括本次报道1例共16例,其中男性14例,女性2例。多数患者以神经肌肉系统疾病为首发症状,实验室检查提示乳酸、丙酮酸增高,影像学检查可见基底节区信号改变。中国人PDHA1基因检测共发现14种变异类型,以R378C和R126C突变为主。结论通过临床表现结合PDHA1基因诊断确诊1例丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症女性患儿,新变异位点的发现丰富了PDHA1基因突变谱。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位与心肌缺血再灌注损伤的研究进展

心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是临床体外循环（CPB）心脏直视手术术后心功能障碍甚至导致死亡的主要原因之一,其发生机制至今仍未完全阐明.我们的前期研究结果显示,心肌胰岛素抵抗（IR）可能是MIRI的又一重要机制,涉及心肌能量底物葡萄糖和脂肪酸代谢紊乱.近来的研究结果显示,丙酮酸脱氢酶E1α亚单位（PDHA1）作为丙酮酸脱氢酶复合物（PDC）的重要组成部分,在维持缺血缺氧及再灌注心肌细胞糖、脂及能量代谢稳态中扮演关键的角色.通过研究PDHA1的相关分子机制,可进一步阐明体外循环心肌胰岛素抵抗的发生机制,对MIRI的防治具有重要意义.

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位与心肌缺血再灌注损伤及心肌胰岛素抵抗的相关性研究进展

体外循环(CPB)是心脏外科心内直视手术的必备技术,但是CPB术中并发的心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)是导致患者心功能不全甚至死亡的最主要原因。MIRI的病理机制较为复杂,研究发现,心肌胰岛素抵抗是其又一重要发病机制,主要涉及心肌糖脂代谢紊乱。丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)是丙酮酸脱氢酶复合物的核心组成部分,它不仅是连接糖酵解与三羧酸循环的关键限速部分,也是调节糖脂代谢、维持细胞内能量供给平衡的重要调节点。本文总结PDHA1与心肌缺血再灌注损伤及心肌胰岛素抵抗相关性的研究,进一步揭示PDHA1在心肌胰岛素抵抗中的作用,为MIRI的防治提供有效的治疗靶点。

环化PDC-E2内硫辛酰区及其在原发性胆汁性胆管炎患者抗线粒体抗体检测中的价值

目的探讨丙酮酸脱氢酶复合物E2亚基(PDC-E2)内硫辛酰区域(ILD)环化后在原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者抗线粒体抗体(AMA)检测中的抗原性变化及临床意义。方法利用质粒pTWIN1提供的内含肽自我剪切技术,构建、表达和纯化环状ILD(cILD),采用Western blot法鉴定线状ILD和cILD的抗原性;选择PBC患者316例、类风湿性关节炎(RA)患者34例及健康对照36例,分别以PDC-E2、线状ILD及cILD为包被抗原,ELISA法比较检测受试者血清中AMA的阳性率。结果Western blot结果显示,重组获得的线状ILD和cILD蛋白均具有与AMA结合的免疫原性;分别用PDC-E2、线状ILD及cILD为包被抗原,ELISA法检测AMA阳性率分别为93.04%(294/316)、91.46%(289/316)和85.76%(271/316),其中,cILD为包被抗原检测AMA阳性率低于PDC-E2检测阳性率(85.76%vs 93.04%,P=0.003)和线状ILD检测阳性率(85.76%vs 91.46%,P=0.024);PDC-E2和线状ILD检测AMA的阳性率差异无统计学意义(93.04%vs 91.46%,P=0.744)。PDC-E2和线状ILD检测AMA均呈阴性的21例PBC患者中,cILD检测出38.10%(8/21)的AMA阳性率。结论cILD对AMA的抗原性虽有所下降,但在传统检测AMA呈阴性的PBC患者临床诊断中,可能潜在新的临床实用价值。

TNFR1与PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡影响的相关性研究

目的:胶质瘤是一种最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,生长迅速,恶性程度高。研究胶质瘤细胞凋亡过程中肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)蛋白的表达变化,探讨TNFR1和PDC-E2在此过程中的作用。方法:培养TNFR1的小干扰细胞,将干扰掉TNFR1的质粒转染入U87MG细胞,检测TNFR1和PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡的影响。通过免疫共沉淀方法检测TNFR1和PDC-E2在体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87MG细胞内的共定位;在转染干扰掉TNFR1的胶质瘤细胞中,检测TNFR1和PDC-E2的相互作用对凋亡标记物Caspase-3蛋白表达量的调节作用。结果:将TNFR1的小干扰质粒转染入U87MG细胞,结果显示未干扰掉的TNFR1对胶质瘤细胞凋亡有抑制作用,干扰掉TNFR1时对胶质瘤细胞凋亡的抑制作用减弱。体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示TNFR1和PDC-E2存在相互作用;在胶质瘤细胞中检测到TNFR1和PDC-E2的相互作用协同促进Caspase-3的表达。结论:TNFR1和PDC-E2抑制胶质瘤细胞的凋亡,协同作用比单独对凋亡的影响更加明显;TNFR1和PDC-E2存在相互作用,两者协同作用更能增高作用底物Caspase-3的表达。

TNFR1与PDC-E2在胶质瘤中表达的相关性及其临床意义

目的:研究TNFR1和PDC-E2在胶质瘤组织中的表达情况,分析TNFR1和PDC-E2异常表达与胶质瘤发生发展的关系。方法:采用Western blot技术检测9例不同级别胶质瘤新鲜组织中TNFR1和PDCE2的表达情况;运用免疫组化方法检测75例胶质瘤组织石蜡切片中TNFR1和PDC-E2的表达情况,并结合临床病理资料分析TNFR1和PDC-E2与患者年龄、性别、肿瘤位置、手术切除范围以及肿瘤分级等因素之间的关系,并对其进行随访,应用Kaplan-Meier法分析TNFR1和PDC-E2与胶质瘤预后的关系,对两者的表达情况做Spearman等级相关性分析。结果:Western blot分析显示,TNFR1和PDC-E2在胶质瘤组织中的表达随级别增高而增高。免疫组化结果显示,TNFR1和PDC-E2的表达与胶质瘤组织学分级之间有统计学意义(P值均<0.001)。Kaplan-Meier分析显示胶质瘤中TNFR1和PDC-E2的高表达与患者较差的预后相关(P值均<0.01);对两者的表达情况做Spearman等级相关性分析,结果发现TNFR1和PDC-E2的表达呈正相关(r=0.740,P<0.01)。结论:TNFR1和PDC-E2在胶质瘤中随着肿瘤级别的增加表达升高,高表达TNFR1和PDC-E2的患者预后较差,TNFR1和PDC-E2表达呈正相关。

Leigh综合征患儿核基因和线粒体基因突变的初步分析

目的探讨中国人Leigh综合征患儿的发病机制,并对已知的部分核基因和线粒体基因突变进行分析。方法对1992-2006年收集的来自我国28个省、自治区或直辖市的145例Leigh综合征患儿进行病因学分析。在排除SURF1基因和线粒体基因T8993G、T8993C、A8344G、A3243G四个位点突变后,对80例患儿的丙酮酸脱氢酶E1α亚单位基因(PDHA1)进行PCR扩增和测序分析;并在此基础上对9个线粒体DNA突变位点(G13513A、A13084T、T10158C、C11777A、T10191C、T14487C、T12706C、9537insC和T9176G)进行突变筛查。另对23例A3243G线粒体DNA突变阳性的患儿进行SURF1基因的分析。结果80例患儿中仅1例携带PDHA1基因突变,为214位点C>T转换,导致PDHA1蛋白第27位氨基酸由精氨酸变为半胱氨酸。而64例患儿其他9个线粒体DNA突变位点筛查均为阴性。在23例携带线粒体DNAA3243G突变的患儿中,6例携带SURF1基因G604C杂合性变异。结论由于Leigh综合征病因复杂多样,使突变分析难于获得阳性结果。为缩小突变筛查的范围,明确Leigh综合征患儿的病因,亟待建立适用于临床检测应用的线粒体呼吸链酶学的测定方法。

Sdha基因敲低对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(SDHA)对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用慢病毒载体介导的sh RNA敲低BNL CL.2细胞中sdha基因的表达。流式细胞仪检测慢病毒的感染效率;实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹法分别检测sdha m RNA和SDHA蛋白表达水平;细胞计数法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果无相关sh RNA对照组和sdha sh RNA组慢病毒的感染效率均>80%。与无相关sh RNA对照组相比,感染sdha sh RNA慢病毒载体的BNL CL.2细胞sdha m RNA水平降低20倍左右(P<0.01),蛋白表达水平降低10倍左右(P<0.01);细胞增殖速度减慢,为无相关sh RNA对照组的70%左右(P<0.05);细胞周期发生改变,G0/G1期细胞百分率是无相关sh RNA对照组的1.17倍(P<0.01),G2/M期细胞百分率为1.37倍(P<0.01),S期细胞百分率为73.8%(P<0.01);但细胞凋亡率无明显差异。结论降低SDHA表达对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用与细胞周期阻滞相关,与细胞凋亡无明显关系。

线粒体NDUFB6基因单核苷酸多态与2型糖尿病关系的研究

目的:通过对线粒体基因NDUFB6[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 beta subcomplex]进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的检测,对高频率SNP进行基因分型,研究NDUFB6基因与2型糖尿病的相关性。方法:使用PCR+测序方法,以15个2型糖尿病患者和9个正常人为样本,对NDUFB6基因的启动子、外显子以及临近的内含子进行测序以确定该基因的SNP;对高频率的SNP,仍使用PCR+测序方法分别在192个2型糖尿病患者与正常人中进行基因分型。结果:总共发现NDUFB6基因的6个SNP,其中3个SNP出现频率较高。NDUFB6基因启动子的1个SNP(-1211C>T)在2型糖尿病人群与正常人群有显著差异(P<0.05)。结论:NDUFB6基因启动子的-1211C>T多态性可能与2型糖尿病的发病有关。

原发性胆汁性肝硬化患者血清AMA-M2及其靶抗原检测的阳性率对比

目的:针对PBC患者血清同时选用国产和进口两种试剂盒检测AMA-M2及其靶抗原:丙酮酸脱氢酶复合体E2亚单位(PDC-E2)及抗M2-3E等免疫指标,并对其敏感性进行对比,观察两种试剂盒检测有无差异及3个指标之间的敏感性。方法:对51例PBC确诊患者的血清标本,采用上海丰翔生物公司及欧蒙公司的ELISA试剂盒对待测血清分别进行了AMA-M2、抗M2-3E、PDC-E2等指标的检测,进行阳性率的比较。结果:51例患者血清标本中,国产试剂盒检测AMA-M2、抗M2-3E、PDC-E2的阳性率分别为72.5%、90.2%、72.5%,进口试剂盒检测AMA-M2、抗M2-3E、PDC-E2的阳性率分别为78.4%、92.2%、82.4%,经统计软件处理得到的结果P>0.05,无明显的统计学差异。针对42例AMA阳性的患者进行AMA-M2、抗M2-3E、PDC-E2检测时,国产试剂盒检测的阳性率分别为85.7%、95.2%和78.6%,进口试剂盒检测的阳性率分别为95.2%、100%、95.2%,经统计软件处理后得出P>0.05,两种试剂盒检测无明显的差别。结论:使用进口和国产两种试剂盒检测AMA-M2、PDC-E2、抗M2-3E的阳性率无明显的统计学差异。AMA-M2、PDC-E2、抗M2-3E 3个指标中阳性率最高的是抗M2-3E,AMA-M2和PDC-E2差异无统计学意义。

高通量测序揭示原发性胆汁性胆管炎患者的T细胞受体图谱特征

目的揭示原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者T细胞受体(T cell receptor,TCR)图谱特征,并揭示大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)抗原在PBC疾病的分子模拟机制。方法采用多重聚合酶链反应和免疫组库测序技术分析PBC患者和健康对照者的CD4^(+)和CD8^(+)记忆性TCRβ链互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)序列的多样性、氨基酸组成及疏水性、共有CDR3序列。体外诱导和扩增人PDC-E2_(163-176)(人PDC-E2)抗原相关T细胞和E.coli PDC-E2_(31-44/134-147/235-248)(E.coli PDC-E2)抗原相关T细胞,通过免疫组库测序技术鉴定人(和E.coli)PDC-E2抗原相关TCRβCDR3图谱,并分析其丰度变化。结果PBC患者组和健康对照组间的CD4^(+)记忆性T细胞、CD8^(+)记忆性T细胞TCRβCDR3免疫图谱多样性相似,D50指数[CD4^(+)记忆性T细胞:0.028±0.019比0.034±0.015;CD8^(+)记忆性T细胞:(1.86±2.70)×10^(-3)比(4.62±3.89)×10^(-4)]、Shannon指数(CD4^(+)记忆性T细胞:9.473±1.346比9.734±0.933;CD8^(+)记忆性T细胞:6.197±1.519比5.436±1.629)、Gini指数(CD4^(+)记忆性T细胞:0.786±0.048比0.760±0.036;CD8^(+)记忆性T细胞:0.920±0.047比0.939±0.025)等差异均无统计学意义(P均>0.05)。PBC组和健康对照组CD4^(+)记忆性T细胞和CD8^(+)记忆性T细胞间共有CDR3序列百分比差异无统计学意义[(6.47±1.43)%比(6.21±3.18)%;t=-0.21,P=0.84]。健康对照组和PBC组中序列长度为13、14、15的CDR3分子第6位和第7位氨基酸的组成频率中部分存在显著差异,疏水氨基酸组成频率近似。通过细胞培养和免疫组库测序鉴定了一系列人PDC-E2和E.coli PDC-E2抗原刺激后丰度显著上升的TCR序列。结论该研究鉴定出PBC疾病的TCR图谱特征,从TCR这个新视角阐述了E.coli在PBC疾病中的分子模拟机制。